肠毒素性大肠杆菌mSTⅠ-linker-LTB融合蛋白的表达及免疫保护试验   总被引：1，自引：0，他引：1  

倪艳秀  何孔旺  俞正玉  张雪寒  王芳  郭容利 《农业生物技术学报》2007,15(3):383-387

用分子生物学方法拼接成肠毒素性大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)mSTⅠ-linker-LTB融合基因,并定向克隆到pET-32α( )中,转化宿主菌(E.coli)BL21(DE3)。重组菌经1mmolLIPTG诱导,在30℃下,5h时表达产物(分子量约为37kD)达到高峰,表达量约占菌体总蛋白30%。表达产物主要存在包涵体中,经Westernblot鉴定呈阳性。乳鼠胃内接种实验证明,融合蛋白无野生型STⅠ的生物毒性。将融合蛋白与矿物油乳化后免疫ICR小鼠,对K88、K99、987P和F41的保护率分别为83.3%、100%、66.7%和66.7%。  相似文献   

TUNEL法检测类猪圆环病毒2型因子P1诱导猪免疫器官细胞凋亡的研究   总被引：4，自引：2，他引：2  

温立斌  何孔旺  杨汉春  王玉然  董美响 《华北农学报》2008,23(Z2)

研究类猪圆环病毒2型因子P1体内诱导的细胞凋亡作用。将P1分子克隆接种普通仔猪,用原位末端标记技术(TUNEL)检测猪的扁桃体、脾脏、腹股沟淋巴结等免疫器官细胞的凋亡情况。猪感染P1后21和35 d的扁桃体、脾脏和腹股沟淋巴结等免疫器官细胞出现了凋亡。P1可能引起猪的免疫抑制。  相似文献   

猪传染性胃肠炎病毒弱毒株STC3细胞培养特性及致病性研究   总被引：7，自引：0，他引：7  

何孔旺  钱永清等 《中国兽医科技》2001,31(8):8-9

从美国引进的猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）弱毒株STC3在ST、PK15及猪肾原代细胞上均能增殖，并产生明显的致细胞病变作用（CPE），其中以ST细胞上的CPE最为迅速、明显，于接毒后20－24h CPE即可达90％－100％，而在PK15及猪肾原代细胞上CPE形成较迟一些，在42－48h可达80％－90％。STC3在ST、PK15及猪肾原代细胞上的TCID50分别为10^-7.67/mL、10^-5.63/mL和10^-5.90/mL。用较大剂量STC3细胞毒经口接种被剥夺初乳的初生仔猪，仅表现为一过性的腹泻而不引起死亡，对3日龄人工哺乳的仔猪则已完全丧失了致病力，但荧光抗体检查结果显示病毒在小肠粘膜上皮细胞中仍有增殖。由此可，STC3可能是1株能很好诱导猪体免疫的TGEV弱毒株。  相似文献   

猪流行性腹泻研究概况   总被引：21，自引：2，他引：19  

倪艳秀  林继煌  何孔旺  还红华 《畜牧与兽医》2001,33(1):38-40

概述了猪流行性腹泻病毒的病毒特性、基因组结构及主要病毒蛋白、诊断方法、预防和治疗等方面国内外研究情况。  相似文献   

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌毒素Ⅲ基因克隆、序列分析及表达   总被引：2，自引：0，他引：2  

王芳  何孔旺 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2004,25(3):19-21

参照已知猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清2型菌株毒素Ⅲ(ApxⅢA)序列设计1对特异性引物，经PCR扩增得到目的片段约1096bp，然后克隆人pMD18＼|T载体中，经测序比较，与标准序列的核苷酸同源性达98．5％。从T-载体中切下目的片段后，定向克隆人pET32a( )中，转化BL21(DE3)，经诱导后，SDS—PAGE结果显示，毒素Ⅲ得到高效表达，Western—blotting检测呈阳性。这为研制猪传染性胸膜肺炎新型疫苗和建立有效的诊断方法奠定了基础。  相似文献   

类圆环病毒因子P1结构蛋白表位肽抗体的制备及应用   总被引：3，自引：0，他引：3  

温立斌  何孔旺  杨汉春  刘梦雅 《华北农学报》2011,(5):83-86

旨为制备兔抗类猪圆环病毒因子P1的特异性抗体,对其在病原学方面的应用进行研究.采用人工合成选定的表位肽,将其与载体蛋白KLH偶联后免疫新西兰大白兔制备抗P1多克隆抗体,通过免疫组化对该多抗与P1的反应性进行检测.获得了抗P1多克隆抗体;免疫组化结果显示抗体可与P1病毒蛋白出现特异性反应.偶联后的P1表位肽具有免疫原性,...  相似文献   

安徽省界首地区牛轮状病毒腹泻病的初步研究     

何孔旺  江杰元  林继煌  沈江萍  黄宝顺 《江苏农业科学》1988,(11)

近年来,安徽省界首县连续发生黄牛犊流行性腹泻,严重地影响了当地养牛业的发展,据初略统计,1984年全县共产犊12800头,发生腹泻的就有11500余头,发病率在90％左右。1985年以来,我们对该地区犊牛腹泻粪样进行了病原学检查,并收集无腹泻症状牛(含犊牛及成年牛)血清样品进行轮状病毒抗体检测。现将试验结果报告如下。  相似文献   

2013～2014年猪嵴病毒分子检测和3D基因遗传变异分析（英文）     

倪艳秀  何孔旺  茅爱华  俞正玉  李彬  郭容利  吕立新  祝昊丹  周俊明  温立斌  张雪寒  王小敏  汪伟 《农业科学与技术》2015,(3):442-446

[目的]为调查猪嵴病毒(PKV)在我国哺乳仔猪中的流行和变异情况。[方法]采集2013~2014年我国5个省份27个猪场224份哺乳仔猪腹泻粪样,采用RT-PCR方法对PKV的3D基因进行检测,并对其中的29个PKV3D基因进行序列测定和遗传变异分析。[结果]腹泻粪样中PKV总阳性率为65.18%(146/224),猪场PKV总阳性率为85.2%(23/27);29个PKV3D基因与国内外6株其他PKV株相关序列的核苷酸同源性为87.0%~100%,所推导的氨基酸序列同源性为92.7%~100%。[结论]我国哺乳仔猪中普遍存在PKV感染,PKV 3D基因呈现多样性。  相似文献   

猪伪狂犬病病毒流行株gE基因的遗传变异分析及其对仔猪致病性的初步研究     

郭容利  王继春  茅爱华  温立斌  李彬  倪艳秀  何孔旺 《农业科学与技术》2015,(5)

[目的]了解我国猪伪狂犬病病毒流行株 gE基因的遗传变异特性以及其对仔猪的致病性。[方法]利用 Vero 细胞从疑似伪狂犬病病毒（PRV）引起的流产死胎猪的脑组织进行病毒分离。通过PCR进行初步鉴定,对分离株 gE基因序列进行系统进化树分析以及该病毒对6周龄左右仔猪的致病性试验。[结果]成功分离到1株 PRV 毒株,命名为 PRV N5B 株,该病毒能在 Vero 细胞上增值,在15代 TCID50达到107.125/0.1 ml;PCR检测可扩增出特异性条带;gE基因全长1740 bp,系统进化树分析表明分离株与2012年以来新流行的毒株属于同一个相对独立的分支,核苷酸同源性高达99.7%～100%;而与以往发表的国内外相关序列比较,在2个不同的位置分别有3个连续碱基的插入。动物试验表明,2 ml的该病毒（106/0.1 ml）滴鼻接种能使6周龄左右仔猪100%死亡。[结论]该研究中的 PRV N5B分离株 gE基因的遗传变异特性以及其对仔猪的致病性试验对于目前流行的猪伪狂犬病的防控及新的疫苗的研发提供理论依据。  相似文献   

猪链球菌4型GalR蛋白的生物信息学分析及原核表达     

孙珂  祝昊丹  周俊明  王丹丹  俞正玉  吕立新  何孔旺  李彬  倪艳秀 《中国畜牧兽医》2021,48(2):443-449

试验旨在了解猪链球菌4型（Streptococcus suis serotype 4，SS4）转录调控因子GalR蛋白生物学信息并对其进行原核表达。使用相关生物信息学分析网站对SS4 SH1510菌株GalR蛋白进行序列同源性和功能结构域检索，并对信号肽、跨膜区和等电点进行预测；同时，对SS4 SH1510菌株GalR基因进行扩增、原核表达、纯化，并用SDS-PAGE分析重组蛋白的可溶性，用Western blotting鉴定重组蛋白的反应原性。氨基酸序列比对显示，SH1510菌株GalR蛋白与变形链球菌、无乳链球菌、绿脓杆菌、马链球菌兽疫亚种、肺炎链球菌、口腔链球菌及李斯特菌的GalR家族蛋白的氨基酸序列分别具有57%、56%、55%、55%、52%、52%和49%的同源性；结构域检索发现GalR蛋白N-末端具有螺旋-转角-螺旋（helix-turn-helix，HTH）基序的小DNA结合结构域，C-末端具有Ⅰ型周质结合蛋白折叠的调节配体结合域，在这两个功能结构域的中间含有一个约18-氨基酸的连接子；GalR蛋白无信号肽，无跨膜区，等电点为5.10。SDS-PAGE分析显示，GalR蛋白绝大部分表达在上清，分子质量为56 ku；Western blotting鉴定结果显示，His单克隆抗体和粗制SS4多克隆抗体兔血清能特异性识别可溶性GalR蛋白。本研究对GalR蛋白进行了生物信息学分析并成功地表达和纯化了GalR蛋白，为进一步研究GalR蛋白在SS4中的作用奠定了基础。  相似文献