猪圆环病毒2型重组Cap蛋白在昆虫杆状病毒中的表达   总被引：3，自引：1，他引：3  

刘长明  陆月华  张超范  危艳武  刘焕章  童光志 《中国预防兽医学报》2005,27(6):479-482

猪圆环病毒2型(PCV2)基因组包含2个开放阅读框架(ORFs),其中ORF1编码病毒复制相关蛋白(Rep),ORF2编码病毒衣壳蛋白(Cap).为了在昆虫细胞表达Cap蛋白,本研究采用PCR扩增PCV2-ORF2编码基因,将PCR产物插入到昆虫杆状病毒转移载体上,经酶切反应及DNA序列分析得到验证.重组质粒与昆虫杆状病毒线性基因组混合,转染到昆虫细胞(Sf-21)进行基因重组,经3次病毒蚀斑克隆,获得高效表达Cap蛋白的重组杆状病毒,毒价可达1.28×108pfu/mL.采用SDS-PAGE凝胶电泳分析表明,重组Cap融合蛋白分子量为32.8 ku,占总蛋白含量的17.2%.免疫印迹试验分析表明,重组Cap蛋白与PCV2阳性血清产生特异性反应,证明该重组蛋白具有良好的免疫活性反应.本研究为进一步进行该病毒分子诊断、亚单位疫苗以及分子生物学等研究奠定了基础.  相似文献   

禽用基因工程疫苗的研究进展及应用前景   总被引：3，自引：0，他引：3  

童光志 《中国家禽》2002,24(19):3-9

疫苗研究的历史回顾 原始疫苗 自然强毒苗:仅限非致死性病原,如口蹄疫,牛痘,一些疱疹病毒病等. 自然弱毒苗:火鸡疱疹病毒,伪狂犬病,传染性喉气管炎等.  相似文献   

鸡传染性支气管炎病毒重组鸡痘病毒基因工程疫苗对异源LTJ95I株病毒攻击的免疫保护     

王云峰  石星明  王玫  刘胜旺  童光志  何来  贺笋  崔红玉  李一经 《中国兽医杂志》2008,44(7)

rFPV-IFNγS1是一株共表达传染性支气管炎病毒S1基因和鸡干扰素-γ基因的重组鸡痘病毒,将其接种SPF鸡3周后,用传染性支气管炎病毒异源毒株LTJ95I攻击.结果显示,疫苗接种后1周,免疫鸡血清抗体很快产生,外周血中CD4 和CD8 T淋巴细胞的百分含量略高于非免疫对照组,但这种差异并不显著.攻毒后保护率结果显示,该疫苗不能对异源病毒提供坚强保护,攻毒后免疫组的发病率为6O%(6/10),病死率为30%(3/10),非免疫对照组的发病率和病死率分别为73%(8/11)和27%(3/11);两组的病理损伤程度差异不明显,在排毒时间上也没有明显变化.  相似文献   

乙型脑炎病毒E蛋白抗原表位E39特异性单克隆抗体的制备     

华荣虹王斌  陈娜莎于海  刘天强马红刘娣  童光志 《中国兽医科技》2008,38(2):133-136

为了制备乙型脑炎病毒E蛋白抗原表位特异性单克隆抗体,将编码乙型脑炎病毒E蛋白抗原表位E39的DNA序列进行人工合成,随后插入表达载体pGEX-6p-1的限制性酶切位点BamHⅠ与XhoⅠ之间,构建了表位肽与GST的融合表达质粒。该表住融合蛋白经亲和层析纯化后免疫BALB／c小鼠,按常规方法进行细胞融合。以化学合成的E39表位多肽为抗原,对融合细胞上清进行间接ELISA筛选。结果,筛选出1株分泌E39表位特异性抗体的杂交瘤细胞株,该杂交瘤细胞分泌抗体能力稳定。经鉴定,该单克隆抗体亚型为IgG2b,轻链类型为κ链。结果表明,用表位融合蛋白为抗原可以制备表位特异性单克隆抗体。  相似文献   

伪狂犬病弱毒疫苗与野毒株PCR鉴别诊断方法的建立   总被引：14，自引：0，他引：14  

冉智光  童光志 《中国畜禽传染病》1998,20(2):108-111

目前，在国内用于预防猪伪狂犬病的疫苗主要是基因缺失的弱毒（Ｂａｒｔｈａ－Ｋ６１）为了有效地地区弱毒免疫猪和野毒感染猪，本实验分别建立了一种通用和一种鉴别ＰＣＲ诊断方法，根据已发表的伪狂犬病病毒（ＰｒＶ）ｇＢ，ｇＥ基因的序列，设计并合成了两对引物：ＰＢ１／ＰＢ２和ＰＥ１／ＰＥ２，以疫苗株Ｂａｒｔｈａｋ－６１及野毒株Ｓ，Ｓｕ，Ｆ，Ｌ，Ｙ及闽Ａ（Ｍｉｎ－Ａ）ＤＮＡ为模板进行了ＰＣＲ扩增，结果显示用引物Ｐ  相似文献   

断乳仔猪多系统衰竭综合征的病原学调查     

李曦  符芳  王靖飞  崔尚金  童光志 《养猪》2005,(4):25-27

此试验针对临床具有断乳仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）症状的猪只进行病原调查。2002年3月至2005年3月，在黑龙江省大庆、靠河寨和吉林省公主岭3个地区1～25周龄的猪群中，选择临床出现生长迟缓、停滞，呼吸困难、皮肤苍白和曾经具有此类症状并已死亡的猪只．采集病料共194份，通过聚合酶链反应（PCR）扩增Ⅱ型猪囤环病毒（PCV2）基因组的特异序列片断．扩增产物长度为900bp／470bp，检测病毒。结果发现．PCV2的总阳性率为21．1％（41／194）．不同地区的检测结果不同，2002年，大庆某猪场发病猪中PCV2检测阳性率为5．1％（4／78）．靠河寨某猪场发病猪中PCV2检测的阳性率为11．5％（9／78），2004年．公主岭某猪场发病猪中PCV2检测的阳性率为73．7％（28／38）。结果表明，临床发生PMWS症状的猪只．应用PCR法检测PCV2阳性率差别较大。病原学调查显示，在我国PMWS发生与多种因素相关，不仅仅是PCV2感染．PCV2感染与PMWS密切相关，但并不是出现PMWS症状的猪都发生PCV2感染．在未检测到PCV2的情况下．仍有PMWS发生。  相似文献   

动物慢病毒的研究进展及尚待解决的问题     

童光志 《中国畜禽传染病》1992,(5):61-63

  相似文献   

猪繁殖与呼吸道综合征疫苗研究进展     

童光志  田志军 《农业新技术》2005,(2):32-33,46

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)于1987年首先暴发于美国，主要表现为妊娠母猪发生早产、流产、产死胎、弱仔和木乃伊胎，仔猪和育肥猪发生呼吸道疾病，死亡率升高，饲料报酬率降低。该病传播速度极快，传染性强，现已遍及全球，虽被国际兽疫局(OIE)列为B类传染病，其危害不亚于A类传染病对养猪业的危害。该病病原为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)，1991年在荷兰首次分离到，以后在美国、加拿大、欧洲国家、中国以及日本陆续分离到。  相似文献   

爆发高致病禽流感疫区的自主活动鸟类 禽流感及新城疫的血清学调查与分析   总被引：2，自引：0，他引：2  

崔尚金  李曦  符芳  王靖飞  吴春燕  童光志  孔宪刚 《畜禽业》2006,(2):4-7

应用血凝抑制试验（HI），时采自健康的鹰、鸽子、野鸭和鹌鹑中的54份血清血清学检测，分析结果显示。在总共采集的54份血清样品中，抗新城疫病毒（NDV）抗体流行血清型（seroprevalence）与抗H6亚型禽流感病毒（H6）抗体、抗H9亚型禽流感病毒（H9）、抗H5亚型禽流感病毒（H5）抗体阳性率分别为64．8％、75．9％、29．6％。而根据血凝抑制试验检测结果发现。H5亚型禽流感病毒抗体滴度较低，最高位为320，其阳性率为29．6％，推断其可能为新近传入的病毒或新近重组变异出现的新病毒，可能为与该次流感爆发相关的新病毒，这一推断还有待于通过对病毒基因序列的分析而做进一步验证；新城疫病毒在该生态系中的稳定循环．构成了对家禽潜在的威胁，我国目前非典型新城疫的一个主要原因是带毒鸟类的传入。  相似文献   

应用重组N蛋白—ELISA检测猪繁殖与呼吸综合征抗体的研究   总被引：9，自引：0，他引：9  

王云峰  周艳君  仇华吉  钱平  蔡雪晖  柴文君  童光志 《中国兽医杂志》2001,37(3):3-5

利用昆虫杆状病毒表达系统表达的猪繁殖与呼吸综合征重组N蛋白作为抗原，包被聚苯乙烯微量反应板，建立了猪繁殖与呼吸综合征重组N蛋白-ELISA诊断方法。试验证明，该方法对其他8种猪疫病阳性血清均无交叉反应，对标准阳性样品的检出率为100%。具有敏感性高、特异性强的特点。  相似文献