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为了确定引起2018年5月江苏泰州某规模化养猪场育肥猪发病死亡的病原,本试验无菌采取病死猪肺脏组织,通过病原分离培养、染色观察、生化试验、PCR扩增等方法进行鉴定,随后对分离菌株进行致病性和耐药性试验。结果显示,该分离菌株在病原分离培养过程中,需在含有NAD的培养基中才能生长;该分离菌通过革兰氏染色,显微镜观察细菌呈红色,可判定新分离的菌株为革兰氏阴性菌;根据生化试验和PCR结果可判定该分离菌株为猪传染性胸膜肺炎放线杆菌;PCR血清型分型结果显示,分离菌株为猪胸膜肺炎放线杆菌血清8型菌株;小鼠毒力试验结果显示,当分离株菌液浓度达到3×108 CFU/mL时便可引起BALB/c小鼠死亡,浓度为2×109 CFU/mL时对BALB/c小鼠的致死率达到100%,表明该分离菌株对BALB/c小鼠有较强的致病力及致死性;药敏试验结果表明,该分离菌株对头孢噻吩、头孢噻肟、氨曲南、头孢吡肟、头孢曲松、氧氟沙星等14种抗菌药物高度敏感,对氨苄西林中度敏感,对链霉素耐药。综合以上试验结果表明该猪场存在猪胸膜肺炎放线杆菌血清8型菌株感染情况。 相似文献
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猪流行性腹泻与猪传染性胃肠炎二联油乳剂灭活疫苗的田间免疫试验 总被引:2,自引:0,他引:2
猪流行性腹泻(PED)和猪传染性胃肠炎(TGE)是猪常见的两种急性、烈性、病毒性腹泻.PED和TGE在我国流行十分广泛,冬春季节年复一年地在猪群中发生,给养猪业造成重大的经济损失.由于猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)在病原学、流行病学、临床症状及病理变化等方面都十分相似,只有依靠实验室诊断技术才能区别.而在流行季节,猪群中PED和TGE可以单独发生,亦可混合感染,混合感染率可达30%.因而在腹泻症流行的地区需同时免疫接种PED和TGE疫苗才能有效控制病毒性腹泻的发生与流行.为此我们进行了PED和TGE二联油乳剂灭活疫苗的研究,并进行了免疫试验,现将疫苗的田间试验结果报告如下. 相似文献
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出血性大肠杆菌O157: H7 Stx2B-Tir-Stx1B多价融合蛋白表达及免疫原性研究 总被引:1,自引:0,他引:1
为了更好防治由出血性大肠杆菌O157∶ H7引起的疾病,尝试研制基因工程疫苗,其中亚单位疫苗时具有很大优势.构建表达tir和stx1b的融合基因,将tir基因中间295个氨基酸残基(Tir295)与stx1b亚基基因72个氨基酸串联构建pGEX-stx2b-tir-stx1b重组质粒,将其转化于BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达,经SDS-PAGE电泳检测,该融合蛋白获得了高效表达,目的蛋白表达量占菌体总蛋白含量的30%左右.重组蛋白纯化后皮下途径免疫小鼠,能够诱导高滴度(105)的IgG,鼻腔内途径免疫小鼠不仅能够诱导高滴度(104)的IgG,还能诱导高达102的IgA.二免后攻击50LD50的EHEC O157∶ H7,相对于对照组,免疫组粪便中排菌量明显降低、排菌时间明显缩短.结果表明:该融合蛋白免疫原性良好,并且由Tir、Stx2b和Stx1b三部分抗原组成,可刺激机体产生针对转位紧密素受体(Tir)和志贺毒素(Stx)的抗体,在EHEC O157亚单位疫苗设计或单克隆抗体抗制备中具有重要价值. 相似文献
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类猪圆环病毒因子P1在自然感染仔猪体内的组织分布 总被引:1,自引:0,他引:1
选用3头自然感染仔猪和1头阴性对照猪,剖杀后采集心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胰脏、脑、空肠、扁桃体、胸腺、淋巴结、膀胱、性腺等组织,用荧光定量PCR方法检测病毒在组织中的分布及病毒载量.结果显示,类猪圆环病毒因子P1分布在仔猪的心脏、肝脏、肺脏、胰脏、脑和膀胱等组织,病毒载量以胰脏、脑和膀胱为最高,可达105拷贝/g以上;对照猪脏器中没有检测到病毒核酸.该研究为P1的诊断及致病机制奠定了基础. 相似文献
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从江苏省某屠宰场猪的扁桃体中分离到1株细菌,通过培养特性、菌体形态、菌落形态、染色特性、生化试验以及荚膜多糖(cps)基因的PCR检测,确定为猪链球菌2型,命名为HA0609。本试验针对猪链球菌7种主要毒力因子——谷氨酸脱氢酶(gdh)、溶菌酶释放蛋白(mrp)、胞外因子(epf)、溶血素(sly)、纤连蛋白/血纤蛋白原结合蛋白(fpbs)、次黄嘌呤核苷酸脱氢酶(impdh)及毒力相关序列orf2,进行PCR检测。与已知强毒株比较,该菌株2种主要毒力因子sly和epf均为阴性。动物试验显示HA0609对猪、兔和Balb/c鼠均无致病性。 相似文献
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为了建立猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白(MRP)抗体间接ELISA检测方法,该研究首先克隆了MRP编码基因的部分片段,构建了重组表达质粒pET28a-mrp,并将该质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,获得了58 000的重组蛋白,经Ni柱纯化后,免疫印迹显示MRP重组蛋白能够被猪链球菌2型抗体特异性识别。以纯化的MRP重组蛋白作为包被抗原,建立了猪链球菌2型MRP抗体检测间接ELISA方法。该ELISA方法的包被抗原浓度为10μg/ml,待检血清1∶50稀释,检测临床48份未免疫猪链球菌2型疫苗健康猪的血清。当效价(S/P)≥0.22时,判定待检血清样品为阳性;当S/P<0.22时,判定待检血清样品为阴性。运用建立的方法能特异性识别猪链球菌2型抗体,人工感染猪的MRP抗体于攻毒后14~28 d出现峰值,同时提示临床健康猪群的免疫功能存在个体差异。 相似文献
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检测CSFV、JEV、PRRSV三种RNA病毒多重RT-PCR方法的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
猪瘟病毒(CSFV)、流行性乙型脑炎病毒(JEV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是引起严重的种猪繁殖障碍的病原,而且经常混合感染,及时准确诊断是防治的前提。根据GenBank发表序列选取3对引物建立检测CSFV、JEV和PRRSV病毒的多重RT-PCR方法,扩增产物分别为508 bp、380 bp、263 bp。经与IDEXX商品化的检测CSW抗原试剂盒比较,二者的符合率为96.7%;扩增JEV和PRRSV PCR产物分别经EcoR V和Sau3A I酶切得到预期的片段。建立的多重RT-PCR检测JEV、PRRSV和CSFV敏感度分别为12.5个TCID_(50)、10个TCID_(50)和10~(-3)ng总RNA。结果表明该多重RT-PCR方法具有很好的特异性和敏感性,可用于临床三种病毒核酸的检测。 相似文献
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RT—PCR检测猪传染性胃肠炎病毒 总被引:17,自引:0,他引:17
根据猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)纤突蛋白S基因的5′端核酸序列设计了1对引物。该对引物扩增的目的片段长度为886bp。在优化RT-PCR反应条件的基础上,建立了检测TGEV的RT-PCR方法。用此RT-PCR方法检测56份猪腹泻粪样,同时用夹心ELISA法作对照。结果显示,RT-PCR法检测的20份阳类粪样,用夹心ELISA法检测有14份呈阳性,两者的符合率为89%。RT-PCR法比夹心ELISA法敏感性更高,可用于TGEV的诊断和流行病学调查。 相似文献
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检测猪链球菌2型的溶菌酶释放蛋白(MRP)的PCR方法的建立 总被引:15,自引:1,他引:14
根据猪链球菌2型的mrp基因自设计和合成了一对可扩增长度为885bp目的片段的引物,成功地建立了检测溶菌酶释放蛋白(MPR)的PCR方法,用XbaⅠ内切酶进行酶切,获得了与预期一致的578bp和307bp2的2个片段,并进行了PCR的特异性试验和敏感性试验。对马链球菌兽疫亚种、猪丹毒杆菌、猪肺疫巴氏杆菌和猪肺炎支原体的PCR检测结果均呈阴性;检测的敏感度可达100个细菌。另外,对9株从病猪体内分离的猪链球菌2型菌株进行检测了8个呈阳性;对15份正常屠宰猪扁桃体分离物的检测结果是1份为阳性。结果表明此法特异性敏感性均很高,可作为MRP快速诊和流行病学调查的手段。 相似文献