绵羊进行性肺炎病毒与山羊关节炎一脑炎病毒的血清学交叉反应的研究     

薛飞  相文华  沈荣显 《畜牧兽医学报》1999,(4)

本实验用琼脂凝胶免疫扩散试验（ＡＧＩＤＴ）和免疫印迹试验（ＩＢＡ）对实验感染绵羊进行性肺炎病毒（ＯＰＰＶ）的山羊血清与山羊关节炎—脑炎病毒（ＣＡＥＶ）抗原以及实验感染ＣＡＥＶ的绵羊血清与ＯＰＰＶ抗原的交叉反应进行了研究。４只接种ＯＰＰＶ的山羊中有一只山羊的血清可与ＣＡＥＶ琼扩抗原发生交叉反应,并在免疫印迹试验中可识别ＣＡＥＶ的ｇｐ４４、ｐ３５和ｐ２８。２只接种ＣＡＥＶ的绵羊中有一只绵羊的血清可与ＯＰＰＶ琼扩抗原发生交叉反应,并在免疫印迹试验中可识别ＯＰＰＶ的ｇｐ４４和ｐ２８。以上的交叉反应结果表明ＯＰＰＶ与ＣＡＥＶ的抗原之间具有密切的相关性,这对于ＯＰＰＶ通过山羊和ＣＡＥＶ通过绵羊的传代研究是非常重要的,并对将来的免疫预防策略具有重要的指导意义。  相似文献   

马流感病毒多重RT—PCR检测方法的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

郭巍  戴伶俐  李雪峰  周建华  相文华  沈荣显  刘娣 《动物医学进展》2008,29(11)

根据马流感病毒的M基因和HA基因的保守序列,设计了两对引物,MF和MR为通用引物,可以检测出H3N8和H7N7亚型EIV,目的片段227bp,HF和HR为H3N8亚型特异性引物,目的片段595bp。利用这两对引物,通过对多重RT—PCR扩增条件的优化,建立了快速检测鉴别H3N8亚型EIV的多重RT—PCR技术。特异性和敏感性试验结果表明,该技术可以用于EIV的快速诊断和亚型鉴定。  相似文献   

马流感病毒(A/Equine/Qinghai/1/94)神经氨酸酶基因的克隆与同源性分析     

杨建德  王文军  薛飞  王晓钧  朱远茂  赵立平  吕晓玲  沈荣显  许景军  相文华 《中国预防兽医学报》2003,25(5):334-337

本试验根据已发表的马流感病毒神经氨酸酶(NA)基因序列，设计并合成一对特异性引物，经反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)成功扩增出了我国马流感病毒青海株(A／Equine／Qinghai／1／94)NA基因，将片段连接到PGEM—T-easy载体并转化DH5a，提取阳性菌落的质粒经EcRol酶切和PCR鉴定其大小均为1．4Kb左右，对其测序并构建NA基因进化树。经过比较分析发现，我国马流感病毒青海株与A／Equine／Alaska/1／91、A／Equim／Tennessee/5／86和A／Equine／Algiers/72等关系较近，核苷酸同源率为98．2％—97．4％；与我国马流感吉林株(A／Equine／Jilin／1／89)关系较远，核苷酸同源率仅为72．0％；而与H7N7亚型马流感病毒A／Equine／Prague／1／56核苷酸同源率仅为38．0％。  相似文献   

马传贫琼脂扩散无色透明冻干抗原的研究 Ⅰ.马传贫琼脂扩散无色透明冻干抗原的研制     

董君平  彭达春  王振漪  沈荣显 《中国预防兽医学报》1989,(5)

按现行《规程》加以改良制备的马传贫琼脂扩散无色抗原的物理性状与美国、日本同类产品一样,呈无色、透明液体,检出率略高于现行《规程》制备的抗原、改良法制备的液体抗原,加保护剂冻干,可在37℃保存79天,在室温保存210天,便于长途运输及边远地区使用。改良法制备抗原的工艺流程简便,免除国外法需多次超速离心及特殊滤过的复杂程序,适于批量生产。  相似文献   

马传贫酶联免疫吸附试验(ELISA)间接法的应用及评价     

戴玉坤  宁希德  沈荣显  王振漪 《中国预防兽医学报》1982,(2)

通过对补反、琼扩双阳性及补反或琼扩单阳性的79份免疫马血清和52份自然感染马血清的ELISA终点滴度测定,确定了被检血清适宜稀释倍数。还证明采用多头份健康马混合血清作为不同地区被检血清的阴性对照是适宜的. 对1.625份不同地区的马血清的检测,进一步证明本法是特异性的,具有可重复性。用ELISA检测30份国际参照血清,所获结果与琼扩试验完全一致。  相似文献   

IL-2和绵羊梅迪-维斯纳病病毒核心蛋白Gag核酸疫苗联合免疫小鼠的免疫应答     

丁忠庆  沈荣显  相文华  赵丽荣  赵立平 《中国预防兽医学报》2007,29(3):204-207

构建绵羊梅迪-维斯纳病病毒（MVV）核心蛋白Gag核酸疫苗并与IL．2联合免疫小鼠，为评价其诱导的体液和细胞免疫应答。将MVVgag基因与羊IL-2基因分别插入到核酸疫苗载体质粒pcDNA5．0中，构建真核表达质粒pcDNA5．0-Gag和pcDNA5.0-IL-2，并经酶切以及测序鉴定。分别用阳性质粒pcDNA5．0-Gag、空载体pcDNA5．0及pcDNA5．0-Gag和pcDNA5．0-IL-2共免疫BALB／C小鼠，采用ELISA检测免疫小鼠的特异性抗体以及IFN-γ和IL-4水平，用MTT比色法检测免疫小鼠脾淋巴细胞的增殖。结果表明pcDNA5．0-IL-2联合免疫组小鼠血清抗体效价和IFN-γ、IL-4水平高于pcDNA5．0-Gag免疫组，与空载体pcDNA5．0对照组相比有显著差异（P〈0．01）。且pcDNA5．0-Gag单独免疫组及与IL-2联合免疫组小鼠脾淋巴细胞增殖的刺激指数均高于空载体pcDNA5．0对照组。因此，构建真核表达质粒pcDNA5．0-Gag和pcDNA5．0-IL-2，用其联合免疫BALB／C小鼠所诱导的免疫反应以特异性细胞免疫应答为主，同时可产生体液免疫，且IL-2发挥了免疫佐剂的作用，为进一步将其用于MVV的防治奠定了基础。  相似文献   

马传染性贫血病毒第19、26代驴胎皮肤细胞弱毒前病毒DNA全基因序列分析     

全滟平  赵立平  韩秀娥  沈楠  吕晓玲  沈荣显  相文华 《中国预防兽医学报》2007,29(7):487-491,518

不同代次马传染性贫血驴胎皮肤细胞弱毒(Fetal donkey dermal virus,FDDV)的免疫保护效果各不相同,只有第10～15代驴胎皮肤细胞弱毒具有良好的免疫保护效果,可作为疫苗使用,继续传代则疫苗的保护率下降。为确定有、无免疫保护效果的FDDV在基因水平上的差异,本实验对无免疫保护效果的第19、26代驴胎皮肤细胞弱毒前病毒DNA进行了全基因序列测定,并与已测序的疫苗毒株进行序列比较。第19代和第26代FDDV全基因核苷酸序列同源性高达99.5%,与疫苗毒株全基因核苷酸序列的同源性分别为96.9%、96.7%。LTR是EIAV在细胞传代中变异最显著的区域,第19、26代FDDV的LTR与疫苗毒的LTR同源性仅为89.6%、89.3%。马传贫病毒的gag基因高度保守,第19、26代FDDV与疫苗毒株的gag基因推导氨基酸序列仅有2个氨基酸不同。第19、26代FDDV与疫苗毒株的pol基因、env基因的推导氨基酸序列的同源性分别为98.9%、98.8%、93.7%、93.6%。由序列比较结果可以推断,第19代、第26代FDDV不具有免疫保护效果的主要原因可能是由于LTR和env基因的变异,导致病毒复制能力下降或免疫原性丧失,不能诱导机体产生良好的免疫反应。  相似文献   

马传染性贫血病毒弱毒株LTR点突变型嵌合感染性克隆的构建     

左咏梅  吕晓玲  赵立平  李庆章  郝艳红  沈荣显  相文华  王晓钧 《中国预防兽医学报》2007,29(8):569-574

马传染性贫血病毒（Equine infectious anemia virus,EIAV）长末端重复序列（Long terminal repeat,LTR）是基因组中高度变异区之一,EIAV LTR的变异对于指导病毒的复制和病毒致病性具有重要的生物学意义。为了阐明我国马传染性贫血病毒弱毒疫苗毒力致弱的分子机制,由马传贫强毒至弱毒致弱过程中不同代次毒株LTR序列的分析,以驴胎皮肤弱毒株疫苗全长感染性克隆pLGFD3-8为父本,选取LTR R区的TAR起始碱基,poly（A）附加位点,采用反向遗传操作对其位点进行PCR体外定点突变,将弱毒序列构建的逆向点突变型全基因克隆转染到驴胎皮肤细胞（FDD）并在FDD上传代,通过逆转录酶活性（RT）检测、RT-PCR方法及real-time RT PCR检测并验证其感染性。检测结果为构建的逆向点突变型感染性克隆在FDD上被拯救,其衍生病毒感染的FDD上出现明显的细胞病变;细胞培养上清可检测到RT酶活性和RT-PCR阳性;电镜下可见大量典型的EIAV颗粒pLGFD-M点突变型嵌合克隆衍生病毒与其父本克隆衍生病毒pLGFD3-8复制水平相似。此结果为进一步深入研究LTR对马传染性贫血病毒复制水平和毒力的影响奠定了基础。  相似文献   

应用酶联免疫吸附试验（ELISA）检查马传染性贫血病病毒抗体的研究     

戴玉坤  宁希德  沈荣显  王振漪 《中国农业科学》1984,17(1):81-86

酶联免疫吸附试验(ELISA)是一种简便、快速、敏感的血清学方法,与其他血清学方法相比有其独特的优点,因此在医学领域各学科的研究及血清学诊断方面愈来愈受到广泛的重视。自1979年以来,我们首先对应用ELISA)~抗体夹心法检测马传染性贫血病(以下简称马传贫)病毒抗原进行了研究,并将该方法用于马传贫研究及疫苗生产方面。在此基础上又探讨了ELISA间接法检查马传贫病毒抗体的应用价值,现将试验结果报告如下。  相似文献   

检测马传贫强毒感染马与弱毒疫苗免疫马外周血病毒抗原的研究     

戴玉坤  沈荣显  王振漪 《中国预防兽医学报》1988,(1)

从马传贫强毒急性感染马的外周血白细胞、血浆、血清中可检出马传贫病毒抗原;从亚急性感染马外周血的白细胞、血浆中可检出马传贫病毒抗原;从无症状慢性马外周血的白细胞中偶尔能检出马传贫病毒抗原。对9匹马传贫驴白细胞弱毒疫苗免疫马连续跟踪3个月,从外周血的白细胞、血浆、血清中均未检出马传贫病毒抗原。  相似文献