猪肺炎支原体PCR诊断方法的建立   总被引：2，自引：0，他引：2  

于敏  杨建德  王文军  刘杰  李景鹏  相文华  许景军 《中国预防兽医学报》2003,25(5):384-386

建立了一个PCR检测猪肺炎支原体(Mhp)的方法。根据国外发表Mhp 16sr RNA基因设计了一对特异性引物，扩增出一个大小为653bp的特异性片段。将PCR产物克隆并测序表明，与GenBank的Mhp的序列的同源性为89．2％。而对于常见的猪呼吸道疾病有关的病原胸膜肺炎放线杆菌、支气管败血波氏杆菌、多杀性巴氏杆菌以及牛支原体、羊支原体不能扩增出特异性片段；PCR的敏感性实验显示这对引物能够检测到1ng的DNA，结果表明此方法特异、敏感。  相似文献   

人类后基因组计划--蛋白质组学的研究进展     

许景军  潘蔚绮  相文华 《畜牧兽医科技信息》2004,(6):14-16

生物医学领域最宏伟的工程——人类基因组计划(Human genomic proiect，HGP)的本质是对人类所有基因组进行作图和序列测定，旨在破译人类所有的遗传信息。目前，HGP已近尾声，这一工程的实施和完成，凝聚了世界各国生物医学领域众多实验室和科学家的心血，尽管成就巨大，但是用核酸语言不足以解释整个生命活动过程。人们在获取了基因  相似文献   

慢病毒免疫预防的展望     

相文华  任广森 《黑龙江畜牧兽医》1997,(10):45-46

慢病毒免疫预防的展望相文华（哈尔滨兽医研究所，１５０００１）任广森（太平区兽医站）章兴华（省化血研生物技术公司）杨晓丽〔省生物制品一厂）慢病毒最早是兽医病理学家Ｓｉｇｕｒｄｓｓｏｎ于１９５４年在研究绵羊的两种疾病时提出的。一种是绵羊的痒病，是大脑的一...  相似文献   

猪戊型肝炎诊断方法的研究进展     

曲娟娟  于婧  王滨  于敏  赵立平  相文华  李柱刚 《中国预防兽医学报》2007,29(12):981-984

戊型肝炎(Hepatitis E,HE)是由戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)感染引起的一种急性、自限性疾病,病毒经粪-口途径传播,其暴发和流行主要分布在发展中国家,常因饮用水被污染而引起,散发病例呈全球分布。1997年,发现了动物源性的戊型肝炎病毒,随后,各发达国家及印度等国陆续都有猪HEV的相关报道,  相似文献   

Tat蛋白对马传染性贫血病毒长末端重复序列启动子活性的影响     

刘益民左咏梅  周艳君王晓钧童光志  相文华沈荣显 《中国兽医科技》2007,37(4):301-304

将来源于马传染性贫血病毒（EIAV）强毒株第25代和第118代病毒的LTR，白细胞弱毒（EIAV-DLA）的LTR，以及TAR起始碱基和／或poly（A）附加位点发生突变的驴胎皮肤细胞弱毒（EIAV—FDD）的LTR分别克隆到pCAT3-Basic质粒中，获得了6个重组质粒pCAT-25、pCAT-118、pCAT—FD、pCAT—G219A、pCAT—A294C和pCAT—G219A—A294C。同时用pcDNA3．1（＋）构建了EIAV反式激活蛋白（Tat）基因的重组真核表达质粒pcTM7-D。将pcTM7-D分别与含有不同LTR的重组质粒共转染驴胎皮肤细胞，考察Tat对LTR启动子活性的增强作用。结果表明，在皮肤细胞中Tat蛋白可以特异性增强来源于皮肤细胞弱毒疫苗株LTR的启动子活性，而对白细胞源的LTR无明显增强作用；TAR起始位点和poly（A）的单碱基突变和联合突变对Tat的反式激活作用并无明显影响。  相似文献   

山羊关节炎--脑炎的再认识     

杨建德  相文华  刘杰  王治才 《畜牧兽医科技信息》2003,19(11):12-14

山羊关节炎—脑炎(Caprine arthritis-en-cephalitis virus CAE)是由反转录病毒科慢病毒属的(CAEV)引起的一种传染病。临诊特征是成年羊为慢性发展的多发性关节炎,间或伴间质性肺炎或间质性乳房炎。羔羊常呈现脑脊髓炎症状。该病未确认前,瑞士Stunzi等(1964年)和日本Nakagawa等(1971年)称其为山羊慢性淋巴细胞性多发性关节炎(chronic lymphocytic polyarthritis),德国Stavrou等(1969年)称其为山羊肉芽肿性脑脊髓炎  相似文献   

中国马传染性贫血病毒驴强毒株感染性分子克隆的构建     

王晓钧  魏丽丽  相文华  张晓燕  吕晓玲  赵立平  朱远茂  邵一鸣  沈荣显 《中国农业科学》2005,38(9):1898-1904

 马传染性贫血病毒（equine infectious anemia virus, EIAV）驴强毒株DV是一株经过驴体传代获得的而具有超强毒力的毒株，对马和驴均可100％致死。用PCR方法分段扩增了DV其前病毒基因，将包含全基因片段的3个基因克隆以限制性内切酶消化后顺次连接克隆到pLG338上，命名为pD70344。将此克隆体外转染驴胎皮肤细胞和驴白细胞，连续盲传3代并以反转录酶活性测定，RT-PCR鉴定其病毒活性，透射电镜观察发现细胞培养物中存在大量典型病毒粒子，证明获得了1株具有感染性的EIAV病毒粒子，命名为pD70344V。经序列测定确认了本试验首次构建了1株完全来源于EIAV强毒基因的感染性分子克隆，将此克隆病毒接种驴，可以引起典型的马传贫症状并导致试验动物死亡。该分子克隆的建立为进一步考察病毒的毒力与基因的关系提供了良好的平台。  相似文献   

马疱疹病毒1型SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立     

王征  郭巍  姬媛媛  曲娟娟  赵立平  李红梅  相文华 《中国预防兽医学报》2012,34(2):116-119

为建立马疱疹病毒Ⅰ型(EHV-1)的检测方法,本研究以EHV-1 gB基因的一段保守区域(1207 bp～1509 bp)作为检测的目的片段设计引物,通过对其反应条件的优化,建立了特异性检测EHV-1的SYBR Green I 荧光定量PCR方法.实验结果表明:该方法检测目的基因的灵敏度下限为10拷贝/μL,比常规PCR方法高100倍;与马疱疹病毒4型(EHV-4)及其他马传染病病原体无交叉反应;组内及组间的变异系数均小于2％.该方法检测速度快及高敏感性的特点为马鼻肺炎的防制提供了有力保障,同时也为进一步开展马鼻肺炎相关的研究提供了有效的辅助检测方法技术.  相似文献   

抗马动脉炎病毒N蛋白单克隆抗体的制备     

赵世华  戚亭  郭巍  李红梅  王贵宾  刘翠云  仇铮  田志革  王征  卢刚  潘佳亮  相文华 《中国预防兽医学报》2012,(10):827-829

为制备抗马动脉炎病毒(EAV)衣壳蛋白(N)的单克隆抗体(MAb),本研究通过原核表达重组N蛋白,纯化后免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,细胞融合后经间接ELISA筛选获得两株能够稳定分泌抗EAV N蛋白的杂交瘤细胞株,MAbs亚型鉴定为IgG1,轻链为κ链。Western blot结果显示,这两株杂交瘤细胞分泌的MAb均能够识别EAV。EAV N蛋白MAb的制备,为EAV血清学检测方法的建立奠定了基础。  相似文献   

猪戊型肝炎结构基因ORF2的克隆及其植物表达载体的构建     

杨薇  曲娟娟  于婧  李杰  刘琦  夏善勇  相文华  李柱刚 《黑龙江农业科学》2009,(4):90-94

通过RT-PCR技术从一份猪粪中扩增并克隆了戊型肝炎病毒主要结构基因ORF2部分片段,大小为681 bp,将其克隆于pMD18-T载体。序列分析表明,与GenBank公布的序列一致。然后,将该基因亚克隆到植物表达载体p35S-2300-two-T-DNA-4×Ta1上,并将载体p2300上的CaMV35S启动子替换为E12启动子,构建成植物表达载体p2300-ORF2-E12。通过冻融法将重组质粒导入根癌农杆菌LBA4404中,获得了携带ORF2基因的根癌农杆菌菌株,为转基因植物工作奠定了基础。  相似文献