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流式细胞仪在免疫学研究中的应用 总被引：2，自引：0，他引：2
随着现代激光技术、电子检测技术和电子计算机技术等的迅速发展,流式细胞仪(FCM)在免疫学、生物学、遗传学、血液学、临床检验等领域中得到了更加广泛的应用。在免疫学研究领域,FCM以快速、灵活及定量等特点被广泛地应用于基础研究和临床治疗的各个方面,尤其是与单克隆抗体技术的结合,使其在免疫分型、分选、免疫监测、免疫细胞的系统发生及特性研究等方面发挥了重要的作用,成为现代免疫学研究不可缺少的工具。该文对近年来流式细胞仪在免疫学研究中的应用进展进行了综述。 相似文献
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试验旨在对多杀性巴氏杆菌recN基因进行克隆和原核表达,并对其表达蛋白进行生物信息学分析。参照GenBank中recN基因序列(登录号:CP003313.1)设计1对引物,通过PCR扩增获得目的基因片段,构建pET-28a(+)-recN重组质粒并转化E.coli DH5α感受态细胞,提取质粒进行酶切鉴定,将鉴定正确的重组质粒转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,对融合蛋白进行SDS-PAGE及Western blotting鉴定。结果表明,试验成功克隆了大小约为1 677 bp的recN基因序列,通过诱导表达的His-Tag融合蛋白大小约为66.94 ku,主要以包涵体形式存在。经生物信息学分析,recN蛋白的分子式为C2735H4428N786O855S16,消光系数为24 785,不稳定系数为43.99,属于不稳定蛋白;理论等电点(pI)为5.62,为酸性蛋白;总平均亲水性为-0.316,与试验表达的包涵体蛋白性质相同,即同为疏水性蛋白;recN蛋白在哺乳动物网织红细胞的半衰期为30 h,在酵母(体内)中的半衰期>20 h,在大肠杆菌(体内)中的半衰期>10 h;二级结构主要以α-螺旋(64.87%)及无规则卷曲(21.00%)为主;经疏水性分析,预测该蛋白有3个高疏水性区域和9个高亲水性区域。本试验结果为进一步探究多杀性巴氏杆菌recN基因的功能提供了参考依据。 相似文献
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为进一步研究Wzt蛋白在光滑型脂多糖合成路径中的作用,本试验利用PCR技术,以羊种布鲁氏菌16 M株基因组为模板,扩增出大小为759 bp的Wzt基因片段,将其连入pMD20-T载体,测序正确后构建重组质粒pET-28a-Wzt,转化E.coli BL21(DE3)工程菌,IPTG诱导其表达,最后用Western blotting鉴定蛋白。结果显示,扩增出的Wzt基因片段大小为759 bp,与GenBank中登录的羊种布鲁氏菌16 M株Wzt基因序列(登录号:AF047478.1)同源性为99.87%,证明成功克隆了Wzt基因,同时成功构建了pET-28a-Wzt原核表达载体,并在E.coli BL21(DE3)工程菌中表达了Wzt蛋白,诱导得到的融合蛋白大小约为30 ku,位于25～35 ku之间,与目的蛋白大小一致,结果表明成功表达了目的基因。 相似文献
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五指山小型猪APEX1基因cDNA的克隆及生物信息学分析 总被引：1，自引：0，他引：1
[目的]对五指山小型猪脱嘌呤嘧啶核酸内切酶cDNA进行克隆和生物信息学分析。[方法]以构建的五指山小型猪外周血白细胞cDNA文库为材料,采用菌落PCR方法,克隆得到APEX1基因全长cDNA,并运用生物信息学软件对该基因核苷酸序列及其编码蛋白的理化性质及二级结构等进行分析和预测。[结果]生物信息学分析表明,该cDNA全长1392bp,5′非翻译区长132bp,3′非翻译区长303bp,含有一个957bp的完整开放阅读框,编码318个氨基酸。该蛋白的分子量为35kD,等电点为8.05。比对分析表明,五指山小型猪APEX1基因的核酸序列及其氨基酸序列与人、小鼠、黑猩猩等哺乳动物具有较高的相似性。[结论]成功克隆了五指山小型猪A-PEX1基因cDNA,为进一步研究APEX1在动物体内的作用机制奠定了基础。 相似文献
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为了克隆羊传染性脓疱病毒CEV112基因并对其进行原核表达,根据GenBank中CEV112基因序列信息设计1对引物,以CEV基因组为模板,采用PCR扩增出1条大小为867bp的CEV112基因,将其连接到pMD20-T载体上,构建pMD20-T-CEV112重组质粒,转化到大肠埃希菌(E.coli)DH5α感受态细胞中,提取质粒进行酶切鉴定。鉴定正确后构建重组质粒pET28a-CEV112,转化到E.coli BL21(DE3)感受态细胞中。经IPTG诱导表达,表达产物用SDS-PAGE和Western blot进行分析。结果表明,成功构建了pET-28a-CEV112原核表达载体,并在E.coli BL21(DE3)中表达了CEV112基因,表达的融合蛋白大小约36ku,且主要以包涵体形式存在,为后续开展CEV112基因的功能研究奠定了基础。 相似文献
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通过克隆、表达海南原鸡程序性细胞死亡分子10(Programmed cell death10,PDCD10)基因,对其蛋白进行生物信息学分析。采用RT-PCR方法克隆得到海南原鸡PDCD10基因CDS区,将扩增产物与原核表达载体pET42a连接,构建pET42a-PDCD10重组质粒,经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE和Western blot分析;运用生物信息学软件对所获得基因的核苷酸序列进行分析,并预测其编码蛋白的理化性质及二级结构等。克隆获得了PDCD10639bp的CDS区核苷酸序列,融合蛋白分子量约为57ku,生物信息学分析发现,PDCD10CDS区包括1个639bp的开放读码框,编码212个氨基酸。该蛋白不含信号肽,无跨膜区,二级结构中存在大量α-螺旋。研究结果为进一步开展海南原鸡PDCD10的功能研究奠定了坚实的基础。 相似文献
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【目的】分离鉴定羊源产酸克雷伯菌,探讨产酸克雷伯菌对动物的致病机制。【方法】采集海南黑山羊肺脏组织样品进行细菌分离培养,通过生化试验及16S rRNA基因检测方法对分离株进行鉴定,并对分离菌进行药敏试验、小鼠致病性试验、RNA-Seq分析和差异表达基因(DEGs)分析。【结果】分离出1株革兰阴性短杆状细菌,胰蛋白胨大豆琼脂培养基上为光滑圆形的乳白色菌落。分离菌能分解葡萄糖、乳糖、蔗糖等几种碳水化合物,靛基质试验阳性。16S rRNA基因检测结果显示,分离株与已公布序列的相似性>99%,鉴定该分离菌为产酸克雷伯菌,命名为KOHN1。药敏试验结果显示,分离菌KOHN1对青霉素、苯唑青霉素、氨苄青霉素、羧苄青霉素、头孢氨苄、麦迪霉素、万古霉素和克林霉素具有耐药性,而对于其余21种抗菌药敏感。分离菌KOHN1攻毒小鼠后,肺脏组织病理学切片观察到小鼠肺部充血、水肿和渗出等急性炎症。DEGs富集分析显示,炎症细胞因子和趋化因子的DEGs在小鼠肺脏中大量表达。【结论】本试验成功分离出1株产酸克雷伯菌,分离株对小鼠致病性较强,免疫反应通路在病菌侵染过程中发挥着重要作用。该研究结果为后续产酸克雷伯... 相似文献
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羊源类鼻疽伯克霍尔德菌BPSL1467基因克隆、表达及其蛋白生物信息学分析 总被引：1，自引：1，他引：0
试验旨在克隆和表达羊源性类鼻疽伯克霍尔德菌（Burkholderia pseudomallei，B.pseudomallea）的BPSL1467基因，并对其表达的蛋白进行生物信息学分析。以羊源类鼻疽伯克霍尔德菌（BPHN1株）基因组为模板，参照GenBank中类鼻疽伯克霍尔德菌K96243标准株BPSL1467基因序列设计引物，PCR扩增获得目的基因片段，将所得片段与pET-28a（+）载体连接，构建pET-28a（+）-BPSL1467重组质粒。将鉴定正确的pET-28a（+）-BPSL1467重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，通过IPTG诱导表达，SDS-PAGE和Western blotting鉴定表达产物。使用DNAMAN、ProtParam、SOPMA和Protscale相关生物信息学软件对BPSL1467基因编码的氨基酸序列进行分析。结果显示，本试验成功克隆了462 bp的BPSL1467基因，诱导表达重组蛋白大小约为22 ku，主要以包涵体的形式存在。BPSL1467蛋白分子式为C763H1209N203O217S6，分子质量为16 890.58 u；其不稳定系数为33.95，属于稳定蛋白；理论等电点（pI）为8.85，为碱性蛋白；总平均疏水性（GRAVY）为-0.190，为亲水性蛋白。该蛋白的二级结构中以无规则卷曲和α-螺旋为主。本试验结果为深入研究羊源类鼻疽伯克霍尔德菌的BPSL1467基因的分子作用机理提供了参考依据。 相似文献