猪繁殖与呼吸综合征病毒M蛋白B细胞抗原表位的鉴定     

周艳君  田志军  刘金霞  安同庆  彭金美  薛强  蔡雪辉  于海  李国新  刘娣  童光志  王云峰  王玫 《中国预防兽医学报》2009,31(4)

本研究去除了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)CH-1a株M蛋白基因部分疏水性区域后,克隆于原核表达栽体pGEX-6P-1中进行表达,并利用表达的M蛋白(rtM)为抗原,免疫BALB/c小鼠制备了1株抗M蛋白的单克隆抗体(McAb)M283,IFA试验表明该McAb能够识别PRRSV CH-la株.同时将M蛋白基因进行一系列的氨基酸截短表达,证实M蛋白的117 aa～129 aa是McAb M283的抗原表位;对该抗原表位进行western blot 分析,结果显示该表位能被PRRSV感染猪的血清特异性识别.本研究结果为进一步深入了解M蛋白的抗原特性奠定了基础.  相似文献   

伪狂犬病病毒gE/TK基因缺失突变株的构建   总被引：1，自引：1，他引：1  

田志军  仇华吉  倪健强  周艳君  王云峰  童光志 《中国预防兽医学报》2004,26(3):181-185

在伪狂犬病病毒转移载体pBdTK-Uni的多克隆位点中插入由SV40启动子控制下的IacZ基因表达盒,同时在右侧同源臂下游插入一个1.7kb的KpnI片段,构建成一个新的转移载体pUhi-LacZ.用该载体与Bartha-K61株基因组通过脂质体法共转染Vero细胞,经过10代蓝斑筛选纯化和PCR鉴定获得了一株稳定表达LacZ基因的伪狂犬病病毒gE/TK基因缺失突变株,命名为rPrV-LacZ.在不同的细胞(PK-15、IBRS-2、Vero和CEF)上,对该重组病毒与亲本病毒的增殖滴度和细胞病变进行比较,未见显著差异.结果表明转移载体pBdTK-Uni具有实用性,可用于构建伪狂犬病病毒基因工程活载体疫苗.  相似文献   

应用重组N蛋白—ELISA检测猪繁殖与呼吸综合征抗体的研究   总被引：9，自引：0，他引：9  

王云峰  周艳君  仇华吉  钱平  蔡雪晖  柴文君  童光志 《中国兽医杂志》2001,37(3):3-5

利用昆虫杆状病毒表达系统表达的猪繁殖与呼吸综合征重组N蛋白作为抗原，包被聚苯乙烯微量反应板，建立了猪繁殖与呼吸综合征重组N蛋白-ELISA诊断方法。试验证明，该方法对其他8种猪疫病阳性血清均无交叉反应，对标准阳性样品的检出率为100%。具有敏感性高、特异性强的特点。  相似文献   

rNP-ELISA检测抗猪流感病毒抗体工作条件的优化   总被引：1，自引：0，他引：1  

李曦  符芳  周艳君  王晓武  童光志 《中国兽医杂志》2007,43(10):21-22

猪流感是生猪养殖的国家普遍都会遇到的猪的呼吸道病[1]。虽然HI检测已经被作为可信赖的抗流感病毒抗体的检测方法[2]。但是,应用ELISA方法检测抗体具有明显的优势,对于待检血清不需要进行任何处理,而且也不必要对应用的抗原进行更换与选择[3]。试验采用的包被抗原为重组NP蛋白  相似文献   

PRRSV SD2株ORF5/ORF6基因克隆及双基因真核表达载体的构建     

李俊  王金宝  袁小远  崔尚金  李曦  符芳  周艳君 《动物医学进展》2006,27(10):78-81

以PRRSV细胞培养物为模板，经RT—PCR扩增得到ORF5／ORF6基因，该产物和pIRES真核表达载体分别经双酶切，连接构建pIRES-ORF5／ORF6。经PCR、双酶切鉴定和测序证明成功构建了真核表达载体pIRES-ORF5／ORF6。测得的ORF5／ORF6序列与VR-2332株的氨基酸同源性分别为99％和100％，属北美洲型。  相似文献   

猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF6基因在毕赤酵母中的表达   总被引：2，自引：0，他引：2  

钱平  周艳君  童光志  仇华吉  王云峰  吴丹  薛强  陈焕春 《中国预防兽医学报》2002,24(3):161-164

根据酵母表达系统的密码子偏爱性、poly(A)信号以及外源基因mRNA5’端的二级结构等特性 ,对猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV)ORF6基因进行简并改造和人工合成 ,然后以正确的读码框架插入到分泌型酵母高效表达载体pPICZαA的α因子信号肽编码序列 3’端 ,构建成酵母转移载体 ,用化学方法转化受体酵母菌GS115 ,经PCR和酶切鉴定证实 ,目的基因已整合到重组酵母菌染色体中。对重组酵母进行诱导表达 ,并通过SDS_PAGE和Westernblot分析进行筛选 ,获得了一株高效表达目的蛋白的重组酵母菌 ,该重组蛋白具有免疫学活性 ,其表达水平可达 2 .0g/L ,而未经改造的ORF6基因则不表达  相似文献   

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒基因缺失标记疫苗ELISA鉴别诊断方法的建立     

孙晶  周艳君  姜一峰  徐彦召  童武  童光志 《中国兽医寄生虫病》2014,(1):30-36

为了配合（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV）基因标记疫苗株（rHN4-Δ25＋NP49株）的临床抗体鉴别诊断应用,本研究以标记疫苗中缺失的25个氨基酸多肽作为包被抗原,通过对ELISA反应条件的优化,确定抗原最适包被浓度为500 ng/孔,血清最佳稀释度为1：40,同时确定其阴阳性临界值S/P判定标准为0.15,批内和批间重复实验结果显示其变异系数均低于10%,表明该方法具有良好的重复性。对临床血清检测结果显示与IDEXX试剂盒检测结果的符合率为94.84%,采用25 aa负标记ELISA方法检测HuN4-F112免疫猪血清,结果显示从免疫后21 d可检测25 aa特异性抗体,该抗体至少可持续存在126 d。本研究建立的ELISA检测方法为今后PRRSV基因工程标记弱毒疫苗株在临床鉴别诊断的应用提供了有利保障。  相似文献   

NS2A序列对日本脑炎病毒NS1基因在原核系统中的体外表达的影响     

仇华吉  金吉东  田志军  周艳君  王云峰  童光志 《中国农业科学》2004,37(4):614-614

 用RT-PCR扩增并克隆了日本脑炎病毒弱毒株SA14-14-2的NS1、NS1'、NS1-2A的 cDNA片段,分别将其亚克隆到原核表达载体pET-30b(+),构建了重组原核表达质粒pET30b-NS1、pET30b-NS1'、pET30b-NS1-2A,转化大肠杆菌BL-21(DE3),用IPTG诱导培养。结果表明,仅有pET30b-NS1质粒转化的菌株获得表达,而另外2种重组质粒转化的菌株均无表达。表达的融合蛋白分子量约为46kD,约占菌体总蛋白的30.8%,Western blotting分析表明表  相似文献   

重组伪狂犬病毒(rPRV-GP5)对伪狂犬病最小免疫剂量的测定     

田志军  金迪  李国新  周艳君  仇华吉  王云峰  童光志 《广西农业生物科学》2006,25(Z1):211-211

伪狂犬病(Pseudorab ies PR)是由伪狂犬病毒(PRV)引起的,可导致多种家畜和野生动物以发热、奇痒(猪除外)及脑髓炎为主要症状的急性传染病。猪是该病毒的中间宿主和传染源,感染后可引起妊娠母猪发生严重的繁殖障碍造成死胎、流产和木乃伊胎,患病仔猪表现为神经症状和呼吸道病,多以死亡告终。在规模化、集约化、现代化高密度养猪地区,PRV可在猪群间不断传播,是危害我国养猪业的一个重要传染病。用疫苗进行免疫接种是预防、甚至消灭伪狂犬病的根本措施。目前伪狂犬病疫苗在我国应用最多的是Bartha-K 61株,该疫苗是20世纪60年代匈牙利Bartha等人将野毒株用鸡胚成纤维细胞反复传代而获得的一个人工致弱疫苗株,该毒株呈现gE基-因缺失表型,其毒力大大减弱,免疫原性很好,是世界上公认的优良疫苗株。我们以Bartha-K61株为载体构建了表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)CH-1a株GP5基因的重组伪狂犬病病毒(rPRV-GP5),但GP5基因的插入是否会改变伪狂犬病病毒Bartha-K61株对伪狂犬病的免疫保护效力?为此本研究通过测定重组伪狂犬病毒(rPRV-GP5)对伪狂犬病的最小免疫剂量,评价rPRV-GP5对伪狂犬病的保护效力。24只5~6月龄PRV阴性健康绵羊随机分成6组,每组4只,其中1组为生理盐水对照组,其余5组分别后腿肌注重组伪狂犬病毒(rPRV-GP5)冻干疫苗(病毒含量为5×106.0TCID50/mL)5×104.0TCID50/只、5×103.0TCID50/只、5×102.0TCID50/只、5×101.0TCID50/只和5TCID50/只,免疫后15 d每只绵羊肌注伪狂犬病毒猪源强毒S株1000 LD50。结果表明:对照组和5TCID50/只组的全部绵羊攻毒后4~5 d均出现典型伪狂犬病症状并死亡,5×101.0TCID50/只组4只绵羊中有2只发病并死亡,其余各组全部保护。结论:重组伪狂犬病毒(rPRV-GP5)对绵羊最小免疫剂量为100 TCID50/只,GP5基因的插入没有影响伪狂犬弱毒疫苗Bartha-K61株的免疫原性。  相似文献   

我国部分地区犬狂犬病免疫覆盖率的连续调查     

张菲  张守峰  刘晔  查云峰  孙彦伟  文武金  邓文煌  周艳君  扈荣良 《中国兽医寄生虫病》2011,19(1):68-71

本研究对我国部分城市或地区犬狂犬病的免疫覆盖率进行了连续3年以上的调查,结果显示,所调查的发达城市犬狂犬病免疫覆盖率总体水平有所提高,如深圳和北京已达到或接近70%的有效覆盖率;南方较发达城市的免疫覆盖率为20%~30%,但距离狂犬病免疫覆盖标准（≥70%）相差甚远;农村地区和狂犬病流行的北方城市,狂犬病免疫覆盖率仍很低,甚至不足5%。以上结果反映出,在未实行强制免疫的情况下,我国狂犬病的免疫覆盖率和经济发展水平呈正相关,欠发达城市和农村地区的犬仍未接受有效免疫,无法阻断狂犬病在动物之间传播,不利于我国狂犬病的控制。  相似文献