犬冠状病毒V1株膜蛋白基因的克隆与序列分析     

乔军  夏咸柱  胡桂学 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2004,32(12):75-78

根据GenBank中报道的CCVInsavc 1株核蛋白基因(M)序列,用特异性引物对分离的CCVV1野毒株进行了RT PCR扩增,将扩增得到的PCR片段纯化后与pGEM T连接得到重组质粒pTM,并进行了核苷酸序列测定。结果表明,该基因全长为789bp,编码263个氨基酸,其中前17个氨基酸为信号肽。与CCV标准毒株Insavc 1M基因相比,两者核苷酸的同源性为92.1%;推导的氨基酸序列同源性为90.9%,差异主要发生在该蛋白的N端前1/3区域内。在推导的M蛋白氨基酸序列中,发现了3个明显的疏水区,提示该蛋白可能是一个反复跨膜的蛋白;在N端15～17,38～40,234～236位氨基酸存在3个潜在的N 联糖基化位点,可能是形成该蛋白表面抗原决定基的位点。另外,推导蛋白氨基酸序列的疏水性和抗原表位与Insavc 1株M蛋白存在一定差异,提示两者免疫原性可能有差别。  相似文献   

犬冠状病毒V1株核蛋白基因的克隆与序列分析     

乔军  夏咸柱  胡桂学  谢之景  闫芳  杨松涛  黄耕 《西南大学学报》2004,26(4)

首次对犬冠状病毒V1野毒株核蛋白(N)基因进行了克隆和序列测定.根据GenBank中报道的CCV Insavc-1株N基因序列,设计了1对特异性引物,对分离的CCV V1野毒株进行了RT-PCR扩增;将扩增得到的阳性PCR片段经纯化后与pGEM-T连接得到重组质粒pTN1,进行核苷酸序列测定,并与GenBank中CCV标准毒株Insavc-1 N基因进行了比较.结果该基因全长为1 146 bp,编码382个氨基酸,两者核苷酸的同源性为91.7%;推导的氨基酸序列的同源性为90.2%,显示出较高的保守性.在V1野毒株推导的N蛋白N端156-179位存在一个SRXX富集区,与小鼠肝炎病毒相应区域相同,推测可能是RNA结合区.另外,推导的该蛋白氨基酸序列其疏水性和抗原表位与标准毒株Insavc-1 N蛋白存在一定的差异;在氨基酸组成上,该蛋白丝氨酸和赖氨酸含量高达9.84%,提示该蛋白具有高度螺旋和缠绕的分子结构.  相似文献   

大熊猫源细小病毒病毒样颗粒的构建与免疫原性     

焦翠翠  金宏丽  冯娜  黄培  刘迪  李丽娜  赵健  王倩  丁秋雨  杨松涛  夏咸柱  石晶  王化磊 《中国兽医学报》2021,(1):43-49

将大熊猫源细小病毒VP2基因优化后克隆至pFastBac Dual载体,重组获得穿梭质粒rBacmid-Panda-dVP2,转染Sf9细胞拯救获得表达大熊猫源细小病毒VP2蛋白的重组杆状病毒rpFBD-Panda-dVP2。rpFBD-Panda-dVP2感染Sf9细胞会形成明显的细胞病变,间接免疫荧光鉴定显示rpFBD-Panda-dVP2感染的Sf9细胞可见明显的绿色荧光。对感染细胞后收获的抗原进行Western blot鉴定,结果显示在约65 kDa处可见明显的目的蛋白条带;电镜下可见与天然细小病毒形态大小相似的粒子,表明rpFBD-Panda-dVP2感染昆虫细胞后可成功组装成病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs),获得的VLPs血凝效价可达1∶2¹⁵。将大熊猫源细小病毒VLPs免疫幼猫后可诱导机体产生血凝抑制(hemagglutination inhibition,HI)抗体,HI效价最高可达1∶211,且保护性抗体水平可持续至少12个月。大熊猫源细小病毒VLPs的成功构建,为大熊猫细小病毒病新型基因工程疫苗的研制奠定基础,对防控大熊猫细小病毒病具有重要意义。  相似文献   

犬瘟热病毒单克隆抗体的制备及鉴定     

孙玮  王铁成  杨松涛  高玉伟  王承宇  张涛  杨玉姣  刘玉秀  阮洋  靳晓霞  夏咸柱 《动物医学进展》2011,32(3):73-77

将纯化的犬瘟热病毒(CDV)分别与弗氏完全佐荆(CFA)和弗氏不完全佐剂(IFA)乳化制备的乳化抗原作为免疫原,以有限稀释法和间接ELISA法进行单克隆抗体的筛选,从而获得了3株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株2F7、3G2、5E3.亚型鉴定结果显示,2F7为IgG2a型,3G2为IgGl,5E3为IgGM.用2F7制...  相似文献   

熊脑炎病毒的分离鉴定     

范泉水  齐桂凤  乔贵林  李国荣  王度林  钟志宏  袁国庆  路年生  徐树华  夏咸柱  殷震 《中国预防兽医学报》1992,(5)

用犬肾传代细胞从死亡幼熊脏器中分离到一株腺病毒,经细胞感染范围、动物感染试验、红细胞凝集试验、血清学试验及电镜和理化学性质等系统鉴定为Ⅰ型腺病毒.又称犬传染性肝炎病毒。  相似文献   

禽致病性大肠埃希氏菌与金色葡萄球菌的药物敏感性调查     

孟庆玲  乔军  夏咸柱 《中国家禽》2004,26(5):13-14

从新疆阿克苏地区多个鸡场分离出大肠埃希氏菌51株，金色葡萄球菌18株，按世界卫生组织推荐的K-B法，用10种临床上常用的抗菌药物对其敏感性进行了测定。结果：对大肠埃希氏菌作用最强的依次是庆大霉素、红霉素、磺胺甲基异恶唑、磺胺嘧啶，抑菌作用较差的是青霉素、四环素、头孢唑啉；对金色葡萄球菌作用最强的依次是头孢唑啉、红霉素、庆大霉素，押菌作用较差的是青霉素、氟哌酸、环丙沙星。  相似文献   

塔里木野鸡新城疫病毒T_20株的分离鉴定     

乔军  孟庆龄  夏咸柱  何宏彬  范泉水 《中国兽医杂志》2001,(10)

应用 10日龄鸡胚 ,从新疆塔里木 1只病死的野鸡脾脏中分离出 1株副粘病毒 ,并对其进行了形态学、理化学、血清学、动物感染试验、分子生物学鉴定。结果证明所分离的 T2 0 株为 1株 NDV的强毒株。  相似文献   

犬瘟热疫苗弱毒的复壮与免疫试验   总被引：4，自引：0，他引：4  

夏咸柱  黄耕 《中国兽药杂志》1997,31(4):2-6

将一株犬瘟热疫苗株病毒通过Ｖｅｒｏ细胞２０代（ＣＤＶ／Ｒ－２０）后又通过敏感犬的腹腔巨噬细胞，获得一株免疫原性更高的弱毒株（ＣＤＶ／Ｒ－２０／８）。接种同样剂量１０４ＴＣＩＤ５０的ＣＤＶ／Ｒ－２０／８和ＣＤＶ／Ｒ－２０的犬，产生出血清中和（ＳＮ）抗体价的几何平均数分别为１：５４和１：２６。前者为后者的２倍多。接种１０５ＴＣＩＤ５０的ＣＤＶ／Ｒ－２０／８能完全保护犬（１０／１０）抵抗ＣＤＶ强毒的攻击，接种１０４ＴＣＩＤ５０的保护９／１０犬，而对照犬５只全部发病，其中４只死亡。犬体内ＳＮ价可持续一年之久。冻干培养物在４和－３０℃中可分别保存９个月和１２个月而效力不减。  相似文献   

驯化克隆的CAV-2大斑株的实验免疫研究     

范泉水  夏咸柱  邱薇  黄耕  何洪彬  余春  乔军  武银莲  殷震 《中国兽药杂志》2002,36(2):25-29

对MDCK细胞上驯化克隆产毒量高的大斑株 (LP)的第 5 0代毒和 75代毒进行了实验免疫研究 ,结果表明该毒株具有安全性好 ,通过静脉和口鼻接种CAV易感犬 ,无任何致病反应 ;用10 4 .0 TCID50 以上的该毒免疫CAV易感犬 ,即获得 97.5 %以上的免疫保护 ;将其在CAV易感犬连续传 5代 ,其安全性与原毒相同 ,表明该毒株在 5 0～ 75代之间遗传性稳定 ,免疫原性良好 ;与CPV和CDV弱毒联合免疫 ,结果与各弱毒单独免疫所产生的抗体无差异 ,说明该毒株不但可以单独用于免疫 ,也可与其他弱毒联合免疫。是一株较好的疫苗候选株 ,具有开发应用价值。  相似文献   

用PCR技术鉴定犬传染性肝炎病毒强、弱毒株的研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

王雷  夏咸柱  卫广森  邹啸环  刘维全  扈荣良  黄耕 《畜牧与兽医》2002,34(2):10-12

根据Genebank中发表的犬传染性肝炎病毒 (ICHV)标准强毒株Glaxo和人工驯化的弱毒疫苗株CLL的保守序列间大小不同 ,按照引物设计的原则 ,设计合成了一对通用引物。该对引物可由ICHV强毒株扩增出 569bp的片段 ,而弱毒株可扩增出 2 4 4bp的片段。对PCR产物分别进行电泳、酶切和测序 ,证明PCR产物片段大小、酶切位点和核苷酸序列与设计的产物完全一致。正常DK细胞上清和犬传染性喉气管炎病毒 (CAV 2 )强、弱毒株细胞培养物均不能被该引物扩增 ,说明具有良好的特异性。其检测到的病毒量分别为 1 5TCID50 、 31TCID50 、说明该技术具有很高的敏感性。可用于ICHV强、弱毒株的鉴定和ICH的诊断  相似文献