羊源雷氏普罗威斯登菌的分离鉴定     

曹瑞勇  聂鑫  李国华  杜丽  王凤阳 《现代畜牧兽医》2018,(6)

为了分离鉴定海南某养殖场黑山羊流鼻液、打喷嚏这一临床症状可能的致病菌,试验通过对病羊鼻拭子的无菌采集、病原菌分离培养后,利用革兰氏染色、细菌生化反应、细菌16S r RNA通用引物进行PCR反应等方法对分离得到的菌株进行鉴定。结果表明:对病羊鼻拭子培养后,得到的菌落形态一致;通过染色发现该菌为短杆状革兰氏阴性菌,进一步鉴定该菌为雷氏普罗威登斯菌。可引起海南黑山羊呼吸道疾病,为相应疾病的诊断和治疗奠基了一定的基础。  相似文献   

玉米播后粉籽和烂芽原因与防治     

王凤阳 《农民致富之友》2013,(21):42-42

1造成玉米播种后的粉籽和烂芽的原因1．1低温连续的低温对玉米种子的发芽势和发芽率都有一定程度的影响。相关实验表明：在平均10℃的低温情况下，种子的发芽势比对照（平均15℃）要下降9．0％．发芽率比对照降低至6．2％．以此可见，低温主要通过延迟出苗的方式作用于玉米种子。其次受低温影响，发芽率显著降低，导致大田的出苗率明显降低。  相似文献   

海南黄牛Cdc42 cDNA的克隆、表达及鉴定   总被引：2，自引：2，他引：0  

张冬琳  杜丽  成鹰  刘涛  雷明  满初日嘎  王凤阳 《中国畜牧兽医》2011,38(6):68-71

试验以构建的海南黄牛外周血白细胞cDNA文库为材料,采用菌落PCR的方法筛选出海南黄牛细胞分裂周期蛋白42(cell division cycle 42,Cdc42)全长cDNA,构建pET28a-Cdc42重组质粒,经IPTG诱导表达后,进行可溶性分析和蛋白纯化,并应用Western blotting对其进行鉴定。结果显示,海南黄牛Cdc42 cDNA的编码框由576个碱基组成,编码191个氨基酸,融合蛋白分子质量约为30 ku,该蛋白主要以包涵体形式存在;纯化后的蛋白经Western blotting检测,发现对应大小的特异性条带,表明本试验成功克隆Cdc42并表达。  相似文献   

贝类免疫机制研究进展   总被引：5，自引：0，他引：5  

杜丽  张巍  陆逵  王凤阳  王爱民 《动物医学进展》2008,29(3):77-81

贝类动物细胞免疫主要通过细胞的吞噬作用完成。溶酶体酶、凝集素、抗菌肽等体液免疫因子以杀菌、促进吞噬等方式参与贝类的免疫防御,阿片样活性肽、细胞因子、细胞激酶等是贝类免疫通信中的化学递质。化学递质通过介导免疫信号传导参与贝类的免疫防御,也是近年贝类的免疫研究的新热点。贝类生活环境中的各种因子能显著改变贝类的免疫机能,贝类对生态因子的敏感性使贝类的生态学研究成为人类等高等动物的生态免疫学研究模式。现代养殖业通过基因工程技术的手段来提高贝类的免疫力以适应养殖业的发展。  相似文献   

多杀性巴氏杆菌OmpA基因的原核表达及生物信息学分析     

郑义盈  李宝宝  黄海峰  张振兴  章泸尹  张萌萌  安琪  王成强  陈杰  李彬  陈珍  杜丽  王凤阳 《中国畜牧兽医》2019,46(7):1926-1934

本试验旨在探究羊源多杀性巴氏杆菌OmpA基因的原核表达及其生物信息学特征。以羊源多杀性巴氏杆菌HN-01株基因组为模板,设计特异性引物扩增OmpA基因;构建pET-28a （+）-OmpA重组质粒后转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞,将鉴定正确的重组菌经IPTG诱导表达;通过SDS-PAGE及Western blotting分析表达蛋白的特征,并运用生物信息学工具对OmpA基因序列进行分析。结果显示,羊源多杀性巴氏杆菌OmpA基因大小约为1 044 bp,该基因序列与HN-06株的同源性达89.72%。通过诱导后发现,pET-28a （+）-OmpA重组菌最佳诱导条件为1 mmol/L IPTG 37℃诱导6 h,表达的重组蛋白大小约为40 ku,以包涵体的形式存在。Western blotting结果显示,约40 ku的重组蛋白携带His标签。经生物信息学分析,OmpA分子式为C₁₆₈₄H₂₆₁₉N₄₅₇O₅₀₅S₃,属碱性疏水蛋白,其多肽链的1-21位氨基酸为信号肽区域,并具有多种结构。综上所述,OmpA可能具有特殊结构,与众多外膜蛋白结构特点相似。本研究构建了多杀性巴氏杆菌OmpA基因原核表达系统,优化诱导条件后能稳定获得OmpA重组蛋白,为进一步探究巴氏杆菌的致病机理提供理论依据。  相似文献   

羊源多杀性巴氏杆菌sodA基因的克隆、表达及其生物信息学分析     

安琪  黄海峰  张振兴  李宝宝  张萌萌  郑义盈  王成强  章泸尹  杨小健  曹瑞勇  聂鑫  杜丽  王凤阳 《中国畜牧兽医》2018,45(8):2067-2075

为了解羊源多杀性巴氏杆菌超氧化物歧化酶（SOD）的生物学功能,本试验对该菌sodA基因进行克隆及原核表达,并对克隆的sodA基因进行遗传进化树分析,对其表达的SOD蛋白进行生物信息学分析。参照GenBank中多杀性巴氏杆菌HN06株基因组中sodA基因序列信息设计引物进行PCR扩增,将产物与pET-28a（+）载体相连,构建pET-28a（+）-sodA重组质粒,将该质粒转化E.coli DH5α感受态细胞进行克隆,再转化E.coli BL21（DE3）感受态细胞进行表达,经IPTG诱导后对表达蛋白进行SDS-PAGE和Western blotting鉴定分析。结果显示,本试验成功扩增出大小为645 bp的目的片段,并表达出大小约28 ku的目的蛋白。遗传进化树分析表明,该基因与HN07（GenBank登录号：CP007040.1）和Pm70（GenBank登录号：AE004439.1）株亲缘关系较近,重组蛋白生物信息学分析显示,该融合蛋白为稳定的酸性亲水可溶性蛋白,分子式为C₁₀₈₅H₁₆₅₁N₂₉₃O₃₀₉S₉,分子质量为24 032.36 u,理论等电点为6.19,消光系数为45 170,不稳定系数为26.87（<40）,在哺乳动物网织红细胞的半衰期预计为30 h,疏水指数为82.15,总平均疏水性（GRAVY）为-0.282,二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主。以上研究结果为后续深入研究多杀性巴氏杆菌在羊体内的存活机制及研发预防巴氏杆菌病的疫苗提供了参考。  相似文献   

鸡沙门氏菌外膜蛋白亚单位疫苗的研究   总被引：5，自引：0，他引：5  

申之义王凤阳  李利萍苗儒关平原  李平安张七斤巴开明  郭世宏 《中国动物检疫》2001,18(2):26-28

用十二烷酰肌氨酸法提取鸡沙门氏菌外膜蛋白（OMP）作为抗原，制备免疫激发复合物型（Immunostimulating Complex,ISCOM）亚单位疫苗。ISCOM型OMP亚单位疫苗在电镜下可笼型颗粒结构，直径为60mm-120nm。无菌性检测结果为无菌，具有可靠的安全性。对3周龄雏鸡肌注接种，6周龄攻毒，接种80ugOMP／只ISCOM型亚单位疫苗的雏鸡以鸡白痢沙门氏菌或鼠伤寒沙门氏菌的攻击具有显著的免疫保护力。  相似文献   

鸡沙门氏菌外膜蛋白亚单位疫苗的研究——Ⅱ油乳剂型(OE)亚单位疫苗的研究     

申之义王凤阳  李利萍苗儒关平原  李平安张七斤巴开明  郭世宏 《中国动物检疫》2001,18(3):22-23

用十二烷酰肌氨酸法提取鸡沙门氏菌外膜蛋白，作为抗原，制备油乳剂型（Ｏｉｌ　Ｅｍｕｌｓｉｏｎ　ＯＥ） 亚单位疫苗。该亚单位疫苗为油包水（Ｗ／Ｏ）型，稳定性良好，安全可靠。对３周龄雏鸡用该疫苗肌注接种，６周龄攻毒，结果表明，接种 ８００ｕｇ ＯＭＰ／只油乳剂型亚单位疫苗的雏鸡对鸡白痢沙门氏菌或鼠伤寒沙门氏菌的攻击具有显著的免疫保护力。  相似文献   

鸡卵清蛋白基因5′调控序列表达载体的构建及其在鸡原代输卵管上皮细胞及鸡成纤维细胞的表达   总被引：18，自引：0，他引：18  

宇丽  赵君  张艳玲  刘斌  张守峰  王凤阳  赵宝全  扈荣良  殷震 《中国兽医学报》2001,21(1):21-24

将氯霉素乙酰转移酶（CAT）基因与鸡卵清蛋白基因上游调控序列融合，构建了pCAT-3-OVP(鸡卵清蛋白基因5′调控序列）表达载体。将构建的载体与脂质体混合后制备转染液，转染鸡原代输卵管上皮细胞和鸡成纤维细胞进行瞬时表达。结果表明，在鸡原代输卵管上皮细胞，转染后48h表达量最高，为0．67μg/L;而在鸡成纤维细胞，不论有无类固醇激素存在，均不表达。结果提示，在输卵管细胞中存在细胞特异性转录因子。  相似文献   

牛乳状瘤病毒13型pEGFP-E5-N1真核表达载体的构建及其在HEK293细胞中的表达     

庞峰  史巧芸  朱华培  徐开莲  赵天靖  李亚颖  彭冬梅  李国华  周海龙  王凤阳 《中国畜牧兽医》2015,42(5):1088-1092

基于海口市动物基因工程重点实验室获得的牛乳状瘤病毒13型(BPV-13)基因组序列信息(GenBank登录号:KM258443.2),以基因组为模板,扩增E5基因片段,将其连入pEGFP-N1质粒,构建重组质粒pEGFP-E5-N1,测序正确后瞬时转染HEK293细胞,应用荧光显微镜、流式细胞仪、Western blotting 鉴定融合蛋白的表达。结果显示,E5片段大小为135 bp;重组质粒pEGFP-E5-N1构建正确;荧光显微镜下观察转染重组质粒pEGFP-E5-N1的HEK293细胞,可见明亮的绿色荧光;流式细胞术分析结果显示,转染重组质粒pEGFP-E5-N1 48 h后,约55.59% 的细胞表达绿色荧光蛋白;Western blotting结果表明,表达的融合蛋白大小约为32 ku。本试验结果为下一步研究E5基因的作用机理奠定了基础。  相似文献