从鹅体分离出一株类冠状病毒     

温立斌  张福军  王增利  杨桂芝  崔玉苍  王玉然  马志华  解建平  杨浩  丁红田 《中国家禽》2001,23(2):47

2000年5月以来，河北省一些养殖户饲养的朗德鹅陆续发病。发病日龄最早在出壳后2～3d，一般在10～15d，病程可长达1个月以上。发病率约20％～40％，病死率可达90％以上。病鹅主要表现为嗜眠、缩颈、腿软弱，不愿走动或行动蹒跚、共济失调，不食或少食，眼有分泌物，下痢，粪便稀薄呈白色，濒死时出现神经症状，如痉挛、摇头、头颈弯曲等。一般抗菌药治疗无效。　　解剖可见肝表面有一层灰白色纤维素膜，肝呈土黄色或棕红色，脾表面也常有纤维素膜，肝、脾肿大不明显，胸腔有粘性渗出物，肺有白色结节坏死灶，切面有砂砾感。　　无菌取肝、脾…  相似文献   

重组外源基因的猪细小病毒VP2蛋白病毒样颗粒的构建与鉴定     

潘群兴  何孔旺  王永山  温立斌  茅爱华  郭容利 《畜牧兽医学报》2008,39(9)

将猪圆环病毒2型（PCV2）Cap蛋白第165-200位氨基酸多肽基因嵌合在猪细小病毒（PPV）VP2 N端,然后重组到腺病毒pAdEasy-1表达系统中,转染HEK-293A细胞,获得重组腺病毒（rAd-PPV∶VP2-PCV2∶Cap）。IFA和Western blotting分析分别可见特异性荧光和大小约为64 ku的特异性带,表明rAd-PPV∶VP2-PCV2∶Cap在HEK-293细胞中成功地表达了PPV∶VP2和PCV2∶Cap蛋白。红细胞凝集试验证实,表达的嵌合PPV∶VP2-PCV2∶Cap蛋白具有与PPV全病毒类似的血凝活性。电镜观察嵌合PPV∶VP2-PCV∶Cap蛋白的粗提物,发现可自行装配成许多病毒样粒子[PPV∶VLP（PCV2）]。  相似文献   

肠出血性大肠杆菌O157:H7△hly△stx△toxB基因缺失株的构建     

张雪寒  何孔旺  赵攀登  栾晓婷  叶青  温立斌  倪艳秀  周俊明  李彬  王小敏  郭容利  俞正玉  茅爱华  吕立新 《华北农学报》2011,(5):76-82

肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli)O157:H7是食源感染的人兽共患病原菌.志贺毒素(Shiga toxin,Stx)、溶血素(haemolysin,Hly)和ToxB是O157:H7重要的毒力因子.选用自杀性质粒pMEG375,体外构建具有同源臂的重组自杀性质粒,...  相似文献   

2种猪圆环病毒2型TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及比较     

周忠涛  王小敏  汪伟  茅爱华  温立斌  倪艳秀  何孔旺 《农业科学与技术》2015,(1)

[目的]实现在体外对猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type 2,PCV2）的定量检测。[方法]设计合成2组特异性引物和 TaqMan探针,构建分别包含 PCV2 ORF1和 ORF2基因全长的重组质粒作为标准品,经过反应体系和反应条件的优化,绘制标准曲线,建立2种检测PCV2的分别基于 PCV2 ORF1和 ORF2的TaqMan荧光定量PCR方法。[结果]所建立的2条标准曲线的 Ct值与模板拷贝数的对数之间具有良好的线性关系,相关系数 R均在0.99以上,扩增效率均在90%~110%;重复性好,组内变异系数均小于5%;特异性强,以猪细小病毒（PPV）、猪圆环病毒1型(PCV1)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）为模板时均无扩增;敏感性高,ORF1方法可达1.0×101 copies/μl,ORF2方法可达1.0×102 copies/μl。用建立的2种荧光定量PCR方法分别对80份临床样品进行检测并对结果进行比较,结果表明,其中72份临床样品的定量结果数量级基本一致,有8份临床样品的定量结果数量级不一致。利用 SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法对8份样品进行了检测,证明这8份样品中确实存在 P1的感染。[结论]基于ORF1建立的定量检测方法更为准确,可用于PCV2的快速诊断和定量检测。  相似文献   

猪圆环病毒2型和3型双重PCR方法的建立及在藏猪猪圆环病毒检测中的应用     

朱家平  肖琦  钱雯娴  赵霞玲  张冯禧  尹力鸿  温立斌  索朗斯珠  何孔旺 《江苏农业科学》2022,50(3):172-177

为同时并快速检测和鉴别猪圆环病毒2型(PCV-2)与猪圆环病毒3型(PCV-3),并调查西藏林芝地区猪圆环病毒的感染情况,根据笔者所在实验室PCV-2和PCV-3单重PCR方法,建立检测PCV-2和PCV-2双重PCR的方法,构建标准质粒并经优化反应条件和反应体系后进行特异性和灵敏性的测定,并对西藏林芝周边地区藏猪粪便...  相似文献   

猪抗病毒蛋白基因重组质粒实时荧光定量PCR标准曲线的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

温立斌  何孔旺  杨汉春  倪艳秀  吕立新  张雪寒  茅爱华 《中国农业大学学报》2009,14(2)

根据GenBank中的猪抗病毒蛋白PKR、OAS/RNase L及Mx核苷酸序列设计特异性引物,经RT-PCR技术从猪外周血单个核细胞中扩增和克隆了PKR、OAS/RNase L及Mx的101 bp核苷酸片段。测序鉴定后,将重组质粒10倍系列稀释后作为标准模板,通过实时荧光定量PCR方法,建立了抗病毒蛋白PKR、OAS/RNase L及Mx标准曲线及其直线回归方程;该方法具有线性关系好,特异性、敏感性、重复性高等特点;建立的荧光定量PCR方法可检测抗病毒蛋白PKR、OAS/RNase L及Mx mRNA水平。为猪体内抗病毒蛋白PKR、OAS/RNase L及Mx的mRNA水平的定量检测提供必要的技术。  相似文献