日本脑炎病毒NSl基因在大肠杆菌中的高效表达     

金吉东仇华吉  田志军周艳君张守发  童光志 《兽医大学学报》2003,23(3):255-257

提取日本脑炎病毒弱毒株SA14-14-2的基因组RNA，用RT-PCR扩增其NS1基因cDNA，将其克隆到原核表达载体pET-30b( )中，转化大肠杆菌BL-21（DE3）,经IPTG诱导，NS1基因获得高效表达。SDS-PAGE分析显示，表达的融合蛋白表观相对分子质量约为46000，重组NS1蛋白占菌体总蛋白的30.8%。Western blotting分析表明，重组蛋白具有良好的免疫原性。  相似文献   

牛传染性鼻气管炎病毒LA株DNA的分子克隆   总被引：2，自引：0，他引：2  

Burg.  D 童光志 《中国兽医科技》1990,(7):39-40

  相似文献   

猪繁殖与呼吸综合征病毒CH-1a株非结构基因的分子克隆及其基因特征的研究     

刘光清  薛强  仇华吉  蔡雪晖  童光志  郭宝清 《中国预防兽医学报》2002,(2)

对猪繁殖与呼吸综合征病毒的非结构基因 (ORF1)和非编码区分别进行了克隆和测序 ,并对其基因特征作了分析。结果表明 ,CH_1a株ORF1全长 11882nt,其中ORF1a长 75 12nt、ORF1b长 4374nt。它们与VR2 332株的核苷酸同源性分别为 89%、92 % ;与LV株的核苷酸同源性分别为 5 4%、6 3.3%。ORF1编码两个聚合蛋白 ,其中ORF1a编码的聚合蛋白经裂解后产生 6个成熟的非结构蛋白 (Nsp1α、Nsp1β、Nsp2_5 ) ,以Nsp2的变异性最为显著 ,它与LV株的氨基酸同源性为 41%。ORF1b编码的聚合蛋白经裂解后 ,产生 4个成熟的非结构蛋白 (RdRpCP2_4) ,其中RdRp为病毒的复制酶 ,CP4表现出较大的变异性 ,与LV株的氨基酸同源性为 48%。在ORF1a_ORF1b的衔接区有保守的庚核苷酸滑动序列和拟节结构 ,它们是核糖体移码翻译所必需的结构。在基因组末端存在非编码区 ,其中 5’NCR长 190nt,比LV株 5’NCR短 31nt,其核苷酸同源性为 6 1%。 3’NCR长 15 1nt,比LV株 3’NCR长 37nt,保守性稍高 ,其与VR2 332株和LV株的核苷酸同源性分别为 95 .4%和 78.2 %。在 3’NCR末端有一个poly(A)尾巴 ,长 2 0nt。在Poly(A)尾上游有保守的八核苷酸序列 ,是复制酶识别并结合的区域。本研究进一步证实CH_1a株在基因型上属于北美洲型  相似文献   

鉴别猪瘟强毒和弱毒的反转录-复合套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)检测方法的建立   总被引：13，自引：0，他引：13  

李艳  仇华吉  王秀荣  张守发  朱庆虎  李娜  李国新  童光志 《中国农业科学》2006,39(9):1907-1914

[目的]建立一种能区分猪瘟病毒（classical swine fever，CSFV）强毒和弱毒的反转录-复合套式聚合酶链式反应（RT-nPCR）检测方法。[方法]根据GenBank上登录的现有CSFV基因组全序列，选择高度保守区设计了一对CSFV通用引物，并在该对引物跨越区域的内部设计了猪瘟兔化弱毒疫苗和强毒特异性引物，建立了一种能区分猪瘟强毒和弱毒的RT-nPCR鉴别诊断方法。[结果]应用该方法从猪瘟兔化弱毒疫苗和石门强毒株基因组中扩增出了大小分别为447和343bp的一条特异性片段，从两种病毒基因组混合物中扩增出了大小为447和343bp的两条特异性片段，但对牛病毒性腹泻病毒和其它常见猪源病毒细胞培养物以及正常细胞基因组进行检测时均为阴性。该方法可以检测出0．04pg的CSFV RNA。对从黑龙江省采集的15份疑似猪瘟病料进行了检测，结果表明，有14份类似猪瘟强毒，1份类似弱毒疫苗。限制性片段长度多态性和种系发生分析证实了RT-nPCR的检测结果。[结论]本研究建立的RT-nPCR可以有效区分猪瘟强毒和弱毒，减少了未感染的免疫猪被误杀的可能性。  相似文献   

鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗研究回顾与展望     

王云峰  童光志 《中国农业科学》2007,40(Z1):3379-3385

  相似文献   

猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体的研究进展   总被引：4，自引：0，他引：4  

孙庆申  仇华吉  童光志 《动物医学进展》2001,22(4):25-28

单克隆抗体在兽医领域的应用价值越来越受到研究人员的重视。本文概述了近年来猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）结构蛋白单克隆抗体的研究概况，以及它们在该病病毒分子生物学研究中的应用。  相似文献   

提高基因免疫效果的机制     

智海东  童光志 《畜牧兽医科技信息》2001,3(3):33-35

基因免疫指用DNA(质粒或线性的PCR产物)或RNA接种,诱发机体产生对基因编码蛋白的免疫,这是免疫领域最新的进展.基因疫苗可以在很多种类的动物中诱发保护性免疫反应[1].但在实际应用中该疫苗诱发的免疫反应并不强,目前正在致力研究DNA疫苗作用的机理,从而提高基因疫苗的免疫原性,以便更合理地使用这些疫苗.基因疫苗主要是通过主要组织相容性复合体(MHC)分子进行抗原呈递,诱发T细胞反应,机理非常的复杂.  相似文献   

猪细小病毒SY-99株非结构蛋白NS1基因的克隆及序列分析   总被引：12，自引：0，他引：12  

吴丹  仇华吉  李昌文  薛强  周艳君  李景鹏  韩孝成  刘慧敏  童光志 《中国预防兽医学报》2002,24(4):241-244

猪细小病毒（Porcine parvovirus,PPV)SY-99株由本室分离，提取SY－99株的基因组DNA，利用PCR扩增出全长NS1基因，将该基因克隆到 核表达载体pET28a中并测序。结果表明，NS1基因全长1989bp，编码662个氨基酸，氨基酸序列中含有PP 制过程中发挥重要作用的保守基序GKRN，并有3个潜在的糖基化位点，分别位于356－359、446－449、513－516位氨基酸处，SY－99株NS1基因与其它PPV毒株NADL2－1、NADL2－2、Kresse株核苷酸同源性分别为98％、99％、99％，氨基酸同源性分别为97％、99％、995。SN1基因的克隆为研究NS1在PPV的复制中所发挥的功能及利用人工表达的NS1来制备诊断抗原提供了可能。  相似文献   

牛传染性鼻气管炎病毒gD基因表达质粒免疫小鼠的试验研究     

李继昌  童光志  仇华吉 《畜牧兽医学报》2003,34(5):494-497

基因疫苗是近几年来发展起来的一种新型疫苗，具有使用安全，生产、运输、贮存方便，免疫效果稳定持久的特点。实验采用PCR方法将从洛阳种牛场西门塔尔牛精液中分离的牛传染性鼻气管炎(Infectious bovine rhino—traeheitis virus，IBRV)洛精株gD基因进行了扩增，经序列测定确证后构建了gD基因的真核表达质粒。将其单独或连同脂质体肌肉注射于BALB／c小鼠，应用ELISA定期检测血清抗体水平。结果表明，含IBRV gD基因的表达质粒能够引起小鼠的特异性血清抗体反应。  相似文献   

密码子优化的甲型H1N1流感病毒HA基因DNA疫苗在小鼠体内免疫保护效力研究     

杨馥如  于海  王斌  黄梦  马继红  温峰  周艳君  童光志 《中国动物传染病学报》2012,(2):36-41

为了提高甲型H1N1流感病毒HA基因DNA疫苗的免疫原性,本研究将流感病毒rPan09(HA和NA来自A/California/04/09,其余6个片段来自PR8的重组病毒)的HA基因通过人工合成的方法将其密码子优化为哺乳动物体内偏嗜性密码子opti-HA,同未优化的rPan09的HA基因分别与真核表达载体pCAGGS连接构成重组质粒pCA-optiHA和pCA-HA转染293T细胞,48 h后采用间接免疫荧光的方法检测HA基因的体外表达情况,结果显示重组质粒pCA-optiHA的蛋白表达量明显高于pCA-HA。为评价这两种重组质粒的免疫及保护效力,选取6~8周龄雌性BALB/c小鼠,将质粒pCA-HA、pCA-optiHA以100μg/只的剂量,进行后腿肌肉多点注射,同时设立空载体pCAGGS对照,共免疫3次,每次间隔2周。结果表明DNA疫苗pCA-optiHA可显著提高小鼠的体液免疫和细胞免疫应答水平。三免2周后用107.45EID50的rPan09采用滴鼻方式进行攻毒,用Real-time PCR及制作肺组织石蜡切片检测DNA疫苗的保护效力。结果表明,pCA-optiHA免疫组的保护效力明显高于pCA-HA免疫组。本研究为进一步研究和设计有效的甲型流感病毒DNA疫苗奠定了基础。  相似文献