EHEC O157:H7二重PCR的建立及应用     

何孔旺  俞正玉  倪艳秀  叶青  吕立新  周俊明  姜平  张雪寒  李丽  李彬  栾晓婷  温立斌  王小敏  茅爱华  赵攀登  郭容利 《华北农学报》2011,(6):59-66

建立用于从临床样品中检测EHEC O157:H7的二重PCR方法.根据GenBank登录EHEC O157:H7序列,通过对菌体和鞭毛抗原保守性核苷酸序列的比对和分析,分别设计编码O抗原rfbE基因和编码H抗原fliC基因各1对特异性引物,建立二重PCR检测方法,并以EHEC O157:H7纯培养和模拟制备的3种阳性样...  相似文献   

类猪圆环病毒2型因子P1与P2株全长基因组DNA分子克隆的构建   总被引：12，自引：0，他引：12  

温立斌  何孔旺  杨汉春 《江苏农业学报》2007,23(6):579-582

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遗传标志性基因Z0372 PCR检测肠出血大肠杆菌O157:H7     

张雪寒  张碧成  栾晓婷  汪伟  周俊明  何孔旺 《西南农业学报》2015,(1):409-413

肠出血性大肠杆菌(Enterohaemorrhagic E.coli,EHEC)O157:H7是重要的食源性病原菌,导致严重的人兽共患病。本文旨在建立以Z0372基因为靶基因的PCR检测技术,特异性检测EHEC O157:H7。以Z0372基因为靶序列,设计引物,建立Z0372-PCR,分析敏感性、特异性,并检测模拟阳性污染样品。结果表明,Z0372-PCR对纯培养物检测限103~104CFU/m L,模拟阳性污水样和肉样,增菌后检测限10~102CFU/m L(g)。非大肠杆菌O157和其他肠道病原全部为阴性扩增,只有肠出血性大肠杆菌O157:H7扩增出清晰而特异的条带。模拟阳性样品检测,条带特异,无任何杂带,测序与Gen Bank序列高度同源。因此,Z0372-PCR是特异性检测肠出血性大肠杆菌O157:H7的技术,操作简便,成本低廉,适合实验室肠道内容物、刮取物、污水和食品等的快速检测。  相似文献   

我国长江流域PRRSV ORF3基因的遗传变异分析     

李彬  何孔旺  温立斌  茅爱华  王小敏  张雪寒  倪艳秀  周俊明  肖少波  陈焕春 《华北农学报》2011,26(3):204-209

为了确定猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行特点及变异规律,本研究首次对从2006年以来我国长江流域分离到的29株PRRSV的ORF3基因进行了克隆和序列测定,并与国外代表毒株和国内的高致病性PRRSV进行了比较分析.结果表明:所有分离毒株的ORF3基因均编码254个氨基酸,都属于美洲型PRRSV,推导的氨基酸同...  相似文献   

我国动物轮状病毒研究概况   总被引：5，自引：0，他引：5  

何孔旺  何家惠 《江苏农业科学》1994,(4):61-63

我国动物轮状病毒研究概况何孔旺，何家惠（江苏省农科院牧医所南京２１００１４）一、流行病学自１９８２年我国首次分离到水牛轮状病毒后，已相继发现猪、犬、羊、奶牛、黄牛、牦牛、兔以及鸡轮状病毒。据对华东地区牛、猪血清中轮状病毒抗体的调查，奶牛、黄牛和猪群的...  相似文献   

我国苏皖地区PRRSV Nsp2和ORF5基因的遗传变异分析     

李彬  何孔旺  温立斌  俞正玉  茅爱华  王小敏  张雪寒  郭容利  倪艳秀  周俊明  吕立新 《中国兽医学报》2011,31(7)

为了分析2009年安徽省和江苏省周边地区流行的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的遗传变异特征,采用RT—PCR方法对该地区分离的22株PRRSV的Nsp2和ORF5基因进行了扩增、克隆和测序,并进行序列分析。结果表明：22株PRRSV均属于美洲型毒株,其中21个毒株的Nsp2存在30个氨基酸的不连续缺失,与高致病性PRRSV有相同的缺失特征;而且此21个毒株的ORF5基因推导的氨基酸序列也发生多处突变,集中出现在毒力相关位点、抗原表位和糖基化位点序列中。只有HZNJ株与疫苗株的同源性较高。进化树分析显示,21个分离株与高致病性PRRSV处在同一进化分支,而HZNJ株与疫苗毒株有较近的亲缘关系,进一步说明高致病性PRRSV已成为该地区的优势流行毒株。  相似文献   

猪链球菌2型SS2—1和SS2—H的培养稳定性检测     

倪艳秀  何孔旺等 《中国兽医科技》2002,32(4):29-30

将猪链球菌2型制苗候选菌株SS2－1和SS2－H在血平板上连续传代至第41代，并分别检测第1代，第11代，第21代，第31代和第41代菌株的菌落及细菌形态，生化特性，溶菌酶释放蛋白（MRP)几胞外因子（EF0等指标。结果，从第1代至第41代，2株细菌的菌落及细菌形态，生化特性，MRP和EF均没有发生变异，这表明SS2－1和SS2－H菌株培养稳定性较好，使用限定代次至少可达41代，可作为理想的疫苗生产菌株。  相似文献   

猪链球菌2型的PCR快速检测   总被引：37，自引：4，他引：33  

倪艳秀  何孔旺  王继春  何家惠  还红华  吕立新  陆承平  姚火春 《中国兽医学报》2002,22(5):474-476

根据猪链球菌 2型的荚膜多糖抗原基因 cps2 J,合成 1对可扩增长度为 6 75 bp目的片段的引物 ,建立了检测猪链球菌 2型的 PCR法。应用 PCR对 9株经玻片凝集试验检测为猪链球菌 2型的菌株进行了检测 ,均呈阳性 ;而对马链球菌兽疫亚种 (C群 )、猪葡萄球菌、猪丹毒杆菌、猪肺疫巴氏杆菌、猪肺炎霉形体等检测结果均呈阴性 ,表明了本方法的特异性。用此法对 88份正常猪的扁桃体样品的细菌分离物进行了检测 ,36份呈阳性 ,同时用玻片凝集试验进行对照检测 ,也全部呈阳性。而此法不需进行细菌的纯分离培养 ,即可用于猪链球菌 2型的快速诊断以及流行病学调查。  相似文献   

猪胸膜肺炎放线杆菌毒素IV基因体外表达与初步应用     

彭小华  何孔旺  陆承平何孔旺 《农业生物技术学报》2005,13(5)

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IBDV不同分离株VP2高变区的基因序列分析     

白文霞  鲍恩东  侯继波  何孔旺 《四川畜牧兽医》2004,31(12):26-27

对9个IBDV(传染性法氏囊病毒)分离株的、VP2高变区进行RT-PCR扩增、测序，得到约560bp长的片段分析比较9个IBDV分离株与参考毒株的VP2高变区（Aeel-Spell)的氨基酸序列，并构建进化树、结果表明，9个IBDV分离株是超强毒株，并且得出亚洲目前流行的、rvIBDVs与欧洲国家的vvIBDVs的进化关系很近。  相似文献