2016～2018年江苏省规模猪场PRRS血清学调查     

蔡丙严  戴建华  田其真  郝福星  范红结 《中国动物传染病学报》2019,(4):92-97

为了解2016年1月~2018年12月期间江苏省规模猪场猪繁殖与呼吸障碍综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)流行动态,本研究对该省27家规模猪场不同批次送检的2062份未免疫PRRS疫苗血清样本,采用ELISA方法进行了猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)抗体检测,并对抗体阳性率≥80%的猪群阶段,依据PRRSV抗体S/P分布频段选取135份血清,采用RT-qPCR方法检测并统计PRRSV阳性率,进行血清学调查。结果显示,27家未免疫PRRS疫苗猪场抗体总阳性率为68.82%。不同地区抗体阳性率较高的为宿迁和南通,分别为72.04%和71.09%,连云港地区最低为58.82%。2016~2018年呈现逐年下降的趋势,从76.41%下降至57.72%。不同猪群阶段中以公猪、后备母猪、12~16周龄育肥猪和18~25周龄育肥猪抗体阳性率较高,分别为80.95%、92.86%、86.84%和98.09%。在上述4个抗体阳性率≥80%的猪群阶段,RT-qPCR检测结果显示,24份PRRSV阳性血清样本C t值与抗体S/P值高低无相关性。血清中PRRSV阳性率以后备母猪最高为20.58%,在PRRSV抗体S/P值<0.4和S/P值≥2.5异常分布频段,血清PRRSV阳性率均≥15.38%,而0.4≤S/P值<2.5正常范围内PRRSV阳性率均≤10%,差异显著,具有统计学意义(P<0.05)。表明江苏省规模化猪场不同地区、不同规模和不同阶段猪群普遍存在 PRRSV 感染,该研究结果为规模猪场PRRS的防控提供了参考。  相似文献   

犬瘟热病毒核衣壳蛋白基因在昆虫细胞中的表达及其抗原性分析     

毕振威  王永山  范红结 《中国兽医寄生虫病》2011,19(5):21-26

将非典型犬瘟热病毒（Canine distemper virus,CDV）的核衣壳蛋白（nucleocapsid protein,N）基因克隆到杆状病毒表达系统供体质粒pFastBacHTA中,构建含N基因的重组供体质粒pFastBac-N,转化E.coli DH10Bac感受态细胞,经筛选获得含N基因的重组Bacmid DNA（rBacmid-N）,脂质体法转染昆虫细胞Sf9,获得重组杆状病毒vBacmid-N。用vBacmid-N感染昆虫细胞Sf9,免疫印迹（Western blot）分析,在62kDa处出现一条特异蛋白条带,与重组N蛋白的理论值相符合;间接免疫荧光试验（indirect immunofluorescent assay,IFA）检测,vBacmid-N感染的昆虫细胞sf9出现特异绿色荧光。以纯化的重组N蛋白为抗原建立CDV抗体间接ELISA检测方法,犬CDV阳性血清A450大于0.40,而犬CDV阴性血清A450小于0.05,显示了良好的抗原特异性与稳定性。  相似文献   

猴痘研究进展     

张睿  陈国强  张敬友  朱娜  薛峰  范红结 《中国动物检疫》2011,28(9):71-73

猴痘是一种以皮肤出疹为特征的病毒性人畜共患传染病,通过直接密切接触,由动物传染给人,并可在人与人之间传染。其主要发生于中非和西非的热带雨林,在美国也曾暴发过。虽然在我国至今尚无猴痘的报道,但未雨绸缪,做好技术储备,很有必要。  相似文献   

C57BL/6小鼠感染猪链球菌2型后脾脏消减cDNA文库的构建及差异基因分析     

谢正露  沈学怀  殷复建  刘琳  马海田  范红结 《江苏农业科学》2012,40(4):19-26

探讨C57BL/6品系小鼠体内猪链球菌2型感染后的差异表达基因,以期为进一步研究猪链球菌的致病机制和抗病性研究提供重要的参考依据.利用抑制性消减杂交技术构建了8周龄C57BL/6小鼠感染猪链球菌2型后的脾脏消减cDNA文库.对获得的237个阳性克隆进行测序,利用GenBank BLAST分析核酸和蛋白质同源性,共获得159条差异表达序列标签(ESTs).试验结果证实,正向文库有34个、反向文库有30个不同的基因与ESTs具有高度的同源性,它们分别是免疫性能、细胞组分、细胞信号分子、转录因子等的重要功能基因产物.经抑制消减杂交筛选出的差异表达基因主要有免疫球蛋白IgM重链-6、胸腺素4- beta、磷酸酶张力结合蛋白、转磷酸胆碱酶、肽酰-脯氨酰-顺反式异构酶、磷脂酰丝氨酸脱羧酶、胰岛素样生长因子结合蛋白-3等基因.筛选到较多EST与抗病性相关的重要基因具有很高的同源性,且这些基因在猪链球菌2型感染后的表达具有显著差异,提示这些基因在猪链球菌2型感染过程中发挥着重要功能.  相似文献   

嗜水气单胞菌蓖种的限定代次及保存条件研究     

范红结  陆承平 《南京农业大学学报》2000,23(4):89-92

将嗜水气单胞菌（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ,Ａｈ）Ｊ－１菌株第５代菌种通过鲫鱼体内复壮后,制备基础种子。将基础种子在普通营养琼脂培养基上连续伟至１０代,分别测第１代和第１０代的培养特性、免疫原性以及其毒力;同时,对Ａｈ菌种的保存条件进行了优化。结果嗜水气单胞菌菌种在１～１０代之间,其培养特性、免疫原性以及毒力完全相同,表明嗜水气单胞菌基础种子的使用限定代次至少可达１０代。Ａｈ菌种以１５％甘油肉汤、－２０℃保存为佳,保存期可达两年。  相似文献   

传染性法氏囊病病毒感染细胞内源性microRNA表达差异分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

欧阳伟  王永山  王永强  王笑梅  朱向东  毕振威  范红结 《中国兽医学报》2012,32(3):329-336

细胞内源性microRNA（miRNA）在宿主与病原相互作用过程中发挥着重要的调节功能。为了分析细胞内源性miRNA与传染性法氏囊病病毒（IBDV）的相互作用,用IBDV弱毒和强毒分别感染鸡胚成纤维细胞（CEF）和SPF鸡,24h后,取感染CEF和法氏囊组织,提取细胞总RNA,用Hy3/Hy5双色荧光标记,与miRNA芯片杂交,进行芯片内标准化、芯片间标准化、表达差异比较以及聚类分析。结果显示：在IBDV弱毒感染的CEF中,有17个细胞内源性miRNA表达上调,17个miRNA表达下调;在IBDV强毒感染的鸡法氏囊组织细胞中,有30个细胞内源性miRNA表达上调,18个miRNA表达下调。根据表达差异显著的miRNA序列设计引物,用荧光定量RT-PCR方法验证芯片检测结果,2种方法的检测结果一致。结果表明,IBDV感染可诱导细胞内源性miRNA表达变化,这些上调或下调的miRNA能调控细胞内多种代谢和信号传导途径发生异常,引起细胞及组织器官发生病理学变化。  相似文献   

卡介菌多糖核酸缓解内毒素诱发大鼠乳腺炎的机制研究     

苗晋锋  马海田  贾雪波  范红结  邹思湘 《中国农业科学》2010,43(18):3869-3875

【目的】为探讨卡介菌多糖核酸(polysaccharide nucleic acid fraction of Bacillus Calmette Guerin,BCG-PSN)对内毒素(endotoxin or lipopolysaccharide,LPS)诱发实验性动物乳腺炎的保护机制,【方法】72只清洁级SD大鼠被随机分成实验组和对照组(n=36)。确定怀孕14d起,隔日左后腿胫骨前肌肌内注射BCG-PSN(实验组)或灭菌生理盐水(对照组)0.33mL/只,连续5次;产后72h经乳头管灌注LPS10μg/侧到第4对乳腺(两侧)内。分别于灌注前(定义为0h)及灌注后3、6、9、12和24h(n=6)颈静脉放血处死动物,采集样品。【结果】组织病理学观察显示,BCG-PSN加快了LPS诱发炎症的组织修复进程,促进了炎症后期泌乳量的恢复。定量RT-PCR结果显示,BCG-PSN能降低乳腺组织中Toll样受体-4(toll-like receptor-4,TLR-4)mRNA表达水平,实验组与对照组相比,第6、9、24h差异显著。酶活性检测结果显示,诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOs)活性在乳腺组织中和血清中变化规律相反;组织中酶活性,实验组和对照组分别在6、9h达到最高,血清中活性分别在6、3h最低。放射免疫检测结果显示,同对照组相比,BCG-PSN使乳腺组织中炎症相关细胞因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的分泌极值降低,极值出现时间提前,而血清中未表现出明显的变化。【结论】BCG-PSN可能通过降低TLR-4的表达,抑制炎性细胞因子及酶的过度分泌,缓解LPS及相关因子(TNF-α、iNOs)对乳腺组织的损伤。  相似文献   

金华地区猪圆环病毒病病原流行病学调查     

吴瑗  范红结  李君荣  王燕丽  张晓菊 《家畜生态学报》2010,31(6)

试验从2008年12月至2010年3月期间采集金华地区部分猪场疑似PCV2感染症状病料102份,采用PCR技术,利用所设计合成的一对PCV2型特异性引物,对病料中的PCV2目的片段进行扩增检测,试验结果显示平均阳性率为59.80%;然后对PCV2阳性病料进行混合感染检测,结果显示病料中一定程度地感染了PRV、PRRSV以及PPV,且混合感染比单纯感染占更大比例,其中二重感染以PCV2与PRRSV混合感染最高;三重感染以PCV2、PRRSV和PRV三者感染最高.  相似文献   

犊牛腹泻大肠杆菌LEE和HPI毒力岛相关基因的序列测定及分析、     

方光远  范红结  张玉红  陈钟鸣  顾亚凤  张志成 《金陵科技学院学报》2008,24(4)

将PCR方法扩增出的犊牛腹泻大肠杆菌Ler、eaeA、irp2和fyuA基因片段产物进行胶回收,连接到pMD18-T Vector上转化DH5α感受态细胞后送TaKaRa公司测序。结果表明犊牛腹泻大肠杆菌Ler、eaeA、irp2和fyuA基因片段的PCR扩增产物分别是196 bp、552 bp、301 bp、953 bp。用DNAStar软件对犊牛腹泻大肠杆菌Ler、eaeA、irp2和fyuA基因片段序列与GenBank中报道的相应参考菌株各基因片段进行核苷酸同源性比较分析,同源性高达88.3%~100%,说明上述4个基因片段具有较高的同源保守性。  相似文献   

细胞糖酵解对猪流行性腹泻病毒复制的影响     

吴冰  季霖  徐雅雯  唐泰山  杨龙圣  何召庆  范红结  蔺辉星 《畜牧与兽医》2024,(3):113-117

为研究猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染细胞后,细胞糖酵解的变化及其对PEDV复制的影响,本试验通过实时荧光定量PCR和Western blot检测PEDV感染猪小肠上皮细胞IPEC-J2后36 h糖酵解相关酶己糖激酶2(HK2)的表达水平,然后通过添加糖酵解抑制剂2-脱氧-D-葡萄糖(2-DG)来进一步验证细胞糖酵解对PEDV复制的影响,最后检测了正常浓度葡萄糖(5.5 mmol/L)和高浓度葡萄糖(11.1 mmol/L和22.2 mmol/L)培养条件下PEDV复制情况来探究葡萄糖浓度对PEDV复制的影响。结果表明,PEDV感染显著增加糖酵解限速酶HK2的表达,PEDV感染可增强IPEC-J2细胞的糖酵解,细胞糖酵解水平增强有利于PEDV的复制。在一定范围内提高葡萄糖浓度可促进PEDV复制。研究结果为初步阐明PEDV感染机制以及冠状病毒病的综合防控提供了理论依据。  相似文献