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猪细小病毒S—1毒株的分离和鉴定(二) 总被引：1，自引：0，他引：1
S一1毒株在猪肾原代细胞第1～10代之间共进行36次传代,培养物的平均HA价>384,第6代以后对细胞的最小感染量稳定在10~(-6)～10~(-7)之间,第5代PK细胞传代毒在-25℃～-30℃保存180天毒价保持10~(-5)不变,死产胎猪组织(S—1毒株分离猪)在用同样温度保存300天能重复分离到病毒,S—1毒株PK传代毒能适应于胎猪睾丸细胞株(ST)增殖,毒价达1O~(-7),以比利时荧光抗体柒色ST细胞培养物和用比利时PPV阳性血清对ST细胞传代毒作HI测定,进一步证实分离物的特异性。用PK细胞传代毒感染HI抗体阴性怀孕头胎母猪能产生明显的抗体反应。3头感染母猪中,1头(用口服途径攻毒)在感染后2～4天间出现排毒现象;从另一头母猪(用肌肉注射途径攻毒)的胎儿中分离到病毒,证实经胎盘感染的发生。 相似文献
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猪细小病毒S-2毒株的分离和鉴定 总被引：2，自引：0，他引：2
应用仔猪肾原代细胞(PK)或胎猪睾丸细胞株(ST)从7窝木乃伊胎猪组织悬液中分离到猪细小病毒,定名S-2毒株,该株6组病毒的PK或ST培养物对组织培养的最小感染量达到10~(-7),有的可达10~(-8)。S-2毒株的组织培养液能凝集豚鼠红血球,此种血凝活性能被比利时PS-1阳性血清所抑制。盖玻片组织培养物用比利时荧光抗体染色时,可见明亮的绿色核内荧光,证实S-2毒株与比利时PPV的同一性。HI试验证明,分离到S-2毒株的胎猪的7头母猪血清均能抑制S-1毒株的血凝活性。 相似文献
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猪细小病毒（Porcine Parvovirus,PPV）血凝抑制试验抗原、阳性血清和阴性血清在猪细小病毒制品的效力检验中不可或缺,对猪细小病毒相关生物制品的质量控制至关重要。试验采用PPV 7909株病毒同步接种PK-15细胞制备血凝抑制试验抗原,用制备的抗原乳化后免疫豚鼠制备阳性血清,同时用未免疫的阴性豚鼠制备阴性血清。对抗原、阳性血清和阴性血清进行鉴定,结果表明,制备的PPV血凝抑制试验抗原HA效价达1:512;阳性血清HI效价达1:1024;阴性血清HI效价＜1:8,且特异性均良好。利用制备的血凝抑制试验抗原、阳性血清与不同PPV疫苗株的灭活抗原、阳性血清进行交叉反应试验,结果表明,制备的抗原与阳性血清具备良好的血清学交叉反应性,可用于PPV制品的统一评价。 相似文献
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猪细小病毒自然弱毒N株遗传稳定性研究 总被引：3，自引：1，他引：2
本研究将PPV-N株通过敏感猪三代、猪肾传代细胞25代,测定该毒株对敏感猪的致病性,结果表明将PPV-N株连续分别通过PPV HI抗体阴性的4月龄小猪、后备母猪、怀孕母猪三代,均未从试验猪检出病毒血症和分离到病毒,且母猪产仔正常。在IBRS-2细胞中连续传代,随着传代次数的增加其细胞病变未见异常,毒价稳定在103.5TCID50/mL。将第1、5、10、15、20、25代病毒培养物接种PPV HI抗体阴性怀孕母猪,未从母猪测出病毒血症和检出病毒,所产仔猪PPV HI抗体阴性,未从弱仔猪脏器分离到病毒,说明该毒株毒力不返强,具有良好的遗传稳定性。这为该弱毒株成为一株良好的自然弱毒疫苗株提供了依据。 相似文献
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猪细小病毒自然弱毒N株的免疫原性研究 总被引：1，自引：0，他引：1
用PPV-N株接种抗体阴性后备母猪,5天产生HI抗体,7天达到保护性水平(＞1∶256),14天达高峰.用该毒株对4月龄猪、后备母猪和怀孕母猪进行免疫原性试验,结果攻毒后5、7、9天未检测到病毒血症和未分离到病毒.攻毒后第40天剖杀2头怀孕母猪,见胎儿正常,胎儿心血HI抗体阴性,从胎儿脏器未分离出病毒.自然分娩的母猪,产仔正常,仔猪吃初乳前HI抗体阴性,而对照猪攻毒后产生病毒血症,并产下不同组合异常仔,从死胎儿脏器分离到病毒,活仔HI抗体阳性.试验还表明豚鼠对PPV-N株的抗体应答和猪的相似,可作为PPV弱毒株免疫抗体应答检测的实验动物.本研究结果证明,PPV自然弱毒N株具有良好的免疫原性. 相似文献
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为观察猪流行性腹泻病毒(PDEV)的血凝特性,进而为建立PEDVHA和HI试验,评估疫苗免疫抗体水平奠定基础,将CV777、DR13、YN13和YN144共4株PEDV毒株,在37℃下,分别用0、5、10、50、100μg/mL胰蛋白酶处理30min,然后用鸡、兔和猪红细胞进行血凝(HA)试验;用已经鉴定为PEDV抗体阳性的血清和乳清分别进行血凝抑制(HI)试验。结果显示:4株PEDV毒株只与兔红细胞发生凝集反应;CV777、DR13毒株的HA现象需要用5μg/mL的胰蛋白酶进行预处理,但是YN13和YN144毒株的HA现象不需要胰蛋白酶作用;该凝集现象能够被PEDV抗体特异性抑制。结果表明,PEDV能够凝集兔的红细胞,不能凝集鸡和猪的红细胞,因而可以用兔红细胞建立PEDV的HA和HI试验方法。 相似文献
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《中国兽医学报》2019,(11):2101-2106
猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)和伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)均可引起母猪的繁殖障碍疾病。本试验以PRV基因工程弱毒株rPRVSMX为载体,构建了表达PPV流行毒株VP2基因的重组PRV(rPRVSMX-VP2)。Western blot和IFA试验均证明了重组病毒在细胞中成功表达了VP2蛋白。动物试验结果证明重组病毒可以诱导猪体产生特异性的PPV抗体,首免后40 d血凝抑制抗体(HI)为1∶192±73.9,虽然低于PPV商品化灭活疫苗免疫后所产生的HI抗体,但此时免疫系统被认为是激活的水平;重组病毒诱导产生的PRV抗体与载体毒株rPRVSMX诱导产生的抗体相当。由此可见该重组毒株经过优化后,可以作为二联疫苗的候选毒株防控猪伪狂犬病和细小病毒病。 相似文献
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猪细小病毒N株的生物学和免疫学特性研究 总被引：16，自引：0，他引：16
猪细小病毒N株是从广西初产母猪所产死胎脏器分离的自然弱毒株。用这个毒株接种PPV HI抗体阴性的四月龄小猪和怀孕14～23天的后备母猪进行安全性试验,结果无任何异常临床症状、病毒血症和同居感染,母猪分娩正常,初生仔猪在吃初乳前HI抗体阴性。该毒株免疫的小猪、后备母猪和怀孕母猪,完全能抵抗猪细小病毒强毒攻击,攻毒后49天剖杀母猪,结果胎儿正常,胎儿心血HI抗体阴性,取胎儿脏器未分离出病毒,分娩母猪产仔正常,仔猪吃初乳前HI抗体阴性。而对照猪攻毒后产生病毒血症,产下不同组合异常仔,并从死胎儿脏器分离出病毒,健活仔猪吃初乳前能测出HI抗体。从而证明用N株作为弱毒苗能防止由猪细小病毒引起的繁殖障碍性疾病。 相似文献
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《中国兽医学报》2015,(7)
为制定猪细小病毒病弱毒疫苗效力检验的标准,用3批猪细小病毒病弱毒疫苗进行接种猪与接种豚鼠的平行试验;同时进行临床免疫试验。3批疫苗接种豚鼠和猪后定期进行PPVHI抗体检测;猪于免疫后攻毒,并进行病毒分离。免疫母猪在怀孕早期进行强毒攻击,40d扑杀进行病毒分离。用3批疫苗免疫后备母猪统计产仔成绩。结果显示,豚鼠接种后21d、猪接种后7d全部产生抗体反应。免疫攻毒的猪均未从血浆和内脏中分离到病毒,而从对照猪分离到病毒;怀孕母猪强毒攻击后扑杀,胎儿病毒分离均为阴性,而对照猪胎儿病毒分离为阳性;统计数据表明免疫猪的产仔成绩比未免疫猪高,平均每窝多产活仔1.85头,少产死胎木乃伊胎0.65头。结果表明,当免疫豚鼠PPV HI≥64时,免疫猪能抵抗PPV强毒攻击,两者呈正相关;免疫母猪的攻毒试验表明免疫母猪能抵抗PPV经胎盘感染;临床免疫试验证明疫苗具有良好的免疫原性和安全性。 相似文献
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猪细小病毒体外培养适应毒株的培育及动物感染试验 总被引：1，自引：0，他引：1
从初产母猪流产胎儿的肠系膜淋巴结中分离到一株猪细小病毒(PPV),采用无污染的猪睾丸传代细胞系(ST)对该毒株传代,培育成一株细胞适应毒株,命名为PPV-HJ毒株。该毒株经ST细胞连续传50代,于第25代起毒价显著提升,第40代毒价维持稳定(107.2 TCID50/mL)。用免疫过氧化物酶单层细胞染色试验(IPMA)检测表明,病毒感染的阳性细胞染成棕红色,病毒抗原主要分布在细胞核中。免疫电镜观察到PPV粒子呈球状,直径约21nm。基因克隆测序证实,该毒株的NS1基因序列与GenBank中PPV-ZJ毒株同源性最高,达98.41%。用该毒株第50代培养物(1×107.2 TCID50/mL)接种35日龄仔猪,未表现出明显的临床症状,剖检未观察到明显的病理学变化,PCR法在猪的肺脏、扁桃体、腹股沟淋巴结、下颌淋巴结、小肠中检测到病毒核酸,表明该毒株对易感动物具有一定的感染性。本研究成功地培育出一株PPV体外细胞培养适应毒株,其繁殖性能稳定,为今后开展PPV与猪圆环病毒2型(PCV-2)混合感染的协同致病性研究,以及联合疫苗的研制奠定了基础。 相似文献
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高岭土处理被检血清,4单位抗原及0.6％豚鼠红细胞做血凝抑制(HI)试验诊断猪细小病毒病是比较适宜的条件。用此法对七种猪传染病抗血清进行检查,均不产生非特异性血清学反应。用滤纸吸附被检猪血液(简称血纸)与分离血清做HI比较试验,两者的HI价无大差异。与日本PPV毒株90HS抗原进行比较,两者的HI价一致。 相似文献
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猪细小病毒细胞适应株的培育及鉴定 总被引：3，自引：0，他引：3
从临床表现为皮炎消瘦症状的仔猪肝脏中分离到1株病毒,经聚合酶链式反应（PCR）证实为猪细小病毒（PPV）,采用仔猪原代肾细胞和传代ST细胞分离培养,经蚀斑克隆纯化,培育1株ST传代细胞培养适应毒株,命名为PPV-BQ2007株。免疫过氧化物酶单层细胞试验（IPMA）检测病毒抗原主要分布在细胞核及细胞质内。病毒感染细胞可被已知PPV阳性血清中和。免疫电镜可清晰见到聚集成团的大小不一的病毒粒子,近似圆形,无囊膜,直径大小约20nm-22nm。该分离株经ST细胞培养传代,能够产生典型的细胞病变,病毒滴度随代次显著增加,第30代后毒价达10^7 TCID50/mL以上,且毒价和血凝价稳定。测序结果表明PPV-BQ2007株VP2基因与NCBI公布的皮炎型毒株Kresse株的同源性最高,达99.8％,在系统进化分支上处于同一个分支。PPV-BQ2007株传代细胞培养适应株的成功培育和鉴定,为进一步开展该病毒流行病学、致病机理、疫苗免疫与诊断研究等奠定了良好基础。 相似文献
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猪细小病毒(PPV)强毒，在1～5日龄仔猪肾原代细胞上传代，传至20代左右毒力下降。为保持PPV强毒的毒力，我们用一头妊娠母猪(妊娠48d)做剖腹术。用大剂量的PPV细胞培养物注入猪胎儿的羊膜腔内，人工感染猪胎儿，病毒通过猪胎儿体内的组织进行复制，使毒力增强。术后12d迫杀母猪，取胎儿分离PPV强毒。 相似文献
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1983年我们在上海地区分离到猪细小病毒(PPV),并进行了鉴定,结果见以前的报告。 1984年起,我们和嘉定县种畜场协作又进行了猪细小病毒灭活疫苗的研究,研制成一种灭活疫苗,现将研究结果简述如下。一、灭活苗的制备用上海分离的PPV S-1毒株的猪睾丸(ST)传代细胞株适应毒作为制苗用种毒,用转瓶培养技术增殖ST细胞,当瓶壁的2/3～3/4长满单层时接种病毒,37℃培养,待50％细胞出现病变时收获培养液作血球凝集试验 相似文献
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猪流行性腹泻病毒分离鉴定及其灭活疫苗免疫保护效果研究 总被引：5，自引：0，他引：5
为筛选能用于猪流行性腹泻病毒(PEDV)疫苗研发的流行毒株,收集PEDV阳性病料,以Vero细胞进行病毒分离试验,并对分离毒株进行外源病毒检测、病毒培养特性研究、仔猪毒力试验及免疫效力试验等。9份PEDV阳性病料共分离到3株病毒,分别命名为PEDV-SC12、PEDV-JS12、PEDV-JX12。其中PEDV-SC12株存在支原体污染;PEDV-JS12株与PEDV-JX12株均能被PEDV特异性阳性血清中和;PEDV-JS12株能在Vero细胞上增殖并产生细胞病变,但适应细胞45代以后病毒培养效价仍然偏低;PEDV-JX12滴度能维持在106.0 TCID50/mL以上。PEDV-JX12株毒力试验显示,该分离株能够通过人工感染复制出腹泻病例,并能从发病动物体内检测到感染的病毒。免疫攻毒保护试验显示,以PEDV-JX12株制备的灭活疫苗免疫母猪,对所产仔猪攻毒后免疫组6.25%(1/16)发病,对照组100%(8/8)发病。说明PEDV-JX12株能够适应细胞培养,免疫接种母猪能给仔猪提供有效保护,可以用于PEDV流行毒株的疫苗研发。 相似文献
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为了建立检测猪细小病毒(PPV)野毒抗体的间接ELISA检测方法,并掌握南充市猪细小病毒的感染情况,试验以原核表达的NS1蛋白为包被抗原建立检测PPV野毒抗体的间接ELISA方法,并应用该方法对2017年采集于南充市9个区(县)的1 854份猪血清样品进行检测与分析。结果表明:建立的NS1蛋白间接ELISA方法检测猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)阳性血清和PPV疫苗免疫血清均为阴性,与HI试验的符合率达98.44%。在1 854份血清样品中共检测出PPV阳性样品349份,总阳性感染率达18.82%。其中南充市9个区县均存在PPV的感染,感染率为5.45%～36.79%;规模猪场、散养户和屠宰场的感染率分别为15.04%、26.39%和17.30%;种公猪、种母猪、后备母猪、仔猪和育肥猪的感染率分别为5.88%、24.75%、23.91%、17.38%和19.13%;自繁自养、自繁+引种、自繁+购活体、购活体4种不同繁育方式的感染率分别为13.58%、21.50%、19.77%和21.12%。说明试验成功建立了检测猪细小病毒野毒抗体的间接ELISA检测方法,且南充市养猪场普遍存在猪细小病毒的感染。 相似文献
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猪伪狂犬病-猪细小病毒病二联苗的安全性与免疫力试验 总被引：1，自引：0，他引：1
PRV-gE--PPV弱毒疫苗接种后备母猪和怀孕母猪,临床上未见不良反应,并且怀孕母猪在预产期内顺利产下健康仔猪,表明PRV-gE--PPV弱毒疫苗具有良好的安全性.PRV-gE--PPV弱毒疫苗免疫后备母猪,2周后,PPV抗体100%(8/8)转为阳性,PRV抗体85.7%(7/8)转为阳性,能产生良好的抗体反应.在免疫接种后2个月、4.5个月进行强毒攻击,免疫猪未见不良反应,对照猪未见或出现轻微的不良反应.从免疫猪的鼻、肛分泌物和血浆中未分离到PPV,而从对照猪的鼻、肛分泌物和血浆中分离到PPV和PRV.表明PRV-gE--PPV弱毒疫苗能抵抗PPV、PRV的攻击,具有良好的免疫保护力. 相似文献
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由猪细小病毒(PPV)引起的猪繁殖障碍病是以胚胎期感染、死胎和胎儿的本乃伊而母猪又缺乏症候为其特征。最近的研究表明,灭活疫苗对于预防本病无效,而弱毒疫苗较灭活苗能产生更为持久的免疫性。作者将10头小母猪分成二组,每组五头,一组用MLV疫苗,该疫苗的毒株(NADL—2)是从猪白细胞与猪胎细胞联合培养分离所得,然后猪胎肾细胞传30代以上,又在猪睾丸传代细胞连续传至54代,用免疫荧光技术检查其感染滴度。当半数病毒培养感染 相似文献