用套式PCR法检测犬冠状病毒的研究   总被引：2，自引：0，他引：2  

乔军  孟庆玲  贾桂珍  何宏彬  夏咸柱 《新疆农业科学》2000,37(2):64-67

根据GenBank中Wesseling 发表的犬冠状病毒K378株纤突蛋白基因序列,设计合成了能扩增372 bp 基因片段的套式引物.用异硫氰酸胍-酚-仿一步抽取法提取细胞总RNA进行反转录,再以此产物进行套式PCR扩增,并筛选出最佳套式PCR扩增条件.结果经套式PCR扩增能得到与设计大小相同的产物,并且不扩增犬细小病毒、犬瘟热病毒、犬Ⅰ型腺病毒、狂犬病病毒的核酸.敏感性试验表明,此法能扩增出犬冠状病毒强毒细胞培养物(毒价为10-4.2TCID50/0.1 ml)10-6稀释的反转录产物,远高于常规RTPCR.经初步应用表明,此法可用于犬冠状病毒的临床诊断和实验研究.  相似文献   

应用套式PCR分段扩增犬瘟热病毒融合蛋白的全基因   总被引：2，自引：0，他引：2  

李金中  夏咸柱  殷震  涂长春  金宁一 《中国兽医学报》1999,19(2):0

为研究犬瘟热病毒（ＣＤＶ）融合蛋白各段功能,根据ＣＤＶＯｎｄｅｒｓｔｅｐｏｏｒｔ弱毒株的融合蛋白基因序列,设计合成了１０条寡聚核苷酸引物。对此１０条引物进行不同的配对,将１株犬瘟热疫苗弱毒株细胞培养物的总ＲＮＡ进行ＲＴ－ＰＣＲ扩增,利用１次ＰＣＲ扩增得到了７个基因片段,最长的达１６６９ｂｐ,最短的为３１４ｂｐ;应用套式或半套式ＰＣＲ,扩增得到了能覆盖整个融合蛋白基因的８个片段  相似文献   

基因序列分析确诊大熊猫的犬瘟热病毒感染   总被引：7，自引：0，他引：7  

李金中  夏咸柱等 《中国兽医学报》1999,19(5):448-450

直接从死亡大熊猫肝脏提取细胞总 Ｒ Ｎ Ａ,经反转录后用犬瘟热病毒的 １ 对引物扩增出了约 ３２０ ｂｐ 的片段。此产物经纯化、序列分析表明,其片段 ２ 个引物间长度为 ２８１ ｂｐ,与预计片段大小相同。此毒株在核苷酸和氨基酸水平与北京犬等 ４ 个野毒株、哈尔滨犬野毒株、某疫苗弱毒株、 Ｏｎｄｅｒｓｔｅｐｏｏｒｔ 弱毒株和海豹瘟热病毒 ２ 型毒 株的 同源 性分 别为 ９２２％ 和 ９８９％ 、９２５％ 和 ９８９％ 、９１５％ 和 ９４６％ 、９２９％ 和 ９８９％ 、９８２％ 和 １００％ 。这样就进一步确定了大熊猫的犬瘟热病毒感染。  相似文献   

红色荧光示踪狂犬病病毒ERA株病毒粒子方法的建立     

单博文  王金良  刘仁强  帅磊  王喜军  葛金英  温志远  夏咸柱  步志高 《中国预防兽医学报》2018,(2)

为建立一种狂犬病病毒(RABV)荧光标记方法,便于有效地观察研究RABV侵入细胞及脱壳的过程,本研究采用CY5-NHS酯红色荧光染料标记氨基的方法将纯化的RABV ERA株进行CY5-NHS酯荧光染料标记;采用亲脂性羰花青荧光染料将细胞膜染成绿色;采用DNA荧光染料将细胞核染成亮蓝色;在3D活细胞激光共聚焦分析成像系统下成像,动态观察病毒吸附细胞并内吞的过程。与传统的染色方法相比,本研究建立的病毒标记方法更适合在3D活细胞激光共聚焦分析成像系统下观察和拍摄RABV感染细胞的过程,为RABV感染机制的研究提供了一种有效研究方法,对于其它弹状病毒科病毒标记方法的建立也具有一定的参考意义。  相似文献   

犬瘟热病毒F1基因的原核表达与初步应用   总被引：1，自引：0，他引：1  

闫芳  夏咸柱  扈荣良  谢之景  黄耕 《中国兽医学报》2005,25(4):350-352,355

将犬瘟热病毒(CDV)F1基因定向克隆入pET-28a( )载体．构建了原核表达质粒pET-28F1。pET-28F1转化宿主菌BL21(DE3)plysS．在IPTG的诱导下．可高效表达目的基因，表达量达菌体蛋白总量的23．52％。Western blot分析表明，所表达蛋白能与抗CDV阳性血清发生特异性的抗原-抗体反应。以E．coli表达的CDV F1蛋白为抗原．HRP标记的兔抗犬IgG为二抗．建立了检测抗CDV抗体的间接ELISA方法。试验表明．应用CDV F1蛋白作为抗原检测抗CDV抗体具有特异性高、抗原易纯化、成本低等特点。  相似文献   

犬轮状病毒的分离与鉴定     

李六金  夏咸柱  武德丽  贾补年  殷震  许基龙 《中国兽医学报》1984,(1)

水试验从患有出血性肠炎的病犬粪便中分得一株轮状病毒——C~R—82株,通过对其理化特性鉴定和电镜形态观察,证明该毒株与国外报道的犬轮状病毒相符。用细胞培养适应责人工感染未吃初乳的新生犬获得成功,并于腹泻物中回收到病毒。  相似文献   

核酸探针检测犬冠状病毒方法的建立和初步应用   总被引：2，自引：0，他引：2  

胡桂学  王龙涛  于守平  夏咸柱 《中国预防兽医学报》2003,25(3):171-174

以^32P标记犬冠状病毒特异性RT—PCR及产物制成核酸探针，与CCV NL-18株、犬瘟热病毒、犬细小病毒、犬副流感病毒、犬腺病毒、狂犬病病毒反转录产物、正常CRFK细胞以及做10～10000倍稀释的CCV NL-18株反转录产物杂交，进行核酸探针的敏感性和特异性试验。结果表明，该探针仅与CCV HLl8株反转录产物呈阳性杂交，与对照病毒和正常细胞反转录产物均呈阴性反应。初步应用试验结果，该探针可与国内CCV分离病毒YSl、CI1株杂交，且可从8份腹泻犬粪便中检出5份CCV阳性病料。本研究为在我国开展犬冠状病毒感染的分子流行病学调查和临床诊断提供了一种敏感、特异的检测方法。  相似文献   

野鸟源H5N8禽流感病毒遗传变异分析与致病性评估     

张醒海  李元果  王铁成  初冬  孙贺廷  孙伟洋  冯娜  谢英  何健  秦思源  彭鹏  赵永坤  杨松涛  高玉伟  夏咸柱 《中国兽医学报》2019,(4):646-654

本试验在野鸟禽流感病毒紧急疫情检测过程中鉴定并分离到1株H5N8高致病性禽流感病毒,利用病毒全基因组测序、系统发育及关键氨基酸位点分析解析了该野鸟源H5N8禽流感病毒分离株遗传进化情况,通过体外复制动力学试验及小鼠感染试验,评价了该野鸟源H5N8禽流感病毒分离株对哺乳动物致病性。进化分析显示,该病毒株属于Clade 2.3.4.4,可以不经适应直接感染小鼠并在呼吸系统内复制,表现出有限的组织嗜性,对小鼠呈低致病性。其在体内外复制能力较低。结果表明,本试验加深了对野生鸟携带H5N8禽流感病毒的认识和理解、对野鸟源H5N8禽流感病毒生物学特性的评价,为预测野鸟源H5N8禽流感病毒遗传进化趋势及其生物安全风险评估提供借鉴和参考。  相似文献   

牛副流感病毒3型感染MDBK细胞后影响天然免疫基因表达的筛选与验证     

赵贵民  吕丽霞  王洪梅  乔军  夏咸柱  何洪彬 《动物医学进展》2019,(2):9-16

为筛选与验证牛副流感病毒3型(BPIV3)感染MDBK细胞后天然免疫相关基因的差异表达变化,通过细胞病变观察、Western blot验证病毒HN蛋白表达,以及病毒增殖复制动力学曲线,确定病毒复制情况。利用转录组测序技术,对1MOI基因C型SD2014BPIV3毒株感染MDBK细胞的12h对照组与感染组的差异表达基因进行筛选,最后收集BPIV3感染MDBK不同时间点细胞样本,应用RT-qPCR在转录水平验证了天然免疫相关显著差异基因的表达变化情况。结果表明,BPIV3毒株在MDBK细胞上有较强的复制能力,从病毒感染12h的转录组数据中获得了1 401个显著差异基因,经过筛选获得了9个与天然免疫相关的基因,最后在转录水平验证了MDA5、IRF7、STAT1、ISG65、TRIM25等9个与天然免疫相关基因的表达变化,并验证了其上、下游通路或同一家族基因的表达变化。结果表明,筛选与验证的BPIV3感染MDBK细胞差异表达天然免疫相关基因,为宿主细胞影响病毒复制的分子机制研究奠定了基础。  相似文献   

新型消毒液对犬瘟热病毒、犬细小病毒的杀灭作用     

李亚朝  尹中圆  王玥  杨松涛  王铁成  夏咸柱 《中国畜牧兽医》2008,35(12):170-171

犬瘟热和犬细小病毒病是严重威胁犬科动物的两大重要疫病,具有传染性强、发病率高等特点,其对宠物犬、军警犬、毛皮动物等构成极大威胁。消毒是预防和控制动物传染病传播的重要措施,消毒剂的质量是决定消毒是否彻底的关键。在本研究中,笔者通过微量细胞病变抑制试验,检测了一种  相似文献