水牛髓样分化因子88融合蛋白真核表达载体的构建及其在HEK293细胞中的表达   总被引：1，自引：1，他引：0  

匡文华  张晓茹  成鹰  杜丽  雷明  焦寒伟  张冬琳  郝永昌  祁超  王凤阳 《中国畜牧兽医》2012,39(4):50-54

将水牛髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)cDNA全长定向克隆至pEGFP-C1真核表达载体,通过酶切和测序鉴定正确后,经脂质体介导将重组质粒转染至HEK293细胞,应用荧光显微镜、流氏细胞术和Western blotting检测MyD88蛋白的表达。结果表明,酶切及测序结果证实重组质粒含有MyD88全长CDS序列,融合蛋白读码正确;荧光显微镜、流式细胞术和Western blotting检测证实,水牛EGFP-MyD88融合蛋白真核表达载体能够在HEK293细胞表达。本研究成功构建了pEGFP-C1-MyD88真核表达载体,并使其在HEK293细胞中获得表达,为进一步研究该基因的生物学功能奠定基础。  相似文献   

番鸭呼肠孤病毒病蜂胶佐剂灭活疫苗的研制   总被引：3，自引：0，他引：3  

刘思伽  王凤阳  成子强  黄爱芳  李胜  邹永新  余双祥  罗映霞  李剑荣  沙才华 《中国预防兽医学报》2006,28(2):225-227

番鸭呼肠孤病毒病是由番鸭呼肠孤病毒感染引起的一种番鸭病毒性传染病。自在我国发生以来，给番鸭养殖业造成了严重损失。为防制本病，我们用分离毒NH9908株作为种毒，研制成一种蜂胶佐剂灭活疫苗。试验表明该疫苗抗原性良好、使用安全和免疫保护效果确实。实验室试验结果表明，用本疫苗免疫7d、14d、49d后攻毒保护指数分别为77．8、100、100。中试试验结果表明，保护率达95％。  相似文献   

五指山小型猪PDCD10 cDNA的克隆及生物信息学分析     

杜丽  荣辉  张珈宁  侯冠彧  周汉林  郭莳雨  贾晓哓  史巧芸  王凤阳 《黑龙江畜牧兽医》2013,(7):40-42,174,175

为了克隆五指山小型猪程序性死亡因子10(PDCD10)cDNA基因并进行生物信息学分析,试验以构建的五指山小型猪外周血白细胞cDNA文库为材料,采用菌落PCR的方法,克隆得到PDCD10全长cDNA序列,运用生物信息学软件分析其核苷酸序列并预测其编码蛋白的理化性质及二级结构等。结果表明:经比对分析发现,五指山小型猪PDCD10基因的核苷酸序列及其氨基酸序列与人、小鼠、牛、鸡、非洲爪蟾、斑马鱼、黑腹果蝇等具有较高的相似性。生物信息学分析结果表明,该cDNA序列全长1 250 bp,在序列3’末端有终止信号AATAAA。含636 bp(184～819 nt)的开放阅读框,编码212个氨基酸。该蛋白理论等电点(PI)及分子质量分别为7.80和24 701.57 u。  相似文献   

重组逆转录病毒载体系统的建立及其感染滴度的研究     

王凤阳  赵宝全等 《延边大学农学学报》2000,22(4):283-286

选择新霉素磷酸转移酶II（Neo^R)做为标记基因,将重组逆转录病毒载体经包装细胞馐后得到的重组病毒浓缩后,应用该重组逆转录病毒载体系统体外感染靶细胞NIH3T3以测定其滴度,其滴度可达到10^6,具有理想的感染靶细胞的能力。  相似文献   

海南黄牛IGF2R基因单核苷酸多态性及其生物信息学分析          下载免费PDF全文

杨伟杰  满初日嘎  吴慧  张振兴  何美荣  蒋俊明  陈巧玲  高宏岩  王凤阳  陈思 《南方农业学报》2022,53(12):3520-3528

【目的】明确海南黄牛胰岛素样生长因子2受体基因（IGF2R）遗传多态性及其在海南黄牛群体中的遗传分布情况，为进一步揭示IGF2R基因对海南黄牛生长性状的调控机理提供理论依据，也为分子标记辅助选择提供新的候选位点。【方法】构建海南黄牛DNA混池，通过PCR扩增和测序技术对海南黄牛IGF2R基因编码区（CDS）进行基因多态性分析，并以Chromas序列比对筛选出错义突变SNP位点；应用PCR-RFLP对202头海南黄牛个体进行基因型鉴定，同时对筛选到的SNP位点进行连锁不平衡及单倍型分析，评估海南黄牛群体中各单倍型的分布情况；通过生物信息学方法分析各单倍型和SNP位点对海南黄牛IGF2R基因CDS区mRNA二级结构、蛋白理化性质及蛋白二级结构的影响。【结果】在海南黄牛IGF2R基因CDS区共检测到4个错义突变SNPs位点，分别为SNP1（g.63977A>G）、SNP2（g.63999T>C）、SNP3（g.69772G>A）和SNP4（g.94987A>C），其中SNP1、SNP2和SNP3位点间呈强连锁不平衡状态。4个SNPs位点在海南黄牛群体中均表现为中度多态性，且处于Hardy-Weinberg平衡状态（P>0.05）。海南黄牛群体中存在4种单倍型（F>0.01），分别是H1（ATG）、H2（GCA）、H3（ACA）和H4（GCG）；各单倍型及SNP4突变型对海南黄牛IGF2R基因CDS区mRNA二级结构及其最小自由能均有影响。海南黄牛IGF2R蛋白为亲水蛋白，存在跨膜结构和信号肽，其二级结构主要由无规则卷曲和延伸链构成，α-螺旋和β-转角的占比较小。【结论】在海南黄牛IGF2R基因CDS区共检测到4个错义突变SNPs位点，在海南黄牛群体中均表现为中度多态性，且处于Hardy-Weinberg平衡状态。海南黄牛IGF2R基因SNP位点突变对其mRNA二级结构及稳定性均会造成影响，致使IGF2R蛋白二级结构肽链构象发生改变，进而对海南黄牛生长性状的调控造成影响。  相似文献