A组轮状病毒研究动态   总被引：9，自引：0，他引：9  

倪艳秀  林继煌 《江苏农业学报》1998,14(1):60-64

概述了有关Ａ组轮状病毒的病原特性,基因组结构,病毒蛋白,诊断,血清分型,基因工程等方面国内外研究情况,Ａ组轮状病毒属呼肠孤病毒科,是经起婴幼儿和多种幼龄动物严重胃肠炎的重要病原之一,基因组由１１个片段的双股ＲＮＡ组成,分别编码１１种病毒蛋白（６种结构蛋白和５种非结构蛋白）轮状病毒的诊断方法有多种,其中电镜法,酶联免疫吸附试验,核酸聚丙烯酰胺凝胶电泳等３种方法最为常用,轮状病毒有两套血清学分类系统,  相似文献   

猪流行性腹泻病毒变异株RT-PCR检测方法的建立     

俞正玉  逄凤娇  孙冰  徐向伟  茅爱华  郭容利  范宝超  杜露平  温立斌  倪艳秀  何孔旺  李彬 《江苏农业科学》2018,(1)

猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)可引起猪呕吐、腹泻和脱水,各年龄段的猪均可发病,而哺乳仔猪发病和死亡最为严重。2010年末发生的仔猪腹泻综合征的主要病原为PEDV变异株。根据PEDV变异株S基因发生碱基缺失和插入的特征设计并合成了1对特异性引物,首次建立了PEDV变异株的RT-PCR检测方法。结果表明,所建立的PCR检测方法特异性强,不和PEDV经典毒株反应,也不与其他动物病原反应;敏感性较高,最低可检测10~(-3)ng/μL,且重复性较好。用该方法对2013—2014年我国华东地区猪场的318份临床样品进行检测,结果发现109份样品(34.3%)为PEDV变异株阳性,表明我国腹泻猪群中PEDV变异株感染较为普遍。本研究建立的PCR方法可以作为PEDV变异株在临床上的一种鉴别诊断技术。  相似文献   

猪链球菌2型次黄嘌呤核苷酸脱氢酶(IMPDH)重组蛋白的酶活性和免疫原性检测     

张雪寒  何孔旺  周俊明  倪艳秀  俞正玉  吕立新 《农业生物技术学报》2009,17(6)

通过PCR方法从猪链球菌2型(Streptococcus suis)05ZYH33分离株基因组中扩增出次黄嘌呤核苷酸脱氢酶基因(inosine 5-monophosphate dehydrogenase,impdh),长度1 064 bp.PCR产物和pET28a载体分别经过EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切,连接,成功地构建了重组表达质粒pET28a-impah,并转入大肠杆菌(Escherichia coli) BL21(DE3)中,经过1 mmol/L IPTG诱导获得表达,蛋白大小35kD.表达蛋白具有良好的抗原性和酶活性.蛋白经过亲和层析纯化后,在37℃,pH7.0～9.0表现出较强酶活性,NADH A_(340)介于0.662～0.816之间.  相似文献   

次黄嘌呤核苷酸脱氢酶(IMPDH)基因在猪链球菌不同血清型中的分布     

倪艳秀  周俊明  张雪寒  温立斌  吕立新  郭容利  俞正玉  茅爱华  何孔旺  陆承平 《江苏农业学报》2008,24(6)

参照GenBank上已发表的次黄嘌呤核甘酸脱氢酶（IMPDH）基因序列,设计引物,对34个猪链球菌不同血清型（缺12型）国际标准株进行了IMPDH基因的PCR检测及序列分析。结果表明：除17型、24型、32型、33型和34型外,其他29个血清型都为阳性,其核苷酸序列的同源性为88．3％～100．0％,所推导的蛋白质序列的同源性为94．7％～100．0％。为进一步研究IMPDH的生物学特性和功能奠定了基础。  相似文献   

猪链球菌2型IMPDH基因功能结构域的研究     

刘亚彬  何孔旺  倪艳秀  周俊明  张雪寒  陆承平 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2009,30(2)

在猪链球菌毒力相关基因orf2和mrp之间发现一个新的开放阅读框,经酶活性染色试验证实该阅读框编码的蛋白具有次黄嘌呤核苷酸脱氧酶(IMPDH)活性,该阅读框共计957 bp,编码319个氨基酸.经Interpro和PHD软件分析,推测该蛋白的功能结构域存在于9～798 bp基因片段所编码的多肽中,特对这790个碱基依次缺失,以找寻酶的催化部位和底物结合部位.4个缺失基因和全长基因经过基因克隆,表达出5种相应的蛋白.免疫印迹证实这5种蛋白可被猪链球菌2型(SS2)的抗血清识别,且其中的4种蛋白含有IMPDH单抗(1A8)识别表位;通过活性染色,初步确定了SS2中IMDPH的催化部位和底物结合部位.  相似文献   

猪链球菌2型溶血素基因的检测及其序列分析   总被引：5，自引：0，他引：5  

倪艳秀何家惠  何孔旺王继春 吕立新 《中国兽医科技》2002,32(11):11-14

根据猪链球菌2型的溶血素基因合成了一对可扩增长度为1496bP目的片段的引物，建立了检测溶血素基因的PCR方法。该方法对猪链球菌2型参考株SS2—N株的检测结果为阳性，对马链球菌善疫亚种(C群)参考株ATCC35246、分离株SESZ—Y、SESZ—T、SESZ—C和猪葡萄球菌、大肠埃希氏茵的检到结果均为阴性；用EcoR I内切酶进行酶切．获得了与预期结果一致的863bP和633bP的2个片段。经对SS2—1株的PCR产物进行测序及序列分析，表明其与1933株、P1／7株的核苷酸同源性分别为99．7％和100％。  相似文献   

肠出血性大肠杆菌O157:H7Intimin和Tir-Tccp蛋白质对小鼠的免疫保护性     

何孔旺  俞正玉  倪艳秀  卢维彩  叶青  吕立新  周俊明  姜平  张雪寒  李彬  栾晓婷  温立斌  王小敏  茅爱华  赵攀登  郭容利 《江苏农业学报》2011,(6):1300-1304

为了研究不同浓度的肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7 Intimin和Tir-Tccp蛋白质对接受1010 CFUEHEC O157:H7小鼠的免疫保护作用,将Intimin和Tir-Tccp蛋白质和佐剂充分乳化后,通过皮下多点注射免疫小鼠,对照组注射等量的磷酸盐缓冲液.共免疫2次,间隔14d,末次免疫后14d...  相似文献   

EHEC O157:H7二重PCR的建立及应用     

何孔旺  俞正玉  倪艳秀  叶青  吕立新  周俊明  姜平  张雪寒  李丽  李彬  栾晓婷  温立斌  王小敏  茅爱华  赵攀登  郭容利 《华北农学报》2011,(6):59-66

建立用于从临床样品中检测EHEC O157:H7的二重PCR方法.根据GenBank登录EHEC O157:H7序列,通过对菌体和鞭毛抗原保守性核苷酸序列的比对和分析,分别设计编码O抗原rfbE基因和编码H抗原fliC基因各1对特异性引物,建立二重PCR检测方法,并以EHEC O157:H7纯培养和模拟制备的3种阳性样...  相似文献   

我国长江流域PRRSV ORF3基因的遗传变异分析     

李彬  何孔旺  温立斌  茅爱华  王小敏  张雪寒  倪艳秀  周俊明  肖少波  陈焕春 《华北农学报》2011,26(3):204-209

为了确定猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行特点及变异规律,本研究首次对从2006年以来我国长江流域分离到的29株PRRSV的ORF3基因进行了克隆和序列测定,并与国外代表毒株和国内的高致病性PRRSV进行了比较分析.结果表明:所有分离毒株的ORF3基因均编码254个氨基酸,都属于美洲型PRRSV,推导的氨基酸同...  相似文献   

我国苏皖地区PRRSV Nsp2和ORF5基因的遗传变异分析     

李彬  何孔旺  温立斌  俞正玉  茅爱华  王小敏  张雪寒  郭容利  倪艳秀  周俊明  吕立新 《中国兽医学报》2011,31(7)

为了分析2009年安徽省和江苏省周边地区流行的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的遗传变异特征,采用RT—PCR方法对该地区分离的22株PRRSV的Nsp2和ORF5基因进行了扩增、克隆和测序,并进行序列分析。结果表明：22株PRRSV均属于美洲型毒株,其中21个毒株的Nsp2存在30个氨基酸的不连续缺失,与高致病性PRRSV有相同的缺失特征;而且此21个毒株的ORF5基因推导的氨基酸序列也发生多处突变,集中出现在毒力相关位点、抗原表位和糖基化位点序列中。只有HZNJ株与疫苗株的同源性较高。进化树分析显示,21个分离株与高致病性PRRSV处在同一进化分支,而HZNJ株与疫苗毒株有较近的亲缘关系,进一步说明高致病性PRRSV已成为该地区的优势流行毒株。  相似文献