核酸探针的制备及其使用技术     

童光志 《中国预防兽医学报》1986,(4)

由于限制性内切酶的发现以及重组DNA技术的新进展,使得可以合成核酸探针(Nucleic Acid Probe)进行疾病的诊断和病原的检测。因为标记的核酸探针可以通过相应的碱基配对原则和与其具有同源或部分同源性的核酸序列发生杂交反应,特异性相当高,是一种重要的辅助性病毒诊断方法。  相似文献   

水疱性口炎病毒糖蛋白基因的克隆和表达     

孙成群  彭金美  吴东来  童光志  仇华吉  孔宪刚 《中国预防兽医学报》2005,27(4):250-256

对一株实验室保存多年的水疱性口炎病毒(VSV)的囊膜糖蛋白(VSV_G)基因进行了克隆和测序,并且构建了重组VSV_G真核系统表达载体。结果表明克隆的VSV_G基因全长1536个核苷酸(nt),其编码的G蛋白长为511个氨基酸(aa),氨基酸序列与20个Indiana血清型VSV毒株的同源性在95.4%左右(94.1%～98.0%)。种系发生树分析表明此病毒株属于水疱病毒属的VSV_Indiana血清型。经免疫荧光检测证明构建的重组VSV_G表达质粒pCIVG5和pCRVG6转染23T细胞后能够有效地转录和表达,这为进一步开发利用VSV_G奠定了基础。  相似文献   

传染性喉气管炎病毒WG株Us区基因结构分析     

韩文雄  石星明  王云峰  兰德松  胡文玮  王玫  曹贵方  童光志 《中国预防兽医学报》2008,30(10)

根据GenBank中的传染性喉气管炎病毒(ILTV)全序列(NCBT登录号:NC-006623).利用Oligo6.2分析序列并设计6对引物,以ILTV WG株基因组DNA为模板,PCR扩增了长度为13.1 kb的区域,得到了完整的WG株的Us区序列,初步鉴定了WG株的Us区基因结构.将WG株的Us区序列分别与ILTV USDA株、BHV-1、CeHV-1、EHV-1、HSV-1、HSV-2、MDV、PrV、HvT、VZV相比较,ILTV WG株与USDA株同源性为99.2%,而与其他疱疹病毒之间的同源性较低,而且Us区大小也不一致;与已发表的ILTV USDA株Us区基因序列分别比较后发现,两者之间差异较大的基因分别为gJ基因和gD基因.其中,gJ基因在第1983个碱基处比USDA株多出30 bp,DNAStar预测这30 bp可能形成一个独立的抗原表位;gD基因的长度在不同的ILTV毒株之间差别较大,与其他疱疹病毒具有相似的结构特征.  相似文献   

鸡传染性喉气管炎研究进展     

王云峰  石星明  王玫  童光志  杨桂花  孙鹏 《兽医导刊》2008,(11):26-29

鸡传染性喉气管炎(ILT)是一种由α-疱疹病毒,即鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)引起的鸡的急性上呼吸道传染病.  相似文献   

鸡传染性喉气管炎病毒WG株ICP4基因的鉴定及其在潜伏位点的表达     

木古丽  王云峰  侯绍华  石星明  王玫  冉多良  童光志 《中国预防兽医学报》2007,29(6):417-422

根据传染性喉气管炎病毒(Infectious laryngotracheitis virus,ILTV)SA-2株ICP4基因序列设计并合成3对引物,以ILTV中国王岗株(WG)DNA为模板扩增ICP4基因,并对其进行了序列测定。将ILTV WG株的ICP4基因及其推导的氨基酸序列,分别与ILTV SA-2株、BHV-1、EHV-1、EHV-4、MDV-1、MDV-2、HVT、PRV、VZV、HSV-1和HSV-2的ICP4基因及其推导的氨基酸序列比较后发现,ILTV毒株之间ICP4基因相对保守,核苷酸和氨基酸水平的同源性分别为99.7%和99.1%,但与其它α-疱疹病毒的ICP4基因的同源性则较低,低于3.0%。对潜伏感染鸡三叉神经节中病毒基因的检测显示,在人工感染ILTV WG株后第10 d～60 d内均能检测到ICP4特异RNA,而gB、gC、TK则未能检出。鉴于目前国内外对α-疱疹病毒潜伏感染相关基因以及ICP4基因序列和结构功能的研究,ILTV WG株ICP4基因的克隆和序列测定,以及病毒基因在潜伏感染鸡三叉神经节中的差异表达,为进一步研究ICP4基因的功能及确定潜伏感染相关基因奠定了基础。  相似文献   

猪伪狂犬病疫苗的研究现状与展望     

李国新  童光志 《中国预防兽医学报》2018,(9)

正伪狂犬病(Pseudorabies, PR),是由伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)引起的多种动物以发热、奇痒和脑脊髓炎为主要特征的一种传染病,对养殖业危害极大。伪狂犬病基因缺失疫苗与相应的血清学鉴别诊断方法配合使用,来净化甚至根除伪狂犬病,已经成为动物疫病防控的"模板"。迄今为止,多数欧美和亚洲发达国家已经根除了伪狂犬病。上世纪70年代,我国从匈牙利引进了伪  相似文献   

伪狂犬病病毒IE180基因启动子缺失克隆的构建与鉴定     

韩冬梅  阮可悦  曹云雷  张丽荣  童武  李国新  郑浩  童光志 《中国动物传染病学报》2021,(2):1-8

在本实验室已有的PRV JS-2012感染性克隆pBAC-JS2012及突变筛选菌株SW102-PRVBAC基础上,利用galk正筛选和卡那霉素的筛选标记基因,构建IE180两个拷贝启动子均删除的缺失克隆。利用同源重组将galk表达盒替换掉IE180TATA-box及左边297个碱基和右边172个碱基,经PCR鉴定和筛选获得阳性克隆SW102-galk。通过Western blot分析,IE180仍然存在表达。在此基础上再利用相同的方法将Kna筛选标记基因替换掉另一个拷贝IE180TATA-box及其左边134个碱基和右边309个碱基,经过PCR鉴定、Western blot分析以及转染后绿色荧光表达的分析,证实IE180不再表达。本研究成功筛选到IE180启动子缺失的阳性克隆pPRV-DIE180-BAC,为后期IE180缺失互补系统的构建及更深入的探究IE180的生物学功能奠定基础。  相似文献   

M2e合成肽流感通用疫苗的研究     

杨馥如  于海  马继红  周艳君  童光志 《中国动物传染病学报》2013,21(1):1-7

M2蛋白是甲型流感病毒的跨膜蛋白,其优点为不易变异,且N端24个氨基酸组成的胞外区(M2e)十分保守,适合作为通用流感疫苗的靶标.因此本实验将4个拷贝的M2e通过赖氨酸与通用Th细胞表位偶联获得M2e分支肽(M2e-MAP),添加弗氏佐剂制备成合成肽疫苗免疫小鼠,评价其免疫原性及异源攻毒保护效力.ELISA实验结果表明,该疫苗能刺激机体产生高水平的抗M2e特异性IgG抗体；细胞因子IL-4的检测进一步说明了其能诱导产生高的体液免疫应答水平,ELISPOT实验从IL-4和IFN-γ两个方面分别说明了该疫苗不仅可以诱导高的体液免疫应答,而且能刺激机体产生高水平的细胞免疫应答.对免疫小鼠攻H9N2,通过肺病毒分离滴定和肺组织病理切片等方法检测攻毒保护效果,结果均表明,M2e分支肽疫苗能对异源病毒的攻击产生较好的保护效力.上述结果为流感通用疫苗的研究提供了一种参考思路.  相似文献   

猪繁殖与呼吸综合征病毒5′非翻译区中一顺式结构因子对病毒感染必要性的分析     

高飞  陆嘉琦  袁世山  童光志 《中国兽医寄生虫病》2012,20(1):1-9

人们广泛认为动脉炎病毒的基因组5′非翻译区（untranslated region,UTR）在病毒基因组RNA复制、亚基因组mRNA转录和蛋白翻译过程中发挥关键作用,然而其结构与功能仍然在很大程度上不为人知。现基于2型猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）感染性克隆pAPRRS的基础,构建了一系列5′UTR的5′末端缺失突变体,利用RNA和DNA转染,分析了拯救病毒的遗传学与病毒学特征,发现拯救病毒的5′末端突变位点被一些不知来源的AU-rich外源序列所修复。基于T7启动子与CMV启动子转录起始位点的不同,我们人为引入一段GC-rich的序列以研究病毒的自我修复是否为模板依赖性,结果发现病毒的外源序列修复机制是非模板依赖的。通过二级结构预测分析发现,在PRRSV5′UTR中的第一个茎环结构是病毒感染性必不可少的。  相似文献   

华东部分地区猪群中猪萨佩罗病毒分子流行病学调查   总被引：1，自引：0，他引：1  

兰道亮  吉文汇  王长松  孙焕  陈莫林  崔立  童光志  华修国 《动物医学进展》2012,33(12)

为了解华东地区猪群中猪萨佩罗病毒(Porcine sapelovirus,PSV)感染流行情况,通过RT-PCR方法对该地区15个规模化养猪场960份猪粪便样本进行了检测.结果表明,所检测的15个养殖场均存在PSV感染,总体平均阳性率为17.2％,其中10周龄～20周龄的猪PSV最易感.进一步系统进化分析表明,所检阳性毒株同源性较高,不同地区的毒株交错分布在一起,不存在明显的地区差异,但大体可分为3个亚群,而且已有的国外PSV株均包括在这3个亚群中,这提示PSV可能至少存在3种不同的抗原亚型.  相似文献