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122.
为获得狂犬病病毒（RV）糖蛋白抗原，采用RT-PCR方法从狂犬病病毒ERA株中扩增了编码RV糖蛋白的全长基因，将其克隆于pMD18-T载体，再经PCR扩增出糖蛋白全长基因和膜外区基因，将其分别亚克隆至原核表达载体pET-28a（＋）、pET-32a（＋）和pGEX-4T-1中，经PCR和双酶切鉴定以及序列分析，表明已成功构建了重组质粒。将重组质粒转化到大肠埃希氏菌BL21（DE3）中进行表达，结果显示，克隆到pET-32a（＋）的糖蛋白膜外区基因表达量最高，目的蛋白表达量占菌体总蛋白的45．4％。经Western-blotting检测，不同载体表达的糖蛋白膜外区产物均可与兔抗RV多抗发生特异性反应，表明，重组蛋白具有良好的反应原性。 相似文献
123.
给10头猪分别按体重5mg／kg单剂量内服和肌注恩诺沙星，采集自然排泄的猪粪、尿，用高效液相一荧光法测定恩诺沙星及其代谢产物环丙沙星浓度，计算采样间隔内单位时间药物排泄量占给药量的比例，比较2种不同给药途径原形药物和环丙沙星的排泄规律。结果显示，2种给药途径对恩诺沙星和环丙沙星总排泄量的影响不显著，仅对药物排泄量与时间之间的关系产生影响；2种给药途径的试验猪粪样中恩诺沙星的排泄量均高于尿样；内服与肌注给药后96h内，粪和尿中检出的环丙沙星分别占给药量的3．93％和4．02％，累积排泄的恩诺沙星和环丙沙星之和分别占给药量的9．89％（内服）和9．57％（肌注）。 相似文献
124.
塔里木河流域水资源利用面临的主要问题 总被引：13，自引：9，他引：13
塔里木河流域由水引起的生态恶化,在我国内陆河流中具有代表性.研究表明:塔里木河流域近40 a源流来水量呈增加趋势,特别是近10 a增加更为明显.说明随着全球气候的变化,塔里木河源流区的水情得到好转.但在近10 a源流补给干流的水量增加不足1×108 m3/a, 特别是干流沿程各站点的径流量仍呈显著的线性递减趋势,表明塔里木河源流连续10 a的丰水期,并没有改变干流环境恶化的局面.在此基础上,总结塔里木河流域水资源利用存在的主要问题,并提出塔里木河流域水资源可持续利用的基本对策. 相似文献
125.
126.
应用RT-PCR方法从鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)JS株中扩增出VP2基因,并克隆入T-easy载体。序列测定分析结果表明IBDVJS株的VP2基因与国际标准强毒株的核苷酸序列同源性达98%,氨基酸序列同源性达99%以上。随后将VP2基因克隆入真核表达载体pcDNA3.1/zeo( ),构建成功真核表达质粒pcD-VP2,pcD-VP2体外转染COS-1细胞,能在COS-1细胞中表达。利用pcD-VP2质粒进行动物实验,结果表明雏鸡免疫14d后在体内可检测到特异性抗体,pcD-VP2的真核表达质粒二次免疫诱导鸡产生对IBDV强毒攻击的保护率为67%,这一结果提示VP2基因具有重要开发应用价值。 相似文献
127.
J亚群禽白血病病毒(ALV-J)ELISA检测方法的建立 总被引：2，自引：0，他引：2
利用抗J亚群禽白血病病毒（ALV—J）囊膜蛋白特异性单克隆抗体JE9，建立了检测ALV—J env抗原抗体免疫复合物的ELISA方法。应用该方法检测SPF鸡血清、鸡抗禽流感H9亚型阳性血清、鸡沙门氏菌阳性血清、鸡腺病毒阳性血清、鸡新城疫阳性血清．结果均为阴性，无交叉反应；抗ALV—J阳性血清与ALV—J特异性单克隆抗体JE9能相互阻断；ALV—J阳性血清经酸处理后，ELISA检测的D490差值明显下降。对部分攻毒鸡血清样本及田间ALV—J阳性血清样本进行电镜观察，可见ALV—J样病毒粒子及ALV—J样免疫复合物。经与间接免疫荧光（IFA）检测ALV—J env抗体结果比较表明，建立的ELISA方法与IFA方法两者具有较好的群体符合率，群体符合率为8／9。这些结果表明，本研究建立的ELISA方法在ALV—J的诊断中具有很好的应用前景。 相似文献
128.
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柔嫩艾美耳球虫表面抗原SAG2基因的克隆与表达 总被引：1，自引：0，他引：1
根据生物信息学预测的基因序列设计引物,应用RT-PCR方法从柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子总RNA扩增获得了鸡柔嫩艾美耳球虫表面抗原2(surface antigen 2,SAG2)基因序列,将其与pGEM-T easy载体连接后转化E.coliDH5α,筛选阳性克隆,以带有限制酶切位点的特异性引物用PCR方法扩增不含SAG2 N端信号肽序列的ORF序列后克隆至表达载体pET-32 a(+),构建了重组表达质粒pET-32 a(+)-SAG2,并将其转化至E.coliBL21(DE3)。经IPTG诱导,获得了SAG2重组抗原在大肠杆菌的高效表达,重组蛋白的表达量约占菌体总蛋白的35%,融合蛋白的分子量约为47 ku。菌体经超声处理后进行SDS-PAGE分析表明,表达蛋白以包涵体的形式存在。 相似文献
130.