小反刍兽疫流行状况及分子诊断技术研究现状     

吴昊天  满初日嘎  王凤阳  李昌  金宁一  陈巧玲 《动物医学进展》2022,43(1):122-126

小反刍兽疫(PPR)是一种主要感染山羊和绵羊的传染病,病原为副黏病毒科麻疹病毒属的小反刍兽疫病毒(PPRV).PPRV基因组由6个基因组成,依据N和F基因可将PPRV分为4个谱系或者基因群,我国流行的PPRV属于谱系Ⅳ.2007年我国首次报道发生PPR疫情,在2014年大流行后,农业农村部加强了 PPR的防疫措施.目前...  相似文献   

鸡沙门氏菌外膜蛋白亚单位疫苗的研究——Ⅱ油乳剂型(OE)亚单位疫苗的研究     

申之义王凤阳  李利萍苗儒关平原  李平安张七斤巴开明  郭世宏 《中国动物检疫》2001,18(3):22-23

用十二烷酰肌氨酸法提取鸡沙门氏菌外膜蛋白，作为抗原，制备油乳剂型（Oil Emulsion OE)亚单位疫苗。该亚单位疫苗为油包水（W/O）型，稳定性良好，安全可靠。对3周龄雏鸡用该疫苗肌注接种，6周龄攻毒，结果表明，接种800ugOMP/只油乳剂型亚单位疫苗的雏鸡对鸡白痢沙门氏菌或鼠伤寒沙门氏菌的攻击具有显著的免疫保护力。  相似文献   

羊源多杀性巴氏杆菌重组酶聚合酶扩增诊断方法的建立     

刘昂  程逸文  安琪  张振兴  李彬  陈杰  陈巧玲  杜丽  满初日嘎  王凤阳  陈思 《中国畜牧兽医》2021,48(10):3752-3760

为建立适用于羊源多杀性巴氏杆菌的重组酶聚合酶扩增（RPA）诊断方法,本研究依据前期测序鉴定的羊源多杀性巴氏杆菌KMT1基因序列构建pET-28a （＋）-KMT1质粒标准品。设计基于RPA技术的特异性引物及RPA荧光探针,建立实时荧光RPA方法的最适反应体系。采用10倍梯度连续稀释的质粒标准品检测该RPA方法的敏感性并绘制相关性曲线;以10种不同菌株的基因组DNA为模板验证方法的特异性;用感染多杀性巴氏杆菌的山羊及小鼠组织样品对方法的可靠性进行验证。结果显示,本试验建立的实时荧光RPA方法最适反应温度为39 ℃,最佳引物为KMT1-Fe1,灵敏度达100拷贝/μL,检测下限为10拷贝/μL。与大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、副伤寒沙门氏菌、副溶血弧菌、绿脓杆菌、产酸克雷伯菌、布鲁氏菌S2株和鲍曼不动杆菌均无交叉反应。对13个组织样本进行检测,阳性率为76.9%,与实时荧光定量PCR检测结果的符合率达92.3%。综上所述,本研究建立的羊源多杀性巴氏杆菌实时荧光RPA方法具有特异性强、灵敏度高、可靠、快速便捷等特点,适用于多杀性巴氏杆菌的临床分子诊断。  相似文献   

类鼻疽伯克霍尔德菌groEL基因的克隆、原核表达及其蛋白的生物信息学分析   总被引：2，自引：2，他引：0  

黄海峰  张振兴  杨小健  曹瑞勇  李宝宝  聂鑫  朱姝  李国华  彭冬梅  李亚颖  王凤阳  杜丽 《中国畜牧兽医》2018,45(2):302-309

试验旨在对类鼻疽伯克霍尔德菌groEL基因进行克隆与原核表达，并对其表达蛋白进行生物信息学分析。提取该菌基因组DNA作为模板，参考GenBank中类鼻疽伯克霍尔德菌groEL基因序列，设计1对引物。通过PCR扩增得到大小为1 641 bp的groEL基因片段，将其连接至pMD19-T载体，构建pMD19-T-groEL重组质粒，经BamHⅠ和Hind Ⅲ双酶切鉴定正确后，构建重组质粒pET-28a（+）-groEL。将鉴定正确的pET-28a（+）-groEL质粒转化至E.coli BL21（DE3）感受态细胞中，经IPTG诱导表达，运用SDS-PAGE和Western blotting方法进行蛋白质鉴定，利用DNAMAN和BioEdit等软件进行生物信息学分析。结果发现，试验成功克隆了类鼻疽伯克霍尔德菌groEL基因并进行了蛋白表达，表达的融合蛋白大小约为64 ku，GroEL蛋白的分子式为C₄₅₁₀H₇₃₈₁N₁₆₄₁O₁₈₄₀S₅₂₁，原子总个数为15 893，消光系数为32 500，不稳定指数为40.31，亲水性平均值为0.901。GroEL蛋白二级结构中α-螺旋（Hh）、延伸链（Ee）、无规则卷曲（Cc）分别占48.71%、13.19%和38.10%。本试验结果为深入探究类鼻疽杆菌groEL基因的分子作用机理奠定了基础。  相似文献   

羊源类鼻疽伯克霍尔德菌BPSL1467基因克隆、表达及其蛋白生物信息学分析     

张萌萌  李宝宝  曹瑞勇  黄海峰  张振兴  杨小健  聂鑫  朱姝  王凤阳  杜丽 《中国畜牧兽医》2018,(9)

试验旨在克隆和表达羊源性类鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia pseudomallei,B.pseudomallea)的BPSL1467基因,并对其表达的蛋白进行生物信息学分析。以羊源类鼻疽伯克霍尔德菌(BPHN1株)基因组为模板,参照GenBank中类鼻疽伯克霍尔德菌K96243标准株BPSL1467基因序列设计引物,PCR扩增获得目的基因片段,将所得片段与pET-28a(+)载体连接,构建pET-28a(+)-BPSL1467重组质粒。将鉴定正确的pET-28a(+)-BPSL1467重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,通过IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blotting鉴定表达产物。使用DNAMAN、ProtParam、SOPMA和Protscale相关生物信息学软件对BPSL1467基因编码的氨基酸序列进行分析。结果显示,本试验成功克隆了462bp的BPSL1467基因,诱导表达重组蛋白大小约为22ku,主要以包涵体的形式存在。BPSL1467蛋白分子式为C763H1209N203O217S6,分子质量为16 890.58u;其不稳定系数为33.95,属于稳定蛋白;理论等电点(pI)为8.85,为碱性蛋白;总平均疏水性(GRAVY)为-0.190,为亲水性蛋白。该蛋白的二级结构中以无规则卷曲和α-螺旋为主。本试验结果为深入研究羊源类鼻疽伯克霍尔德菌的BPSL1467基因的分子作用机理提供了参考依据。  相似文献   

类鼻疽伯克霍尔德菌groEL基因的克隆、原核表达及其蛋白的生物信息学分析     

黄海峰  张振兴  杨小健  曹瑞勇  李宝宝  聂鑫  朱姝  李国华  彭冬梅  李亚颖  王凤阳  杜丽 《中国畜牧兽医》2018,(2)

试验旨在对类鼻疽伯克霍尔德菌groEL基因进行克隆与原核表达,并对其表达蛋白进行生物信息学分析。提取该菌基因组DNA作为模板,参考GenBank中类鼻疽伯克霍尔德菌groEL基因序列,设计1对引物。通过PCR扩增得到大小为1 641bp的groEL基因片段,将其连接至pMD19-T载体,构建pMD19-T-groEL重组质粒,经BamHⅠ和HindⅢ双酶切鉴定正确后,构建重组质粒pET-28a(+)-groEL。将鉴定正确的pET-28a(+)-groEL质粒转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导表达,运用SDS-PAGE和Western blotting方法进行蛋白质鉴定,利用DNAMAN和BioEdit等软件进行生物信息学分析。结果发现,试验成功克隆了类鼻疽伯克霍尔德菌groEL基因并进行了蛋白表达,表达的融合蛋白大小约为64 ku,GroEL蛋白的分子式为C4510H7381N1641O1840S521,原子总个数为15 893,消光系数为32 500,不稳定指数为40.31,亲水性平均值为0.901。GroEL蛋白二级结构中α-螺旋(Hh)、延伸链(Ee)、无规则卷曲(Cc)分别占48.71%、13.19%和38.10%。本试验结果为深入探究类鼻疽杆菌groEL基因的分子作用机理奠定了基础。  相似文献   

转基因表达的时空调控     

杜丽  孟庆文  满处日嘎  王凤阳 《动物医学进展》2010,31(10)

建立转基因表达的时空调控系统,对于分析基因在组织或发育阶段的特异表达,以及建立研究外源基因表达、调控的动物模型等方面,具有极其重要的应用价值。论文综述了近年来基于四环素(tetracy-cline,Tet)的调控系统,基于酵母转录激活蛋白,小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)和RNA干扰(RNA interference,RNAi)等转基因表达的时空调控技术研究进展。  相似文献   

海南坡鹿MD2cDNA的克隆及其生物信息学分析     

杜丽  谢少林  成鹰  张晓茹  匡文华  焦寒伟  张冬琳  郝永昌  雷明  刘涛  王凤阳 《热带生物学报》2011,(1):1-5

以海南坡鹿外周血白细胞总RNA为模板,利用RT-PCR技术,获得海南坡鹿MD2全长cDNA,并对其进行较系统的生物信息学分析,内容包括序列特征分析、同源性分析、编码蛋白质理化性质及结构预测.结果表明:海南坡鹿MD2的CDS序列长度为486 bp,编码160个氨基酸,与黄牛、人、欧洲兔、褐家鼠的核苷酸序列同源性分别为98...  相似文献   

水牛Cdc42cDNA的克隆与生物信息学分析     

张晓茹  匡文华  成鹰  杜丽  雷明  焦寒伟  张冬琳  郝永昌  祁超  王凤阳 《热带生物学报》2011,(4):349-354

通过RT-PCR扩增得到水牛细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)cDNA序列,将扩增产物与pMD20-T载体连接,重组质粒经PCR、酶切鉴定后测序并进行生物信息学分析.结果表明:克隆得到的序列全长626 bp,含有1个大小为576 bp的开放阅读框,共编码191个氨基酸,相对分子质量为21.3×103,理论等电点为6.1...  相似文献   

海南坡鹿MYD88cDNA的克隆及其生物信息学分析     

满初日嘎  谢少林  杜丽  成鹰  张冬琳  王凤阳 《吉林农业大学学报》2011,33(3):319-323

以海南坡鹿外周血白细胞为材料,利用RT-PCR技术获得海南坡鹿髓样分化因子(myeloid diffrentiation factor 88,MYD88)基因完整的CDS序列,并对其进行了较系统的生物信息学分析.结果表明:该基因CDS区含有89l bp,编码296个氨基酸,该分子具有高度的进化保守性,编码蛋白无跨膜区,...  相似文献