猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF3基因的表达及其单克隆抗体的制备   总被引：1，自引：1，他引：1  

刘金霞  周艳君  安同庆  仇华吉  王云峰  童光志 《中国兽医学报》2007,27(5):609-612

将猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）CH-1a株的GP3蛋白基因进行截短修饰后,克隆于pGEX6p-1载体中,转化大肠杆菌,并进行诱导表达。经SDS-PAGE检测,融合表达的蛋白rtGP3大小约40 000;Western blotting分析证实,表达的融合蛋白rtGP3能被PRRSV阳性血清所特异性识别。收获融合表达的rtGP3,免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,分别以表达的融合蛋白rtGP3和GST蛋白作为包被抗原,通过间接ELISA方法对融合细胞的上清液进行检测,结果获得了5株能稳定分泌抗rtGP3蛋白抗体的杂交瘤细胞株,命名为31A2,31G11,32B12,32D4和32H7。利用PRRSV感染的Marc-145细胞进行间接免疫荧光检测显示,所获得的5株单克隆抗体均能与PRRSV感染细胞产生特异性免疫荧光。亚型鉴定结果表明,5株单克隆抗体均为IgG1型,且轻链均为κ链。  相似文献   

重组伪狂犬病病毒(rPRV-GP5)对绵羊的安全和效力试验   总被引：2，自引：1，他引：2  

田志军  仇华吉  孔令达  李娜  周艳君  王云峰  童光志 《中国预防兽医学报》2004,26(4):287-289

为了验证表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5蛋白的重组伪狂犬病病毒(rPRV-GP5)的安全性和免疫原性,将10只5～6月龄健康绵羊分成三组,安检组(3只)肌注108.0PFU/只、效检组(4只)肌注106.0 PFU/只,3只作为不接种对照组.接种后14 d,效检组与对照组每只臀部肌注伪狂犬病病毒"双城系"猪源强毒S株103 LD50,结果效检组全部保护,对照组全部死亡,安检组未见异常.结果表明,重组病毒完全符合伪狂大病活疫苗制造及检验规程中对疫苗的安全和效力检验标准.  相似文献   

猪源盖塔病毒的分子生物学研究进展     

朱世强  王帅勇  王娟  姚云  虞凌雪  单同领  周艳君  童武  郑浩  童光志  于海 《中国动物传染病学报》2022,(2):216-222

盖塔病毒(GETV)属于披膜病毒科甲病毒属.GETV属于虫媒病毒,可以通过蚊虫感染低等脊椎动物.猪群感染GETV后可发生轻微症状,主要导致怀孕母猪繁殖障碍.目前,GETV在世界范围内流行较为广泛,近年来逐步在猪群中暴发,导致部分猪场经济损失严重.因此,加强对猪源GETV的病原、致病机制和疫苗的研究,对于该病的防控具有更...  相似文献   

猪繁殖与呼吸综合征胶体金抗体检测技术的建立和初步应用   总被引：11，自引：0，他引：11  

崔尚金  姜建宏  周艳君  仇华吉  童光志 《中国预防兽医学报》2005,27(3):213-217

用胶体金标记纯化后的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因工程表达抗原,建立一种以微孔滤膜为固相载体,以红色胶体金为标记物的检测PRRSV抗体的胶体金免疫层析法(GICA).特异性交叉试验证明GICA检测PRRSV抗体有较高的特异性.与其他方法对比检测证实了其敏感性.生产了一批免疫胶体金试纸条,检测36份临床样本,其中30份经免疫胶体金试纸条及ELISA、免疫荧光检测均为阳性.猪繁殖与呼吸综合征免疫胶体金抗体检测技术的建立为检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体提供了一种快速简便的方法.  相似文献   

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒SHxx13/2013株的分离与鉴定     

程群  姜一峰  虞凌雪  王康  杨莘  李丽薇  高飞  于海  童武  童光志  周艳君 《中国动物传染病学报》2014,(2):32-38

2013年初上海某猪场保育猪群中出现高热、呼吸障碍等临床表现,导致大部分发病猪死亡,为了确定此次猪群中爆发疫病的病原,本研究从发病猪群中随机采集了15份血液样品,利用RT-PCR方法对本次疫病病原进行了检测。结果显示,有11份临床样品呈现猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)强阳性,且与高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Highly pathogenic Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,HP-PRRSV)对照大小相一致。随后从阳性样品中选取SHxx13/2013在Marc-145细胞中进行病毒的分离与鉴定,结果显示SHxx13/2013在细胞接种后第1代即出现明显的细胞效应(cytopathic effect,CPE),其病变特征与高致病性PRRSV强毒HuN4株一致。对SHxx13/2013第5代细胞分离毒进行RT-PCR和IFA等特异性鉴定,结果显示该毒株为PRRSV分离株,其蚀斑形态和生长特性与强毒HuN4株相似。分段克隆该毒株全长基因进行测序和序列分析,结果显示,新分离的流行毒SHxx13/2013株全长基因组为15 319 bp,其Nsp2基因特征与HP-PRRSV一致,在第482位和第534~562位发生两处共30个氨基酸的不连续缺失,且该毒株与高致病性PRRSV代表毒株HuN4亲缘关系较近,全长基因的核苷酸同源性为99.6%。本研究结果表明新分离的SHxx13/2013株属于高致病性PRRSV分离株,据此我们推测今年年初上海某猪场爆发的疫情主要是由HP-PRRSV感染所致。  相似文献   

表达猪源GM-CSF蛋白的重组PRRSV构建及鉴定     

虞凌雪  周艳君  姜一峰  童武  高飞  夏天奇  王康  杨莘  李丽薇  程群  童光志 《中国预防兽医学报》2014,(4):260-264

  相似文献   

猪细小病毒SY-99株非结构蛋白NS1基因的克隆与原核表达     

吴丹  童光志  仇华吉  薛强  周艳君  李景鹏 《中国农业科学》2003,36(11):1352-1356

 根据猪细小病毒 (porcineparvovirus ,PPV)NADL 2株非结构蛋白基因NS1序列设计引物 ,扩增出了PPVSY 99株的NS1基因 ,将其克隆到原核表达载体pET2 8a中 ,得到重组质粒SYNS1/pET2 8a。将SYNS1/pET2 8a转化到大肠杆菌BL2 1(DE3)中 ,经IPTG诱导 ,使PPVNS1基因获得了表达 ,运用ELISA和Westernblotting证实了表达产物的特异性。经表达产物细胞定位分析 ,表达的NS1蛋白是以包涵体的形式存在于大肠杆菌中。通过改变诱导时间或诱导剂IPTG的浓度 ,确定了表达NS1蛋白的最佳诱导条件 :IPTG终浓度为 0 .6mmol·L-1,诱导时间为 3h ,在大肠杆菌中最高表达含量为 17.8%。亲和层析后 ,得到了纯化的NS1蛋白 ,在Westernblotting检测中 ,纯化蛋白大大降低了反应背景。表达的NS1蛋白可作为免疫诊断试剂来检测PPV的发生 ,而且还可用于鉴别灭活疫苗免疫猪和自然感染猪  相似文献   

猪流行性腹泻病毒SHpd/2012株S蛋白的表达鉴定     

谢春  王康  王鑫  赵玉婷  丁思嘉  谢洋洋  童光志  周艳君  杨志彪 《上海交通大学学报(农业科学版)》2017,(1):29-33

猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的一种可致仔猪严重腹泻的高度接触性肠道传染病。S蛋白在病毒感染和入侵宿主细胞的过程中具有重要作用。为了研究S蛋白的特点,本研究扩增了PEDV新流行毒株SHpd/2012的纤突蛋白S基因分段片段S11、S12、S13、S21和S22,将得到的目的片段导入原核表达载体pGEX-6P-1中,并转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行表达、鉴定,获得了正确的PEDV S的分段蛋白S11(24-277aa)、S12(272-571aa)、S13(560-797aa)、S21(793-1109aa)及S22(1102-1384aa),为后续单克隆抗体的制备和致病机制的研究奠定了基础。  相似文献