犊牛腹泻大肠杆菌LEE和HPI毒力岛相关基因的检测     

方光远  范红结  张玉红  张姝  陈钟鸣  顾亚凤  何小明 《金陵科技学院学报》2008,24(2)

采用多重PCR方法检测南京部分地区分离的110株犊牛腹泻大肠杆菌中肠细胞脱落位点毒力岛(LEE)和强毒力岛(HPI).对LEE毒力岛检测其核心区的ler和eaeA基因,对HPI毒力岛检测其irp2和fyuA基因.同时对LEE和/或HPI阳性大肠杆菌进行了O血清型的鉴定.在分离的110株犊牛腹泻大肠杆菌中,具有LEE和/或HPI毒力岛的菌株33株,占30%(33/110).LEE毒力岛基因检测结果为9.1%(10/110)的菌株ler和eaeA基因的扩增阳性.HPI毒力岛基因检测结果为25.5%(28/110)的菌株irp2和fyuA基因扩增阳性.0.9%(1/110)的菌株irp2阳性.5.5%(6/110)的菌株irp2、fyuA、ler和eaeA基因扩增都为阳性.在33个LEE和/或HPI毒力岛阳性分离株中,O78和O36血清型菌株分别占定型菌株的34.6%(9/26)和27%(7/26).9.1%的犊牛腹泻大肠杆菌携带LEE,25.5%的菌株携带耶尔森菌HPI,O78和O36为牛源携带LEE和/或HPI毒力岛大肠杆菌常见血清型.  相似文献   

多重RT-PCR区分PRRSV变异株和经典株方法的建立     

张志成  范红结  陈钟鸣  戴鼎震  何小明 《金陵科技学院学报》2010,26(2):85-88

根据GenBank发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒经典株和变异株基因序列,设计合成了2对引物,分别扩增NSP2和NSP9部分基因片段,建立了一种一次反转录后多重PCR鉴定区分PRRSV变异株和经典株的方法。该方法扩增PRRSV变异株时可获得380bp的特异性片段,扩增PRRSV经典株时则获得380bp和680bp两条特异性片段,根据RT—PCR产物可将两者区分开来。试验证明该方法具有敏感性高、特异性好的特点,是一种快速准确检测PRRSV的方法。  相似文献   

安徽省黄淮白山羊衣原体病的血清学调查   总被引：1，自引：1，他引：0  

来景辉  范红结 《中国农学通报》2014,30(11):26-28

为了掌握安徽省黄淮白山羊衣原体病的流行情况,本次调查采用间接血凝(IHA)试验对主要养殖区的11个县（市）621份山羊血清进行了衣原体抗体检测。结果显示：11个县（市）均有不同程度的感染,血清抗体平均阳性率为16.7%(104/621);对不同送检地区、不同年龄的山羊和不同状况母山羊的衣原体抗体阳性率进行了统计分析。结果表明：安徽省主要养殖区的黄淮白山羊普遍存在衣原体感染。  相似文献   

副猪格拉瑟菌5型细胞致死性膨胀毒素CdtB破坏猪呼吸道上皮屏障的机制     

陈敏  刘明星  张鹏云  蔺辉星  范红结 《畜牧兽医学报》2023,54(1):304-316

旨在探究副猪格拉瑟菌(Glaesserella parasuis,GPS)突破猪呼吸道上皮屏障引起系统性感染的机制。通过超速离心和密度梯度离心提取副猪格拉瑟菌外膜囊泡(outer membrane vesicles, OMVs),OMVs经SDS-PAGE显示，蛋白质条带分布在55～100 ku,经透射电子显微镜(TEM)观察，OMVs的粒径在100～200 nm,纳米粒子直径分析(NTA)结果显示，样品在100～200 nm处的粒子数目最多。进而用制备的HbpA及OmpP2多克隆抗体对OMVs及不含OMVs的细菌上清进行Western blot验证，证实所提取的样品为外膜囊泡，且进一步结果证明细胞致死性膨胀毒素(CDT)在GPS培养物中主要以OMVs的形式存在。用OMVs或CdtB处理猪气管上皮细胞(swine tracheal epithelial cells, STEC)36 h,检测STEC中cleaved-caspase3、ZO-1和Occludin的蛋白表达水平，并用FITC-葡聚糖(FD-4)检测STEC单层细胞的细胞旁通透性。结果发现，OMVs与CdtB处理后凋亡相关蛋...  相似文献   

OppA对副猪格拉菌突破猪呼吸道上皮屏障的影响     

刘明星  张鹏云  陈敏  蔺辉星  周红  范红结 《畜牧与兽医》2022,(6):97-103

为了探究寡肽结合蛋白OppA在副猪格拉菌(Glaesserella parasuis, GPS)突破猪呼吸道上皮屏障过程中的作用，采用自然转化法构建副猪格拉菌HPS5-SQ的oppA缺失株ΔoppA,并通过测定ΔoppA在不同培养基中的生长曲线、黏附猪气管上皮细胞(swine tracheal epithelial cells, STEC)、穿透猪呼吸道上皮屏障、损伤紧密连接蛋白等能力来判定OppA对GPS定殖和突破猪呼吸道上皮屏障的影响。结果显示：通过PCR和Western blot验证，试验成功构建了ΔoppA,表达的重组OppA具有结合血红素功能；ΔoppA和HPS5-SQ野生株在TSB培养基中生长速度相当，黏附STEC能力没有差异；在加入血红素DMEM中，野生株的生长速度比ΔoppA快，对猪呼吸道上皮屏障破坏和紧密连接蛋白损伤能力比ΔoppA强。结果表明：OppA摄取血红素促进GPS生长，进而加速猪呼吸道上皮屏障损伤。  相似文献