麝鼠克雷白氏菌和大肠杆菌的分离     

温立斌  解建平 《畜牧兽医杂志》2001,20(6):48-48

2000年5月份、河北省某养殖户饲养的麝鼠发病,我们从死亡麝鼠体内分离到克雷白氏菌和大肠杆菌.现报道如下:  相似文献   

猪圆环病毒2型和猪繁殖与呼吸综合征病毒混合感染的流行病学调查     

王小敏  何孔旺  张文文  周忠涛  茅爱华  俞正玉  温立斌  倪艳秀  张雪寒  郭容利  吕立新  李彬  周俊明 《华北农学报》2012,(Z1):390-394

研究2009-2010年我国部分地区猪圆环病毒2型(PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)混合感染的情况。采用PCR和RT-PCR方法对采集自我国安徽、江苏、山东、浙江等7省的227份组织和血清样品进行PCV2和PRRSV检测。PCV2a感染率为15.9%,PCV2b感染率为44.5%,PRRSV感染率为45.8%,其中17份样品表现为PCV2a和PRRSV的混合感染,50份样品表现为PCV2b和PRRSV的混合感染,10份样品表现为PCV2a,PCV2b和PRRSV的混合感染,分别占样品总数的7.5%,22.0%和4.4%。猪群中PCV2和PRRSV的感染比较普遍,混合感染率也较高,加重了疫病防控的难度。  相似文献   

肠出血性大肠杆菌O157∶H7 toxB基因缺失株的构建     

张雪寒  何孔旺  赵攀登  栾晓婷  叶青  温立斌  倪艳秀  李彬  郭容利  王小敏  周俊明  俞正玉  茅爱华  吕立新 《江苏农业学报》2012,(2):337-343

为了明确肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli)O157∶H7大质粒pO157编码的蛋白质ToxB与O157∶H7在肠道黏附、定殖的关系,构建含有toxB基因同源臂的重组自杀性质粒pMEG375-BN-Kan-BC,转化SM10宿主菌获得重组SM10(pMEG375-BN-Kan-BC)。将SM10(pMEG375-BN-Kan-BC)与O157∶H7进行混合培养,通过同源重组,获得杂交toxB基因缺失株。用体外接种的HEp-2细胞和体内感染链霉素处理的小鼠,明确缺失株黏附定殖能力。经PCR和Western blot鉴定,toxB基因被卡那霉素(Kan+)选择标记基因表达盒所代替。O157∶H7(△toxB)生长特性与亲本株相比无明显差异。O157∶H7(△toxB)与亲本株相比,对HEp-2细胞的黏附能力降低了2倍。口服感染小鼠后,O157∶H7(△toxB)第3 d粪便排菌量仅为3.1×105 CFU,持续排菌11 d;而亲本株排菌量高达4.03×107 CFU,持续排菌时间超过14 d。  相似文献   

猪GM-CSF基因对猪圆环病毒2型DNA疫苗诱导仔猪免疫反应的调节作用   总被引：1，自引：0，他引：1  

宋勤叶  温立斌  杨汉春  郭鑫  陈艳红 《中国预防兽医学报》2007,29(2):120-125

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）能够诱导树突状细胞的成熟和存活，并提高其抗原递呈功能，是非常有潜力的分子佐剂之一。为了探讨猪GM-CSF对猪圆环病毒2型（PCV2）DNA疫苗诱导免疫反应的调节作用，本研究将表达猪GM-CSF和PCV2衣壳蛋白的重组质粒混合物（pcDNA3．1-gm-csf和pcDNA3．1-orf2）及在同一载体上表达PCV2衣壳蛋白与猪GM-CSF的双表达重组质粒（pIRES-orf2／gm-csf），分别接种于7日龄健康仔猪，共肌肉注射3次，每次间隔2周。结果表明猪GM-CSF基因能够明显增强PCV2DNA疫苗诱导的特异性体液免疫反应，提高外周血淋巴细胞（PBLC）对ConA刺激的增殖活性，增强NK细胞的杀伤功能，影响细胞因子IL-12、IFN-γ、IL-4和IL-10的表达水平。但GM-CSF基因单独表达和与PCV2衣壳蛋白基因在同一载体上表达，对上述4个细胞因子表达的影响有一定差异。  相似文献   

猪圆环病毒2型ORF1部分位点突变对病毒复制能力的影响     

李荷然  肖琦  温立斌  朱雪蛟  芮荣  何孔旺 《畜牧与兽医》2024,(1):71-76

猪圆环病毒2型(PCV2)可引起断奶仔猪多系统衰竭综合征,导致仔猪逐渐消瘦。PCV2 ORF1表达的Rep蛋白及其剪切体Rep′是PCV2复制所需的重要蛋白。为了研究PCV2 ORF1部分位点对PCV2复制能力的影响,本试验通过构建PCV2 ORF1区域点突变双拷贝感染性克隆质粒,在无PCV2污染的PK-15细胞中进行病毒拯救,使用荧光定量PCR检测不同位点突变病毒培养不同代次上清液的Ct值。结果：将PCV2 Rep的17 aa、19 aa、20 aa和21 aa突变为丙氨酸后病毒无法成功拯救,2 aa突变后严重影响病毒的复制能力,3 aa、5 aa和18 aa突变后病毒的复制能力增强且细胞病毒载量高于PCV2原毒株,推测17 aa、19 aa、20 aa和21 aa是影响PCV2复制的关键作用位点。本研究结果为未来PCV2复制相关研究提供了试验依据。  相似文献   

正常屠宰猪致病性猪链球菌7型的鉴定和特性研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

茅爱华  倪艳秀  吕立新  俞正玉  周俊明  胡东波  温立斌  张雪寒  郭容利  李彬  王小敏  何孔旺 《江苏农业科学》2011,39(5)

从江苏某地正常屠宰猪扁桃体分离到1株细菌,命名为HA100111.该细菌呈链球菌的特征形态,药敏试验表明该菌株对多种抗生素有耐药性.经PCR及序列分析,确定该分离菌株为猪链球菌7型,其毒力因子基因型为gdh +/mrp -/epf-/sly -/orf2 +/fbps+.动物致病性试验表明,该菌对ICR小鼠和新西兰兔有较强的致病性,对ICR小鼠半数致死量为2.67 ×107 CFU,但是对仔猪无明显致病作用.得出结论,在正常猪扁桃体中可携带致病性的猪链球菌7型.  相似文献   

正常屠宰猪致病性猪链球菌9型的鉴定和特性研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

倪艳秀  茅爱华  俞正玉  吕立新  温立斌  张雪寒  郭容利  周俊明  何孔旺 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2009,30(1)

从江苏某地正常屠宰猪扁桃体分离到1株细菌HA070725,呈链球菌的特征形态,β溶血,药敏试验表明该菌对多种抗生素产生耐药性.经PCR及序列分析,为猪链球菌9型.其毒力因子基因型为mrp-/epf-/sly-/orf2+/gdh+/fbps+/impdh+.动物致病性试验表明,该菌对ICR小鼠和断奶仔猪有较强的致病性,对ICR小鼠的半数致死量为2.67×106cfu.结果表明:在正常猪扁桃体中可携带高致病性的猪链球菌9型.  相似文献   

肠出血性大肠杆菌O157:H7Tir基因的克隆、表达及生物学活性研究     

张雪寒  何孔旺  茅爱华  周俊明  俞正玉  温立斌  倪艳秀  郭容利  吕立新 《中国农业科学》2010,43(12)

【目的】克隆、表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7转位紧密素受体(Tir)基因,并研究其抗原性。【方法】选用pET28原核表达载体,体外构建Tir原核表达重组菌,并在大肠杆菌中获得高效表达。选用家兔制备高滴度多克隆抗体,Western blot分析其免疫原性。选用HEp-2细胞进行粘附和粘附抑制试验,通过光镜、电镜和荧光显微镜进行观察。选用Balb/c小鼠进行免疫试验。【结果】成功获得高效表达重组Tir蛋白,并制备了兔源Tir多克隆抗体,Western blot分析此抗体能与Tir发生特异性抗原抗体反应。表达Tir蛋白能够抑制O157:H7对HEp-2细胞的粘附和A/E损伤。二免后Balb/c小鼠保护率高达75%以上。【结论】在大肠杆菌中成功克隆表达了Tir基因,所获重组Tir蛋白具有良好的抗原性,可能用于肠出血性大肠杆菌O157基因工程疫苗的研究。  相似文献   

一株类猪圆环病毒2型因子P1的全基因组序列测定与分析   总被引：1，自引：1，他引：0  

温立斌  何孔旺  杨汉春 《中国农业科学》2010,43(2):411-416

【目的】确定猪体内存在与猪圆环病毒2型核苷酸序列高度同源的因子。【方法】首先利用PCR方法对来自临床表现为猪断奶后多系统衰竭综合征的猪血清所抽提的DNA进行扩增,根据获得的序列再设计引物进行反向PCR,拼接得到类猪圆环病毒2型因子P1的全基因组序列,最后根据P1全基因组序列设计引物扩增其全基因组加以验证。【结果】首次完成了类猪圆环病毒2型因子P1的全基因组序列测定。测序结果表明P1因子为环状DNA基因组,全长648个核苷酸,包括3个开放阅读框。除5′端16个核苷酸外,P1因子与国内猪圆环病毒2型BF毒株的核苷酸同源率为98.42%。系统进化分析表明P1与猪圆环病毒有很近的亲缘关系。【结论】猪体内存在类猪圆环病毒2型因子P1。  相似文献   

鸡衣原体病的诊断     

温立斌  解建平 《中国预防兽医学报》1996,(4)

我们从患心包炎、肝炎、脾炎的鸡中分离到了鹦鹉热衣原体。现将诊断结果报告如下。1 发病情况 河北省石家庄市某养鸡专业户饲养的500只50日龄罗曼鸡,从6月下旬陆续发病40只,病鸡表现食欲减退,精神沉郁,严重的水样腹泻,逐渐消瘦死亡,病程一般在7天以上,死亡率约3％。2 解剖变化 病死鸡极度消瘦,胸肌萎缩,肛门周围有  相似文献