兔出血症病毒衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达及对家兔的免疫保护效果   总被引：2，自引：1，他引：1  

王芳  胡波  任雪枫  范志宇  杨龙圣  徐为中  张则斌  何孔旺 《畜牧兽医学报》2008,39(10)

用RT—PCR方法扩增兔出血症病毒（RHDV）衣壳蛋白VP60基因,通过克隆、转化得到重组穿梭载体Bacmid—VP60,用此质粒转染Sf9昆虫细胞,得到重组病毒rAcV—Bac—VP60,经RT—PCR、IFA、SDS-PAGE、Western blotting、HA和HI鉴定,结果显示重组VP60蛋白在Sf9昆虫细胞中得到表达。在不加任何佐剂的情况下,用表达的蛋白免疫3月龄非RHD免疫兔,结果显示,免疫后21天,兔体内可产生抗RHDV抗体,抗体血凝抑制效价为2^6～2^7,该抗体可以抵抗血凝效价为2^10致死剂量RHDV强毒的攻击,本研究为兔病毒性出血症基因工程疫苗的研制奠定了基础。  相似文献   

不同源传染性法氏囊病病毒的分离及其生物学特性分析     

王永山  周宗安  刘玉  侯继波  何孔旺  丁铲  邓小昭  高健  刁振宇 《动物医学进展》2003,24(4):84-86

用传染性法氏囊病病毒 ( IBDV)单克隆抗体夹心抑制 EL ISA对麻雀、鸭、鹅进行了血清学调查 ,阳性率分别为 7.4% ( 4/ 54 )、95.5%( 3 6 3 / 3 80 )、9.4% ( 1 1 / 1 1 7)。从 IBD阳性麻雀、IBD病鸡以及同群饲养的鸭、鹅体内分离到了 4株不同源病毒 ,IBDV单克隆抗体夹心 EL ISA、Dig-标记 IBDV c DNA探针斑点杂交和交叉中和试验证明该病毒均为 IBDV血清 型。病毒可适应并致死鸡胚 ,适应于鸡胚成纤维细胞并产生细胞病变效应 ( CPE)。病毒代谢抑制试验证明其基因组为 RNA,病毒对乙醚不敏感 ,p H2 .0不能灭活病毒 ,p H 1 2可使病毒失去感染性 ,56℃作用 3 h病毒仍有活性 ,70℃ 1 h可灭活病毒。以上结果表明 ,从鸡、麻雀、鸭、鹅体内分离到的 IBDV生物学性质比较稳定且非常相似。本研究结果提示 IBDV已在我国广泛流行 ,麻雀、鸭、鹅可成为 IBDV携带者或传染源 ,在 IB-DV传播和生态变异中起重要作用  相似文献   

猪链球菌病双重PCR诊断方法的建立     

马清霞何孔旺  陆承平 《中国兽医科技》2007,37(8):700-704

根据猪链球菌2型荚膜多糖和马链球菌兽疫亚种类M蛋白的保守区序列分别设计了2对简并引物,建立了一种能同时检测猪链球菌2型和马链球菌兽疫亚种的双重PCR方法。结果显示,该双重PCR能从100个细菌的混合纯培养物中扩增出2条目的片段。而且可以直接从病料组织中检测到相应的病原菌。用建立的双重PCR方法和细菌分离培养法平行检测人工感染的组织病料,PCR方法与细菌培养法的阳性检出率基本一致,但PCR方法的特异性好、敏感性高,简便易行,可以用于猪链球菌病的流行病学调查和实验室的快速鉴别诊断。  相似文献   

猪链球菌2型及其毒力因子检测多重PCR的建立与应用   总被引：8，自引：3，他引：8  

马清霞  何孔旺  陆承平 《中国兽医学报》2006,26(1):28-31

根据相关文献设计并合成引物，建立了能同时检测猪链球菌2型（cps）及其重要毒力因子溶菌酶释放蛋白（mrp）和细胞外因子（epf）的多重PCR方法。目的片段的大小分别为885bp（mrp）、675bp（cps）和443bp（epf）。对参考菌株、人工攻毒病料和临床收集病料的检测结果显示，该多重PCR特异性强、敏感性高，可直接从临床病料中检测出猪链球菌2型，并能鉴定其毒力因子表型。  相似文献   

应用多重RT-PCR方法检测158例猪粪样中的两种冠状病毒   总被引：7，自引：0，他引：7  

杨群  何孔旺  陆承平 《中国预防兽医学报》2006,28(4):431-435

根据GenBank上发表的猪流行性腹泻（PEDV）和猪传染性胃肠炎（TGEV）基因序列，针对其PEDVM（膜蛋白）基因保守区及TGEV的S基因（纤突蛋白基因）5’端保守区，各设计一对引物，可特异扩增出目的条带大小分别为467bp和1062bp。用上述两对引物对同一样品中的PEDV和TGEV可进行鉴别检测，对猪的其它病毒和细菌的PCR扩增结果均为阴性。敏感性测定结果表明：该双重PCR方法能检出PEDV1pg、TGEV0．1pg的模板。同时采用建立的多重RT-PCR及韩国引进的PEDV和TGEV病毒抗原快速诊断试剂盒检测结果显示：此多重RT-PCR方法特异性强，且较快速试剂盒更加敏感。应用多重RT-PCR对158份临床猪粪样的检测结果表明：我国很多猪场普遍存在TGEV和PEDV，尤其以PEDV污染更为严重，感染率达53．2％，但双重感染率较低，仅为4，4％。  相似文献   

猪链球菌2型溶血素基因的检测及其序列分析   总被引：5，自引：0，他引：5  

倪艳秀何家惠  何孔旺王继春 吕立新 《中国兽医科技》2002,32(11):11-14

根据猪链球菌2型的溶血素基因合成了一对可扩增长度为1496bP目的片段的引物，建立了检测溶血素基因的PCR方法。该方法对猪链球菌2型参考株SS2—N株的检测结果为阳性，对马链球菌善疫亚种(C群)参考株ATCC35246、分离株SESZ—Y、SESZ—T、SESZ—C和猪葡萄球菌、大肠埃希氏茵的检到结果均为阴性；用EcoR I内切酶进行酶切．获得了与预期结果一致的863bP和633bP的2个片段。经对SS2—1株的PCR产物进行测序及序列分析，表明其与1933株、P1／7株的核苷酸同源性分别为99．7％和100％。  相似文献   

猪链球菌2型的致病特性与毒力因子   总被引：27，自引：3，他引：24  

何孔旺  陆承平 《中国兽医科技》2000,30(9):17-20

介绍了猪链球菌２型对猪人、人、其他动物及实验动物的致病特性;概述了猪链球菌溶菌酶释放蛋白（ＭＲＰ）、细胞外蛋白因子（ＥＦ）、溶血素、英膜多糖、４４ｋｂ蛋白和ＩｇＧ结合蛋白及纤毛、粘着素等毒力因子的研究概况。  相似文献   

2017—2019年华东地区猪场主要病毒性腹泻病原调查   总被引：1，自引：0，他引：1  

常新见  周金柱  殷杰  牛贝贝  范宝超  郭容利  赵永祥  牛家强  何孔旺  李彬 《畜牧兽医学报》2020,51(12):3141-3150

本研究旨在了解当前我国华东地区引起猪腹泻的主要病毒性腹泻病原的流行情况，为该地区更好地开展猪腹泻病毒的防控工作提供临床数据。分别采用RT-PCR检测方法对2017—2019年华东地区35个场别594份临床样品检测猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus，PEDV）、猪轮状病毒（porcine rotavirus，PoRV）、猪传染性胃肠炎病毒（transmissible gastroenteritis virus of swine，TGEV）、猪丁型冠状病毒（porcine deltacoronavirus，PDCoV）和猪萨佩罗病毒（porcine Sapelovirus，PSV）等5种猪的病毒性腹泻病原，并对其阳性率及混合感染情况进行统计分析。结果显示，2017—2019年的PEDV、PDCoV、PoRV、TGEV及PSV的平均阳性率为分别为62.6%（372/594）、27.9%（166/594）、16.8%（100/594）、13.3%（79/594）及3.87%（23/594），二重混合感染中以PEDV+PDCoV及PEDV+PoRV为主，平均混合感染率分别为22.4%（133/594）和13.3%（79/594）。三重感染中以PEDV+PoRV+PDCoV混合感染为主，感染率为7.58%（45/594），未见四重及五重病原混合感染。2017—2019年PEDV平均阳性检出率最高，且常与PoRV及PDCoV发生混合感染，是当前华东地区猪病毒性腹泻类疫病的防控重点。TGEV和PDCoV在健康育肥猪及母猪的检出率中占比较大，表明隐性感染变得普遍，值得养殖户关注。除此之外，PSV的检出率远低于其他4种腹泻病毒。总之，随着2018年后养殖场加强生物安全防控措施和猪群管理，各病原检出率和阳性场检出率呈现逐年下降趋势。  相似文献   

大肠杆菌热敏肠毒素B亚基的原核表达及其免疫增强作用的探讨     

王会  何孔旺 《畜牧兽医科技信息》2011,(6)

从大肠杆菌K88(LT+,ST+)菌株中扩增热敏肠毒素B亚基基因,得到454bp的片段,AT克隆后,定向连接到pET32a(+)中,并转化入大肠杆菌BL21(code plus),通过IPTG 30℃诱导,表达了重组的LTB.SDS-PAGE电泳显示,其分子量约为34KD左右,主要存在于包涵体中,且复性后保留部分生物学活性.动物实验证明LTB与CpG共同作用,可显著增强豚鼠对口蹄疫疫苗的免疫反应.  相似文献   

肠出血性大肠杆菌O157:H7Intimin和Tir-Tccp蛋白质对小鼠的免疫保护性     

何孔旺  俞正玉  倪艳秀  卢维彩  叶青  吕立新  周俊明  姜平  张雪寒  李彬  栾晓婷  温立斌  王小敏  茅爱华  赵攀登  郭容利 《江苏农业学报》2011,(6):1300-1304

为了研究不同浓度的肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7 Intimin和Tir-Tccp蛋白质对接受1010 CFUEHEC O157:H7小鼠的免疫保护作用,将Intimin和Tir-Tccp蛋白质和佐剂充分乳化后,通过皮下多点注射免疫小鼠,对照组注射等量的磷酸盐缓冲液.共免疫2次,间隔14d,末次免疫后14d...  相似文献