次黄嘌呤核苷酸脱氢酶(IMPDH)基因在猪链球菌不同血清型中的分布     

倪艳秀  周俊明  张雪寒  温立斌  吕立新  郭容利  俞正玉  茅爱华  何孔旺  陆承平 《江苏农业学报》2008,24(6)

参照GenBank上已发表的次黄嘌呤核甘酸脱氢酶（IMPDH）基因序列,设计引物,对34个猪链球菌不同血清型（缺12型）国际标准株进行了IMPDH基因的PCR检测及序列分析。结果表明：除17型、24型、32型、33型和34型外,其他29个血清型都为阳性,其核苷酸序列的同源性为88．3％～100．0％,所推导的蛋白质序列的同源性为94．7％～100．0％。为进一步研究IMPDH的生物学特性和功能奠定了基础。  相似文献   

猪链球菌2型IMPDH基因功能结构域的研究     

刘亚彬  何孔旺  倪艳秀  周俊明  张雪寒  陆承平 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2009,30(2)

在猪链球菌毒力相关基因orf2和mrp之间发现一个新的开放阅读框,经酶活性染色试验证实该阅读框编码的蛋白具有次黄嘌呤核苷酸脱氧酶(IMPDH)活性,该阅读框共计957 bp,编码319个氨基酸.经Interpro和PHD软件分析,推测该蛋白的功能结构域存在于9～798 bp基因片段所编码的多肽中,特对这790个碱基依次缺失,以找寻酶的催化部位和底物结合部位.4个缺失基因和全长基因经过基因克隆,表达出5种相应的蛋白.免疫印迹证实这5种蛋白可被猪链球菌2型(SS2)的抗血清识别,且其中的4种蛋白含有IMPDH单抗(1A8)识别表位;通过活性染色,初步确定了SS2中IMDPH的催化部位和底物结合部位.  相似文献   

肠出血性大肠杆菌强定殖株中新的双组份系统的鉴定     

杨永武  张昕杨  张雪寒  何孔旺  蔡文通  李干武 《畜牧与兽医》2018,(6)

为了比较7株肠出血性大肠杆菌O157∶H7的定殖能力,采用灌胃感染的方式,将7株肠出血性大肠杆菌分别感染小鼠。对粪便中的细菌以及盲肠内定殖的细菌进行分离、计数,发现牛源菌株C1的定殖能力最强,且定殖维持时间最长。对C1菌株的基因组序列分析得到1对功能未知的双组份调节系统(TCS),N5512/N5520。PCR检测显示N5512/N5520存在于绝大多数肠出血性大肠杆菌O157∶H7临床分离株(98.5%),而在其他致病型的大肠杆菌中没有检测到。本研究为大肠杆菌O157∶H7的定殖和致病机制研究奠定了基础。  相似文献   

口服O157:H7(ΔhlyΔstxΔtoxB)能够减少O157:H7在山羊体内的定殖     

张雪寒  何孔旺  俞正玉  茅爱华 《华北农学报》2012,(3):123-125

为了明确O157:H7(ΔhlyΔstxΔtoxB)口服能否减少亲本株O157:H7在山羊体内的定殖。选用3月龄山羊,首先口服接种O157:H7(ΔhlyΔstxΔtoxB),分别于第7,14天再次口服接种亲本株O157:H7,监测亲本株O157:H7的排菌持续时间和排菌量。结果表明:O157:H7(ΔhlyΔstxΔtoxB)口服后第7天攻击亲本株O157:H7,第4天检测不到亲本株O157:H7的排菌;第14天攻击亲本株O157:H7,第9天检测不到亲本株O157:H7的排菌。直接口服亲本株O157:H7,排菌一直持续到第25天。口服O157:H7(ΔhlyΔstxΔtoxB)能够减少O157:H7在山羊体内的定殖,为研制EHECO157:H7基因缺失疫苗奠定了基础。  相似文献   

肠出血性大肠杆菌O157:H7Intimin和Tir-Tccp蛋白质对小鼠的免疫保护性     

何孔旺  俞正玉  倪艳秀  卢维彩  叶青  吕立新  周俊明  姜平  张雪寒  李彬  栾晓婷  温立斌  王小敏  茅爱华  赵攀登  郭容利 《江苏农业学报》2011,(6):1300-1304

为了研究不同浓度的肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7 Intimin和Tir-Tccp蛋白质对接受1010 CFUEHEC O157:H7小鼠的免疫保护作用,将Intimin和Tir-Tccp蛋白质和佐剂充分乳化后,通过皮下多点注射免疫小鼠,对照组注射等量的磷酸盐缓冲液.共免疫2次,间隔14d,末次免疫后14d...  相似文献   

EHEC O157:H7二重PCR的建立及应用     

何孔旺  俞正玉  倪艳秀  叶青  吕立新  周俊明  姜平  张雪寒  李丽  李彬  栾晓婷  温立斌  王小敏  茅爱华  赵攀登  郭容利 《华北农学报》2011,(6):59-66

建立用于从临床样品中检测EHEC O157:H7的二重PCR方法.根据GenBank登录EHEC O157:H7序列,通过对菌体和鞭毛抗原保守性核苷酸序列的比对和分析,分别设计编码O抗原rfbE基因和编码H抗原fliC基因各1对特异性引物,建立二重PCR检测方法,并以EHEC O157:H7纯培养和模拟制备的3种阳性样...  相似文献   

遗传标志性基因Z0372 PCR检测肠出血大肠杆菌O157:H7     

张雪寒  张碧成  栾晓婷  汪伟  周俊明  何孔旺 《西南农业学报》2015,(1):409-413

肠出血性大肠杆菌(Enterohaemorrhagic E.coli,EHEC)O157:H7是重要的食源性病原菌,导致严重的人兽共患病。本文旨在建立以Z0372基因为靶基因的PCR检测技术,特异性检测EHEC O157:H7。以Z0372基因为靶序列,设计引物,建立Z0372-PCR,分析敏感性、特异性,并检测模拟阳性污染样品。结果表明,Z0372-PCR对纯培养物检测限103~104CFU/m L,模拟阳性污水样和肉样,增菌后检测限10~102CFU/m L(g)。非大肠杆菌O157和其他肠道病原全部为阴性扩增,只有肠出血性大肠杆菌O157:H7扩增出清晰而特异的条带。模拟阳性样品检测,条带特异,无任何杂带,测序与Gen Bank序列高度同源。因此,Z0372-PCR是特异性检测肠出血性大肠杆菌O157:H7的技术,操作简便,成本低廉,适合实验室肠道内容物、刮取物、污水和食品等的快速检测。  相似文献   

我国长江流域PRRSV ORF3基因的遗传变异分析     

李彬  何孔旺  温立斌  茅爱华  王小敏  张雪寒  倪艳秀  周俊明  肖少波  陈焕春 《华北农学报》2011,26(3):204-209

为了确定猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行特点及变异规律,本研究首次对从2006年以来我国长江流域分离到的29株PRRSV的ORF3基因进行了克隆和序列测定,并与国外代表毒株和国内的高致病性PRRSV进行了比较分析.结果表明:所有分离毒株的ORF3基因均编码254个氨基酸,都属于美洲型PRRSV,推导的氨基酸同...  相似文献   

我国苏皖地区PRRSV Nsp2和ORF5基因的遗传变异分析     

李彬  何孔旺  温立斌  俞正玉  茅爱华  王小敏  张雪寒  郭容利  倪艳秀  周俊明  吕立新 《中国兽医学报》2011,31(7)

为了分析2009年安徽省和江苏省周边地区流行的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的遗传变异特征,采用RT—PCR方法对该地区分离的22株PRRSV的Nsp2和ORF5基因进行了扩增、克隆和测序,并进行序列分析。结果表明：22株PRRSV均属于美洲型毒株,其中21个毒株的Nsp2存在30个氨基酸的不连续缺失,与高致病性PRRSV有相同的缺失特征;而且此21个毒株的ORF5基因推导的氨基酸序列也发生多处突变,集中出现在毒力相关位点、抗原表位和糖基化位点序列中。只有HZNJ株与疫苗株的同源性较高。进化树分析显示,21个分离株与高致病性PRRSV处在同一进化分支,而HZNJ株与疫苗毒株有较近的亲缘关系,进一步说明高致病性PRRSV已成为该地区的优势流行毒株。  相似文献   

快速检测大肠杆菌O157的LAMP方法的建立与评价   总被引：1，自引：0，他引：1  

张雪寒  何孔旺  叶青  倪艳秀  温立斌  李彬  王小敏  周俊明  郭容利 《中国兽医学报》2013,33(7)

利用DNA环介导恒温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP),以rfbE基因为靶序列,设计LAMP引物,建立LAMP反应体系与条件,进行灵敏度和特异性试验.结果显示,整个检测过程仅需1h即可通过肉眼直接目测试验结果.在灵敏度试验中,rfbE-LAMP对O157菌液和模拟阳性样品的最低检测限分别为1CFU/mL和1 CFU/g.在特异性试验中,以其他血清型大肠杆菌以及沙门杆菌基因组DNA为模板对rfbE基因进行检测,均没有发生非特异性扩增反应.试验建立的LAMP检测方法具有操作简单安全、检测灵敏度高、特异性高的特点,能够满足基层实验室、应急检测或现场监测等方面的使用需求.  相似文献