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1.
在鸭疫里默氏杆菌外膜蛋白保守区设计了一对特异性引物,建立PCR方法,对5株已知血清型的鸭疫里默氏杆菌纯培养菌和6株临床分离未定型的里默氏杆菌菌株以及病死鸭病料组织进行检测,结果表明不同样品都可扩增出592bp的特异目的条带,而对鸭源大肠杆菌、鸭源多杀性巴氏杆菌、鸭源沙门氏菌的扩增结果均为阴性,说明该PCR法具有较好的特异性,可用于快速鉴定鸭疫里默氏杆菌,也适用于病料的直接检测. 相似文献
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广东地区鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及双重PCR检测方法的建立 总被引：2，自引：0，他引：2
对来自广东地区疑似鸭疫里默氏杆菌病的病鸭组织进行了病原菌的分离培养和生化鉴定,确定得到20株鸭疫里默氏杆菌,动物回归试验结果表明,分离的鸭疫里默氏杆菌具有很强的致病性.对这20株鸭疫里默氏杆菌进行的药敏试验表明,分离株已广泛产生耐药性.参照已经发表的2对引物以细菌全菌体为模板建立双重PCR方法,结果均能扩增出2条目的片段,经测序证实为鸭疫里默氏杆菌,而对鸭源大肠杆菌、鸭源禽多杀性巴氏杆菌、鸭源沙门菌和鸭源葡萄球菌的扩增结果均为阴性.说明建立的双重PCR方法能快速、准确的检测出鸭疫里默氏杆菌,并具有高度特异性,可用于鸭疫里默氏杆菌的快速鉴定和快速诊断. 相似文献
3.
《养禽与禽病防治》2017,(3)
根据GenBank中登录的鸭疫里默氏杆菌ompA基因序列,设计合成了2对引物,外引物的扩增基因片段大小为470bp,内引物的扩增基因片段大小为249bp,建立了适合RA快速检测的套式PCR方法。采用该方法对鸭疫里默氏杆菌进行了检测,能扩增到249bp的条带,而鸭源大肠杆菌、鸭源沙门菌、鸭源巴氏杆菌、鸭源金黄色葡萄球菌的扩增结果均为阴性。该方法第1次扩增的敏感性是10pg,第2次扩增的敏感性是100fg,第2次比第1次扩增的敏感性高100倍。该检测方法表明,所建立的套式PCR方法比常规PCR方法敏感性高,具有重复性好、特异性强和敏感性高等优点,可用于鸭疫里默氏杆菌的临床诊断、病料检测和分子流行病学调查等。 相似文献
4.
为建立一种更加准确、敏感的鸭疫里默氏杆菌检测方法,根据鸭疫里默氏杆菌16S rRNA基因序列设计2对巢式PCR引物,在完成最佳反应条件筛选、特异性、敏感性、重复性试验的基础上,建立巢式PCR检测方法.结果表明,建立的巢式PCR对1、2、10、X型鸭疫里默氏杆菌的16S rRNA都能扩增出特异性片段,而对大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌、沙门菌、鸭源金黄色葡萄球菌的基因组不能扩增出特异性片段,DNA最小检测量为0.392 fg/μL,是常规PCR的1 000倍.该巢式PCR方法具有快速、敏感、特异、通用的优点,可用于鸭疫里默氏杆菌感染的检测、分子流行病学调查和分离菌株的快速鉴定. 相似文献
5.
鸭疫里默氏菌病和大肠杆菌病多重PCR诊断方法的建立 总被引：3，自引：0，他引：3
参考GenBank中鸭疫里默氏菌和大肠杆菌的外膜蛋白A(OmpA)基因序列,应用PrimerPremier5.0软件在二者高度保守区设计了2对引物,建立了适合鸭疫里默氏菌和大肠杆菌的快速检测的多重PCR检测方法。以该方法对已分离并保存的鸭疫里默氏菌和大肠杆菌进行PCR扩增,分别扩增出与试验设计相符的670、408bp的特异性DNA片段。将扩增所得的DNA片段进行克隆测序,测序结果表明分别为鸭疫里默氏菌和大肠杆菌OmpA基因序列。该方法对鸭疫里默氏菌和大肠杆菌的检测下限分别为4×104CFU/mL和3×104CFU/mL。表明所建立的PCR方法具有特异、快速和敏感的特点,可用于诊断鸭疫里默氏菌、大肠杆菌以及两者的混合感染。 相似文献
6.
7.
鸭疫里默氏杆菌病又名鸭传染性浆膜炎,是由鸭疫里默氏杆菌引起的一种鸭的急性、慢性、接触性、败血性传染病。禽大肠杆菌病是由致病性大肠埃希氏杆菌引起的一种禽的急性、出血性、渗出性、败血性传染病。两病均能使不同日龄和性别的番鸭感染发病,尤以2~5周龄的番鸭易感。福建省南平市延平区番鸭养殖较为集中,番鸭鸭疫里默氏杆菌病和大肠杆菌病混合感染的病例较为多发,现将一例雏番鸭混合感染的诊治 相似文献
8.
鸭疫里默氏杆菌病又名鸭传染性浆膜炎，是由鸭疫里默氏杆菌引起的一种鸭的急性、慢性、接触性、败血性传染病。禽大肠杆菌病是由致病性大肠埃希氏杆菌引起的一种禽的急性、出血性、渗出性、败血性传染病。两病均能使不同日龄和性别的番鸭感染发病，尤以2-5周龄的番鸭易感，福建省莆田市荔城区番鸭饲养量较大，已成为畜牧业的一大支柱产业，故番鸭鸭疫里默氏杆菌病和大肠杆菌病混合感染的病例颇为多见。现将2004年该区黄石镇混合感染的诊洽方案简述如下，供业内人士参考。 相似文献
9.
《中国预防兽医学报》2017,(8)
为建立同时检测鸭疫里默氏菌和大肠杆菌的环介导间接PCR方法,本研究根据鸭疫里默氏菌外膜蛋白A基因和大肠杆菌的gapA基因的保守序列设计两对特异性探针,分别标记于猪线粒体基因片段的两端形成两种不同的捕获探针,将捕获探针与待检测菌的基因组杂交、补平缺口、环化后,采用1对引物反向扩增捕获探针,建立检测鸭疫里默氏菌和大肠杆菌的环介导间接PCR方法,扩增片段分别为540 bp和328 bp,本研究建立的方法对金黄色葡萄球菌、禽多杀性巴氏杆菌、沙门氏菌的检测结果为阴性;能够检测出10 pg的鸭疫里默氏菌和大肠杆菌的基因组DNA,与常规PCR的符合率为100%。本研究建立的环介导间接PCR方法是一种特异性好、灵敏度高的快速病原学诊断方法,为同时检测鸭疫里默氏菌和大肠杆菌提供了一种可行的方法。 相似文献
10.
根据鸭疫里默氏杆菌（RA）16SrDNA基因序列设计引物,对1株RA阳性株、9株临床分离鉴定的RA、3株大肠杆菌、1株多杀性巴氏杆菌和1株沙门氏菌进行PCR扩增,结果所有RA均出现643bp特异性扩增条带,其余非RA则均未扩增出特异性条带,表明该对引物及建立的PCR具有很强的特异性。优化的PCR反应体系能检出RA的最低DNA量为20pg。菌落直接PCR是增强RA快速检测鉴定的手段。应用PCR对病料组织直接进行RA检测,脑组织为首选检测对象,具有良好的实际应用意义。 相似文献
11.
为建立一种能同时检测大肠杆菌、鸭疫里默氏杆菌、多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌的多重PCR方法,试验根据大肠杆菌phoA基因、鸭疫里默氏杆菌ompA基因、多杀性巴氏杆菌kmt 1基因、金黄色葡萄球菌FemB基因的保守区域设计4对特异性引物,通过优化退火温度和引物浓度建立多重PCR方法,检验该方法的特异性、敏感性性、重复性,应用该方法检测145份病死水禽临床样品,并与传统细菌分离鉴定方法进行比较。结果表明：优化后的最佳退火温度为52℃,引物浓度为10μmol/L。建立的多重PCR方法能特异性地扩增出靶基因,沙门氏菌、链球菌、产气荚膜梭菌等临床常见菌均未扩增出条带,对大肠杆菌、鸭疫里默氏杆菌、多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌4种细菌的检出下限是0.4 pg/mL,单一PCR扩增ompA、kmt 1、phoA和FemB基因的检出下限分别为4×10-3,0.4,4×10-3,4×10-6 pg/mL。多重PCR方法对临床样品的检测结果与传统细菌分离鉴定方法的符合率均在90%以上。说明试验建立的多重PCR方法具有结果稳定、重复性高的特... 相似文献
12.
《中国预防兽医学报》2017,(1)
为了快速、准确地鉴定鸭疫里默氏杆菌(RA),本实验根据RACH3株16SrRNA和dnaB基因序列设计引物,经引物筛选和PCR反应条件优化后,建立了检测RA的双重PCR方法。结果表明该方法对检测的所有不同血清型RA菌株均能扩增出364bp和627bp两条特异的目的片段,而对鸭致病性大肠杆菌、鸭源禽巴氏杆菌、肠炎沙门氏菌、黄杆菌等对照菌株的扩增结果均为阴性;该PCR方法对细菌HXb2基因组DNA和菌液的检测敏感性分别为17.33ng/mLDNA和2.9×10~3cfu/mL细菌。利用建立的双重PCR检测了RA感染鸭的肝脏和脑组织中的RA,结果显示该方法与细菌分离法符合率分别为100%(9/9)和77.8%(7/9),表明本实验建立的双重PCR方法可用于检测肝脏组织中RA。本研究建立的双重PCR方法既可以对分离的RA疑似菌株进行快速检测和鉴定,也可以直接用于临床样品中RA的检测。 相似文献
13.
鸭腺病毒A型TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立 总被引：1，自引：1，他引：0
试验旨在建立鸭腺病毒A型（duck adenovirus A,DAdV-A）TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。根据DAdV-A Hexon基因序列设计特异性引物和探针,建立了基于TaqMan探针检测DAdV-A的实时荧光定量PCR检测方法,对其特异性、灵敏性、重复性进行检测,用建立的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法和常规PCR方法同时对福建地区临床收集的85份番鸭源病料进行DAdV-A感染的检测,比较其符合率。结果表明,试验成功建立了检测DAdV-A的实时荧光定量PCR检测方法,其扩增相关系数为0.996,扩增效率为99.9%;特异性强,对鸭常见病原（如鸭瘟病毒、鹅细小病毒、番鸭细小病毒、鸭圆环病毒、鸭源大肠杆菌、鸭疫里默氏杆菌和鸭源禽多杀性巴氏杆菌）检测均为阴性;灵敏度高,最低检测限为8.37拷贝/μL;重复性好,组内变异系数和组间变异系数分别为0.54%~1.28%和0.61%~2.39%。对临床送检的85份病料,TaqMan实时荧光定量PCR方法的阳性率为7.06%（6/85）,PCR方法的阳性率为5.88%（5/85）,且PCR检测的阳性样品经TaqMan实时荧光定量PCR方法检测均为阳性,符合率为100%。本研究建立了基于TaqMan探针检测DAdV-A的实时荧光定量PCR检测方法,为鸭群中开展DAdV-A的分子流行病学研究提供了有效技术手段。 相似文献
14.
试验旨在建立鸭腺病毒A型(duck adenovirus A,DAdV-A)TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。根据DAdV-A Hexon基因序列设计特异性引物和探针,建立了基于TaqMan探针检测DAdV-A的实时荧光定量PCR检测方法,对其特异性、灵敏性、重复性进行检测,用建立的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法和常规PCR方法同时对福建地区临床收集的85份番鸭源病料进行DAdV-A感染的检测,比较其符合率。结果表明,试验成功建立了检测DAdV-A的实时荧光定量PCR检测方法,其扩增相关系数为0.996,扩增效率为99.9%;特异性强,对鸭常见病原(如鸭瘟病毒、鹅细小病毒、番鸭细小病毒、鸭圆环病毒、鸭源大肠杆菌、鸭疫里默氏杆菌和鸭源禽多杀性巴氏杆菌)检测均为阴性;灵敏度高,最低检测限为8.37拷贝/μL;重复性好,组内变异系数和组间变异系数分别为0.54%~1.28%和0.61%~2.39%。对临床送检的85份病料,TaqMan实时荧光定量PCR方法的阳性率为7.06%(6/85),PCR方法的阳性率为5.88%(5/85),且PCR检测的阳性样品经TaqMan实时荧光定量PCR方法检测均为阳性,符合率为100%。本研究建立了基于TaqMan探针检测DAdV-A的实时荧光定量PCR检测方法,为鸭群中开展DAdV-A的分子流行病学研究提供了有效技术手段。 相似文献
15.
《中国家禽》2019,(12)
为建立一种能同时鉴别鸭瘟病毒(DPV)和番鸭细小病毒(MDPV)的双重PCR方法,根据DPV UL6基因和MDPV NS-VP1基因分别设计并合成两对特异性引物,通过对双重PCR反应的引物浓度和退火温度优化,建立了能快速检测DPV和MDPV的双重PCR方法,并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行验证。结果表明:设计的两对特异性引物均能扩增出目的条带,其大小分别约为376 bp和624 bp;优化引物浓度组合为:DPV引物1.0μmol/L,MDPV引物2.5μmol/L,最佳退火温度为52.4℃。DPV和MDPV的核酸最低检出量分别为4 pg和173 pg,建立的双重PCR分别对鹅细小病毒、禽流感病毒、新城疫病毒、鸭疫里默氏杆菌、沙门菌、大肠杆菌、葡萄球菌、鸭源巴氏杆菌核酸扩增结果均呈阴性;对实验室保存的9份临床病料检测结果DPV检出率33.3%(3/9),MDPV检出率55.6%(5/9)。综上所述,建立的双重PCR方法特异性强、敏感性和稳定性较好,为DPV和MDPV的临床病料检测提供了技术支撑。 相似文献
16.
应用PCR技术检测鸭疫里默氏杆菌的研究 总被引：25，自引：1，他引：24
根据已发表的鸭疫里默氏杆菌15型CVL110／89株编码42－kDa主要外膜蛋白的基因序列设计并合成一对引物，建立PCR方法，对7个血清型的鸭疫里默氏杆菌纯培养菌及野外病死鸭病科组织进行检测。结果表明，7个血清型的鸭疫里默氏杆菌纯培养菌DNA都可扩增出809bp的DNA片段，而对照的2株大肠杆菌和1株沙门氏菌纯培养物DNA扩增结果为阴性；在对24只不同鸭场病死鸭肝、脑的检测中，脑的检出率为19／24（高于细菌分离的13／24），肝脏的检出率为11／24（高于细菌分离的8／24）。由此可见，建立的PCR技术可用于鸭疫里默氏杆菌的鉴定和快速诊断（取脑组织）。但此方法是否对其他血清型的鸭疫里默氏杆菌也适用，有待于收集这些血清型的菌株进行验证。 相似文献
17.
18.
《中国畜牧兽医文摘》2015,(8)
参考文献合成两条鸭疫里默氏杆菌特异性引物,建立PCR方法。使用模板进行基因扩增,得到592bp的目的条带。以该方法对高邮、仪征等地的疑似病例进行检测,得到20株鸭疫里默氏杆菌。挑选鉴定后的纯菌落接种含血清TSB液体培养基,增菌后进行药敏试验。结果显示,所有被检鸭疫里默氏杆菌菌株对哌拉西林、头孢呋辛、头孢噻肟、头孢他啶、头孢西丁的敏感率均达到了100%;对头孢唑啉、头孢哌酮、头孢吡肟的敏感率达到了95%。 相似文献
19.
鸭传染性浆膜炎又称鸭疫里默氏杆菌病,是由鸭疫里默氏杆菌引起的一种以危害雏鸭为主的急性或慢性传染病,与致病性大肠杆菌混合感染后,常造成雏鸭短期内大批发病和死亡,生长发育严重受阻,给养鸭户带来较大的经济损失。2010年6月初,曲靖市麒麟区珠街乡一野鸭饲养场发生了鸭传染性浆膜炎与大肠杆菌病的混合感染病情,现将诊治情况报告如下: 相似文献
20.
鸭疫里默氏菌病和大肠杆菌病鉴别诊断双重PCR方法的建立和应用 总被引：4，自引：1，他引：3
本研究从鸭疫里默氏菌提取基因组DNA,采用细菌16S rRNA基因的通用引物,用PCR方法成功扩增出鸭疫里默氏菌的部分16S rRNA基因,克隆及测序结果表明其全长1512bp,G＋C含量为51％,该序列已登人GenBank,登录号为DQ078779。同时利用生物软件对GenBank收录的鸭疫里默氏菌和大肠杆菌的16S rRNA基因序列进行分析后,设计了鸭疫里默氏菌和大肠杆菌的种特异性引物,分别能从各自的16S rRNA基因中扩增出长度为342和718bp的DNA片段。并据此建立了一种能快速准确鉴别诊断鸭疫里默氏菌和大肠杆菌病的双重PCR方法,该方法能从肝脏组织悬液煮沸后的上清、细菌培养物或提取的细菌基因组DNA中快速扩增出相应的片段,进行鉴别诊断。 相似文献