我国长江流域PRRSV ORF3基因的遗传变异分析     

李彬  何孔旺  温立斌  茅爱华  王小敏  张雪寒  倪艳秀  周俊明  肖少波  陈焕春 《华北农学报》2011,26(3):204-209

为了确定猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行特点及变异规律,本研究首次对从2006年以来我国长江流域分离到的29株PRRSV的ORF3基因进行了克隆和序列测定,并与国外代表毒株和国内的高致病性PRRSV进行了比较分析.结果表明:所有分离毒株的ORF3基因均编码254个氨基酸,都属于美洲型PRRSV,推导的氨基酸同...  相似文献   

我国苏皖地区PRRSV Nsp2和ORF5基因的遗传变异分析     

李彬  何孔旺  温立斌  俞正玉  茅爱华  王小敏  张雪寒  郭容利  倪艳秀  周俊明  吕立新 《中国兽医学报》2011,31(7)

为了分析2009年安徽省和江苏省周边地区流行的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的遗传变异特征,采用RT—PCR方法对该地区分离的22株PRRSV的Nsp2和ORF5基因进行了扩增、克隆和测序,并进行序列分析。结果表明：22株PRRSV均属于美洲型毒株,其中21个毒株的Nsp2存在30个氨基酸的不连续缺失,与高致病性PRRSV有相同的缺失特征;而且此21个毒株的ORF5基因推导的氨基酸序列也发生多处突变,集中出现在毒力相关位点、抗原表位和糖基化位点序列中。只有HZNJ株与疫苗株的同源性较高。进化树分析显示,21个分离株与高致病性PRRSV处在同一进化分支,而HZNJ株与疫苗毒株有较近的亲缘关系,进一步说明高致病性PRRSV已成为该地区的优势流行毒株。  相似文献   

鸭肝炎病毒A₆₆株部分cDNA文库的构建与序列分析     

赵瑞宏  张小飞  温立斌  潘孝成 《中国畜牧兽医》2007,34(9):84-86

本研究根据已发表的小核糖核酸病毒（picornavirus）核苷酸序列设计4对引物。以RNAiso Reagent试剂抽提含DHV A₆₆鸡胚尿囊液总RNA ，用TakaRa RNA PCR Kit（AMV）Ver3.0试剂盒进行RT-PCR扩增，将所得PCR产物回收并克隆于pMD18-T 载体、转化感受态细菌DH5а，利用氨苄青霉素筛选阳性克隆子, 经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切鉴定重组质粒。取重组阳性质粒进行测序，测序结果与近期GenBank登录的3株Ⅰ型DHV核苷酸序列比对，结果显示与03D株、H株、5886株鸭肝炎病毒的核酸序列同源性分别为96.8%、96.3%、96.2%，表明成功构建了DHV A₆₆ 株部分cDNA文库。  相似文献   

类猪圆环病毒 P1的感染及其分子特征     

温立斌  何孔旺  王凤芝  俞正玉  茅爱华  解建平 《华北农学报》2013,(5)

类猪圆环病毒P1是新发现的一种病原,能引起仔猪出现类似猪断奶后多系统衰竭综合征症状,是目前所知的具有最小基因组的病毒。为了解P1感染范围和基因组分子特征,采用PCR方法扩增P1全基因组,克隆测序后,应用生物信息学进行序列同源性比较及遗传进化分析。结果显示,P1已在我国猪场流行,分离株之间的核苷酸序列同源性为99．1％～100％,可分为2个亚分支;同时免疫组化结果也证实了P1在样品中的分布。  相似文献   

快速检测大肠杆菌O157的LAMP方法的建立与评价   总被引：1，自引：0，他引：1  

张雪寒  何孔旺  叶青  倪艳秀  温立斌  李彬  王小敏  周俊明  郭容利 《中国兽医学报》2013,33(7)

利用DNA环介导恒温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP),以rfbE基因为靶序列,设计LAMP引物,建立LAMP反应体系与条件,进行灵敏度和特异性试验.结果显示,整个检测过程仅需1h即可通过肉眼直接目测试验结果.在灵敏度试验中,rfbE-LAMP对O157菌液和模拟阳性样品的最低检测限分别为1CFU/mL和1 CFU/g.在特异性试验中,以其他血清型大肠杆菌以及沙门杆菌基因组DNA为模板对rfbE基因进行检测,均没有发生非特异性扩增反应.试验建立的LAMP检测方法具有操作简单安全、检测灵敏度高、特异性高的特点,能够满足基层实验室、应急检测或现场监测等方面的使用需求.  相似文献   

白介素2基因与猪圆环病毒2型ORF_2基因真核双表达质粒的构建   总被引：1，自引：0，他引：1  

潘群兴  何孔旺  温立斌  郭容利  黄克和 《南京农业大学学报》2009,32(1)

应用基因重组技术,构建猪圆环病毒2型ORF2基因与白介素2基因(IL-2) 的真核双表达载体并将其转染CHO细胞,通过RT-PCR、间接ELISA、Western-blot、间接免疫荧光检测(IFA) 等方法验证基因的表达情况.结果表明:成功构建了猪圆环病毒2型ORF2基因和IL-2基凶的真核双表达质粒pIRES-ORF2-IL-2,该质粒可在体外同时表达ORF2和IL-2.  相似文献   

类猪圆环病毒因子P1感染对猪红细胞的影响   总被引：6，自引：1，他引：5  

温立斌  何孔旺  杨汉春  倪艳秀  张雪寒  俞正玉  茅爱华 《内蒙古农业科技》2009,(2):46-48

探讨类猪圆环病毒因子P1感染后,广西巴马小型猪发生贫血的类型,推断贫血发生的原因。12头30日龄的猪随机分成两组,每组6头,试验组经腹股沟淋巴结途径接种P1分子克隆。采用自动血液分析仪对接种后3d、8d、17d、24d、31d及40d猪的外周血进行红细胞各参数检测。统计分析结果显示P1感染后,与对照组相比,红细胞参数之间无差异的指标有RBC、HGB、HCT、MCV和MCHC等5项,而MCH在接种后17d明显降低,而RDW在31d增高明显。可见,猪感染类猪圆环病毒因子P1可导致小细胞低血色素性贫血。  相似文献   

SYBR Green I荧光定量PCR检测类猪圆环病毒因子P1   总被引：3，自引：0，他引：3  

温立斌  何孔旺  杨汉春  郭容利  周俊明  钟书霖 《华北农学报》2009,24(4)

该研究旨在建立快速、敏感和特异的检测类猪圆环病毒因子 P1的 SYBR Green I 荧光定量 PCR 法,用于 P1 的早期诊断.以感染 P1 的猪血清DNA提取物为模板,采用 PCR 扩增 P1 101 bp 的基因片段,将其克隆至 pMD18-T 载体,重组质粒测序并进行同源性分析;以阳性质粒为模板,建立 SYBR Green I 荧光定量PCR检测方法,并进行敏感性和特异性检测.经测序证实扩增片段属于 P1,所建立的 SYBR Green I 荧光定量 PCR 检测 P1 的反应在 101 ～108拷贝/μL 之间具有良好的线性关系,反应的检出下限为10拷贝/μL,而对猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等的检测为阴性,表明该方法敏感、特异.成功建立了 SYBR Green I 荧光定量 PCR 检测 P1 载量的方法,为 P1 致病机制和机体免疫保护机制的研究提供了技术平台.  相似文献   

雏鸡接种新城疫Ⅱ系苗后细胞免疫状态及淋巴细胞转化试验较佳测定条…   总被引：2，自引：0，他引：2  

温立斌  陈陆均 《中国畜禽传染病》1996,(5):53-56

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鸡产蛋下降综合征河北毒株（EDS76—HC）的分离鉴定及油乳剂苗研制和应用     

杨桂芝  温立斌 《中国兽医杂志》1997,23(1):21-23

鸡产蛋下降综合征河北毒株（ＥＤＳ７６┐ＨＣ）的分离鉴定及油乳剂苗研制和应用杨桂芝温立斌崔玉苍①崔红英闫凤莲任金卓②王玉然房计锁②（河北省动物检疫站，石家庄０５００８１）产蛋下降综合征（ＥＤＳ－７６）是由腺病毒引起商品蛋鸡和种鸡产蛋率下降和卵壳形成不全...  相似文献