Taqman探针实时定量PCR检测猪伪狂犬病毒   总被引：4，自引：0，他引：4  

张雪寒  何孔旺  缪文凯  茅爱华  俞正玉 《江苏农业学报》2008,24(4)

选取猪伪狂犬病毒(PRV)基因组中gE基因,设计特异性引物和Taqman探针,利用实时定量PCR来定量检测PRV.利用PCR技术扩增猪伪狂犬病毒gE基因80 bp片段,并克隆到pMD18-T载体上,阳性重组质粒命名为pgE80.pgE80质粒进行10倍系列稀释,作为荧光PCR检测的标准模板,定量拷贝数,并绘制标准曲线.以提取的PRV、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸障碍综合症病毒(PRRSV)和传染性胃肠炎病毒(TGEV)的DNA作为模板,进行特异性检测.该实时定量PCR方法,标准曲线斜率为-0.37,R2=0.992,可以检测到20个拷贝数.PRV能被扩增出S型荧光曲线,而其它病毒均未能扩出.用PRV强毒肌肉注射仔猪,定量PCR比普通PCR更能灵敏而特异地检出呼吸道排毒和血液带毒.建立的实时定量PCR方法可用于临床样品快捷、准确、方便地检测.  相似文献   

次黄嘌呤核苷酸脱氢酶(IMPDH)基因在猪链球菌不同血清型中的分布     

倪艳秀  周俊明  张雪寒  温立斌  吕立新  郭容利  俞正玉  茅爱华  何孔旺  陆承平 《江苏农业学报》2008,24(6)

参照GenBank上已发表的次黄嘌呤核甘酸脱氢酶（IMPDH）基因序列,设计引物,对34个猪链球菌不同血清型（缺12型）国际标准株进行了IMPDH基因的PCR检测及序列分析。结果表明：除17型、24型、32型、33型和34型外,其他29个血清型都为阳性,其核苷酸序列的同源性为88．3％～100．0％,所推导的蛋白质序列的同源性为94．7％～100．0％。为进一步研究IMPDH的生物学特性和功能奠定了基础。  相似文献   

口服O157:H7(ΔhlyΔstxΔtoxB)能够减少O157:H7在山羊体内的定殖     

张雪寒  何孔旺  俞正玉  茅爱华 《华北农学报》2012,(3):123-125

为了明确O157:H7(ΔhlyΔstxΔtoxB)口服能否减少亲本株O157:H7在山羊体内的定殖。选用3月龄山羊,首先口服接种O157:H7(ΔhlyΔstxΔtoxB),分别于第7,14天再次口服接种亲本株O157:H7,监测亲本株O157:H7的排菌持续时间和排菌量。结果表明:O157:H7(ΔhlyΔstxΔtoxB)口服后第7天攻击亲本株O157:H7,第4天检测不到亲本株O157:H7的排菌;第14天攻击亲本株O157:H7,第9天检测不到亲本株O157:H7的排菌。直接口服亲本株O157:H7,排菌一直持续到第25天。口服O157:H7(ΔhlyΔstxΔtoxB)能够减少O157:H7在山羊体内的定殖,为研制EHECO157:H7基因缺失疫苗奠定了基础。  相似文献   

青藤碱、吴茱萸碱和川芎嗪抗细菌内毒素作用及其机制研究     

胡屹屹  何孔旺  俞正玉 《南京农业大学学报》2012,35(1):103-107

为探讨3种中药生物碱青藤碱、吴茱萸碱和川芎嗪对细菌内毒素(脂多糖,LPS)的治疗作用,ICR小鼠腹腔注射6 mg.kg-1的内毒素3 h后,根据分组情况分别再腹腔注射高(10 mg.kg-1)、中(5 mg.kg-1)、低(1 mg.kg-1)3个剂量的青藤碱、吴茱萸碱和川芎嗪,并设立LPS攻毒组、空白对照组和药物对照组。记录LPS攻毒后48 h内各组小鼠临床表现,测定体温、体质量及器官指数,检测血清中LPS和炎症因子的含量。结果显示:青藤碱和川芎嗪能显著抑制体温升高,吴茱萸碱能显著抑制体质量下降和血清中LPS水平升高,青藤碱能显著降低血清中炎症因子含量增加,吴茱萸碱和青藤碱能显著改善小肠肿大等病变。结论:青藤碱、吴茱萸碱和川芎嗪3种中药生物碱具有明显的抗细菌内毒素作用。  相似文献   

肠出血性大肠杆菌O157:H7Intimin和Tir-Tccp蛋白质对小鼠的免疫保护性     

何孔旺  俞正玉  倪艳秀  卢维彩  叶青  吕立新  周俊明  姜平  张雪寒  李彬  栾晓婷  温立斌  王小敏  茅爱华  赵攀登  郭容利 《江苏农业学报》2011,(6):1300-1304

为了研究不同浓度的肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7 Intimin和Tir-Tccp蛋白质对接受1010 CFUEHEC O157:H7小鼠的免疫保护作用,将Intimin和Tir-Tccp蛋白质和佐剂充分乳化后,通过皮下多点注射免疫小鼠,对照组注射等量的磷酸盐缓冲液.共免疫2次,间隔14d,末次免疫后14d...  相似文献   

EHEC O157:H7二重PCR的建立及应用     

何孔旺  俞正玉  倪艳秀  叶青  吕立新  周俊明  姜平  张雪寒  李丽  李彬  栾晓婷  温立斌  王小敏  茅爱华  赵攀登  郭容利 《华北农学报》2011,(6):59-66

建立用于从临床样品中检测EHEC O157:H7的二重PCR方法.根据GenBank登录EHEC O157:H7序列,通过对菌体和鞭毛抗原保守性核苷酸序列的比对和分析,分别设计编码O抗原rfbE基因和编码H抗原fliC基因各1对特异性引物,建立二重PCR检测方法,并以EHEC O157:H7纯培养和模拟制备的3种阳性样...  相似文献   

我国苏皖地区PRRSV Nsp2和ORF5基因的遗传变异分析     

李彬  何孔旺  温立斌  俞正玉  茅爱华  王小敏  张雪寒  郭容利  倪艳秀  周俊明  吕立新 《中国兽医学报》2011,31(7)

为了分析2009年安徽省和江苏省周边地区流行的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的遗传变异特征,采用RT—PCR方法对该地区分离的22株PRRSV的Nsp2和ORF5基因进行了扩增、克隆和测序,并进行序列分析。结果表明：22株PRRSV均属于美洲型毒株,其中21个毒株的Nsp2存在30个氨基酸的不连续缺失,与高致病性PRRSV有相同的缺失特征;而且此21个毒株的ORF5基因推导的氨基酸序列也发生多处突变,集中出现在毒力相关位点、抗原表位和糖基化位点序列中。只有HZNJ株与疫苗株的同源性较高。进化树分析显示,21个分离株与高致病性PRRSV处在同一进化分支,而HZNJ株与疫苗毒株有较近的亲缘关系,进一步说明高致病性PRRSV已成为该地区的优势流行毒株。  相似文献   

类猪圆环病毒 P1的感染及其分子特征     

温立斌  何孔旺  王凤芝  俞正玉  茅爱华  解建平 《华北农学报》2013,(5)

类猪圆环病毒P1是新发现的一种病原,能引起仔猪出现类似猪断奶后多系统衰竭综合征症状,是目前所知的具有最小基因组的病毒。为了解P1感染范围和基因组分子特征,采用PCR方法扩增P1全基因组,克隆测序后,应用生物信息学进行序列同源性比较及遗传进化分析。结果显示,P1已在我国猪场流行,分离株之间的核苷酸序列同源性为99．1％～100％,可分为2个亚分支;同时免疫组化结果也证实了P1在样品中的分布。  相似文献   

类猪圆环病毒因子P1感染对猪红细胞的影响   总被引：6，自引：1，他引：5  

温立斌  何孔旺  杨汉春  倪艳秀  张雪寒  俞正玉  茅爱华 《内蒙古农业科技》2009,(2):46-48

探讨类猪圆环病毒因子P1感染后,广西巴马小型猪发生贫血的类型,推断贫血发生的原因。12头30日龄的猪随机分成两组,每组6头,试验组经腹股沟淋巴结途径接种P1分子克隆。采用自动血液分析仪对接种后3d、8d、17d、24d、31d及40d猪的外周血进行红细胞各参数检测。统计分析结果显示P1感染后,与对照组相比,红细胞参数之间无差异的指标有RBC、HGB、HCT、MCV和MCHC等5项,而MCH在接种后17d明显降低,而RDW在31d增高明显。可见,猪感染类猪圆环病毒因子P1可导致小细胞低血色素性贫血。  相似文献   

猪流行性腹泻病毒变异株N基因的克隆及原核表达     

孙冰  李彬  何孔旺  郭容利  倪艳秀  俞正玉  姜平 《畜牧与兽医》2014,(5):72-76

猪流行性腹泻病(Porcine epidemic diarrhea,PED)是我国猪群近两年的多发疾病。本试验于2012年在安徽分离到一株猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)AH2012。为研究该变异株N基因的特性,采用RT-PCR方法获得了其N基因片段,经测序后与其他代表性的PEDV基因序列进行同源性比较和遗传进化分析,发现该毒株与近年来在我国流行的几株PEDV变异株同源性在99.3⁹9.5%之间,进化分析显示该毒株属于目前流行的PEDV变异株。将其克隆到表达载体pET28a(+)中,构建了重组质粒pET28a-N,经测序鉴定正确后,转化至感受态细胞BL21(DE3)中,并进行IPTG诱导表达。结果表明,重组菌可表达分子量为65 ku的融合蛋白,蛋白表达量较高,蛋白免疫印迹结果显示,表达的N蛋白能与PEDV阳性血清发生特异性的免疫反应,表明原核表达的N蛋白具有良好的反应原性。该研究可为猪流行性腹泻病的流行病学调查、诊断与防控方法的建立奠定基础。  相似文献