桑树幼叶cDNA文库的构建及部分表达序列标签分析   总被引：2，自引：2，他引：0  

方荣俊  戚金亮  扈冬青  赵卫国  汪伟  张林  刘利  潘刚  沈兴家  潘一乐  杨永华 《蚕业科学》2008,34(4)

基于为鉴定和克隆桑树功能基因提供基础信息的目的,采用RNA转录5′末端转换(SMART)法构建了桑树幼叶全长cDNA文库。该文库容量为1.02×106pfu/mL,重组率95%,符合构建基因文库的质量要求。从构建的桑树幼叶cDNA文库中随机挑取48个克隆进行表达序列标签(EST)测序,有效序列为32条,经UniGene数据库归并后为32条,UniGene比率为100%;与NCBI核酸数据库进行比对、查询和注释,在32条序列中有29条序列具有同源性,其中16条为全长序列,完整性比率为55.2%;初步发现具有已知功能基因的ESTs 6个,具有推测功能基因的ESTs 5个,未命名或未知功能基因的ESTs 21个。  相似文献   

犬圆环病毒Rep蛋白的原核表达     

汪伟  孙文超  曹亮  易驰喆  郑敏  鲁会军  金宁一 《动物医学进展》2018,(7)

犬圆环病毒(CanineCV)是一种新发现的圆环病毒。制备针对CaineCV Rep的抗体,为建立CaineCV ELISA检测方法及研究Rep蛋白的功能奠定基础。以CaineCV基因组作为模板,扩增出Rep基因序列。PCR产物克隆至pET-28a原核表达载体上,获得了重组质粒pET(28a)-Rep。将重组质粒转入大肠埃希菌BL21感受态细胞后进行诱导表达,SDS-PAGE分析表明重组Rep蛋白在大肠埃希菌BL21中获得表达。Western blot分析表明,重组蛋白能与Anti-His标签抗体发生特异性反应。该研究构建了pET(28a)-Rep重组原核表达质粒,并在大肠埃希菌中获得表达,为进一步制备Rep的抗体奠定了基础。  相似文献   

猪圆环病毒3型与猪圆环病毒2型二重PCR检测方法的建立     

孙文超  汪伟  赵翠青  赵海洋  刘立明  孟娟  王茂鹏  陈征  曹亮  陆依婷  夏秀秀  孙迪菲  宋璟子  郑敏  鲁会军  金宁一 《中国兽医学报》2019,(3):393-396

为建立同时检测PCV3和PCV2的二重PCR方法,分别以PCV3和PCV2基因组的保守区域设计2对特异性引物,片段大小分别为649,295 bp。将反应条件进行优化,构建PCV3和PCV2的二重PCR检测方法。检测结果表明该方法能特异性扩增PCV3和PCV2,且无法扩增其他猪常见病毒;PCV3和PCV2的最低检出限分别为508,412 copies/μL。临床样品检测结果显示,PCV3和PCV2阳性率分别为2.1%(3/145),62.1%(90/145),PCR产物经测序证实为PCV3。本研究建立的二重PCR方法具有速度快、特异性强和灵敏度等优点,可以用于PCV3和PCV2的检测和流行病学调查。  相似文献   

猪圆环病毒3型PCR检测方法的建立及其应用   总被引：1，自引：0，他引：1  

肖琦  茅爱华  汪伟  俞正玉  郭佳慧  袁万哲  赵攀登  温立斌  范宝超  李彬  朱雪蛟  胡屹屹  郭容利  曲梦  杨倩  何孔旺 《中国动物传染病学报》2018,(2)

根据Gen Bank登录的猪圆环病毒3型(porcine circovirus type 3,PCV3)全基因组序列设计并合成了一对特异性引物,经条件优化,建立了检测PCV3的PCR方法,扩增片段大小为932 bp;最低的质粒检测浓度为10 copy/μL;对猪圆环病毒1型、猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒的核酸进行扩增,均无PCV3目的条带出现;随机抽取扩增的16份临床病猪样品目的条带进行TA克隆后测序,结果显示均为PCV3特异性目的片段,16株PCV3江苏毒株扩增序列与已报道的PCV3/US/SD2016和PCV3/CN/Hubei-618基因序列同源性分别为98.4%~99.6%、99.0%~99.8%,而16个毒株之间的同源性为98.3%~100%。利用所建立的PCR方法检测了2014~2017年间收集的江苏省临床病猪样品938份、健康猪样品500份,PCV3的阳性检出率分别为6.93%和0.6%;其中,2014年病猪样品中的阳性率为1.92%,后呈逐渐上升的趋势,2017年达到12.67%。本研究表明,建立的PCR方法特异、敏感,可以用于临床PCV3的检测;PCV3在江苏省猪群2014年已有感染,并呈逐年升高的趋势,应予以重视。  相似文献   

两株猪圆环病毒2型的分离鉴定和小鼠致病性试验     

郭佳慧  肖琦  汪伟  秦爱建  何孔旺 《畜牧与兽医》2019,(11):102-108

采集自江苏某猪场临床表现为疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的猪组织病料,经PCR检测为猪圆环病毒2型(PCV2)阳性,阳性病料经无菌处理后接种PK-15细胞进行PCV2分离并进行测序。采用间接免疫荧光(IFA)和相关基因序列分析软件进行鉴定、分析。用分离的毒株人工感染BALB/c小鼠,观察其对小鼠的致病性。结果显示,成功分离到2株PCV2毒株,分别命名为X46和5123,两毒株基因全长均为1 767 bp,遗传进化和同源性分析显示两毒株分别为PCV2d和PCV2b亚型,分离株P20代毒在PK15细胞上的TCID_(50)分别为10~(5.5)TCID_(50)/0.1 mL和10~(4.5)TCID_(50)/0.1 mL。小鼠感染试验结果显示PCV2对小鼠增重有抑制作用,对肝、脾和肾有较强的侵袭能力。研究结果为深入研究PCV2的致病机理及开发新型疫苗奠定了一定的基础。  相似文献   

科尔沁左翼中旗耕地主要土壤类型及养分现状   总被引：3，自引：0，他引：3  

张建玲  汪伟  余娜  杨宁  任树强  刘艳 《内蒙古农业科技》2015,(3):40-41,48

2005-2012年,科尔沁左翼中旗实施了测土配方施肥项目,对耕地主要土壤类型进行了土壤养分检测、农户施肥情况调查,确定了现有耕地主要土壤类型的养分现状、耕地利用现状,明确了施肥和耕地利用方面存在的问题,对于推广测土配方施肥技术、合理用地提供了技术依据。  相似文献   

2种猪圆环病毒2型TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及比较（英文）     

周忠涛  王小敏  汪伟  茅爱华  温立斌  倪艳秀  何孔旺 《农业科学与技术》2015,(1):3-8

[目的]实现在体外对猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)的定量检测。[方法]设计合成2组特异性引物和Taq Man探针,构建分别包含PCV2 ORF1和ORF2基因全长的重组质粒作为标准品,经过反应体系和反应条件的优化,绘制标准曲线,建立2种检测PCV2的分别基于PCV2 ORF1和ORF2的Taq Man荧光定量PCR方法。[结果]所建立的2条标准曲线的Ct值与模板拷贝数的对数之间具有良好的线性关系,相关系数R均在0.99以上,扩增效率均在90%~110%;重复性好,组内变异系数均小于5%;特异性强,以猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒1型(PCV1)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)为模板时均无扩增;敏感性高,ORF1方法可达1.0×101copies/μl,ORF2方法可达1.0×102copies/μl。用建立的2种荧光定量PCR方法分别对80份临床样品进行检测并对结果进行比较,结果表明,其中72份临床样品的定量结果数量级基本一致,有8份临床样品的定量结果数量级不一致。利用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法对8份样品进行了检测,证明这8份样品中确实存在P1的感染。[结论]基于ORF1建立的定量检测方法更为准确,可用于PCV2的快速诊断和定量检测。  相似文献   

2013～2014年猪嵴病毒分子检测和3D基因遗传变异分析     

倪艳秀  何孔旺  茅爱华  俞正玉  李彬  郭容利  吕立新  祝昊丹  周俊明  温立斌  张雪寒  王小敏  汪伟 《农业科学与技术》2015,(3)

[目的]为调查猪嵴病毒（ PKV）在我国哺乳仔猪中的流行和变异情况。[方法]采集2013～2014年我国5个省份27个猪场224份哺乳仔猪腹泻粪样,采用 RT-PCR方法对 PKV的3D基因进行检测,并对其中的29个 PKV 3D基因进行序列测定和遗传变异分析。[结果]腹泻粪样中PKV总阳性率为65.18％（146/224）,猪场PKV总阳性率为85.2％（23/27);29个 PKV 3D基因与国内外6株其他 PKV株相关序列的核苷酸同源性为87.0％～100％,所推导的氨基酸序列同源性为92.7％～100％。[结论]我国哺乳仔猪中普遍存在 PKV感染,PKV 3D基因呈现多样性。  相似文献   

盐胁迫下氮素对生菜形态建成及生理生化特性的影响     

余忆  汪伟  万何平  伍晓明  曾长立 《江苏农业科学》2023,(17):165-170

随着保护地园艺的快速发展，保护土壤免受次生盐渍化威胁的问题日益突出，其中施肥不当是造成土壤盐渍化的重要原因。在保护地园艺的生产过程中，多叶蔬菜是施氮量最大的种类之一，但与氮素对盐胁迫下多叶蔬菜的调控相关的研究目前较少。本研究以生菜(Lactuca sativa L.)为试验材料，采用水培试验，重点研究了盐胁迫下不同氮素水平对生菜生理生化特性的影响。采用双因素水平设计，在霍格兰营养液中，分别设计了4个不同浓度的氮素水平(0、110、220、330 mg/L)处理生菜，然后用0、100、200 mmol/L NaCl溶液分别进行盐胁迫处理。盐胁迫第10天分别测定生理生化指标。结果表明，110～220 mg/L氮素水平对生菜的抗盐性具有明显的影响，能促进植株生长；能显著降低丙二醛(MDA)含量，显著提高可溶性蛋白含量，显著增强细胞保护酶超氧化物歧化酶(SOD)与过氧化物酶(POD)活性。在氮素及盐胁迫效应比较中，氮素和盐胁迫对SOD和POD活性的效应非常接近；而在MDA含量与盐害指数上，盐浓度为主效应；在可溶性蛋白含量中，氮素水平为主效应。氮素效应和盐胁迫效应均高于氮素-盐胁迫间的互作效应。  相似文献   

猪源马链球菌兽疫亚种类M蛋白原核表达及其小鼠免疫保护力分析     

周俊明  何孔旺  倪艳秀  祝昊丹  俞正玉  茅爱华  吕立新  温立斌  张雪寒  王小敏  汪伟  李彬  郭容利 《江苏农业学报》2015,(3)

为了原核表达猪源马链球菌兽疫亚种去除信号肽的类M蛋白质,并分析该蛋白质对小鼠的免疫保护力,克隆了马链球菌兽疫亚种CY菌株去除信号肽的类M蛋白质基因Szp,并将Szp基因插入p ET28a表达载体,IPTG诱导,获得重组类M蛋白质,弗氏佐剂乳化重组类M蛋白质后,3次免疫小鼠,用同源菌株CY攻击。诱导获得分子量约5.8×104的重组蛋白质,免疫印迹结果表明该重组类M蛋白质能够被马链球菌兽疫亚种猪多抗识别。类M蛋白质免疫小鼠的存活率为60%,弗氏佐剂乳化灭活CY免疫小鼠的存活率为70%,PBS对照组小鼠攻毒后6 d内全部死亡。表达的类M蛋白质可以给予ICR小鼠部分的免疫保护力,保护效果略低于CY全菌灭活苗,提示可以对马链球菌兽疫亚种多种免疫保护性抗原进行联合,从而进一步提高对动物的免疫保护力。  相似文献