通用山羊痘病毒TK基因缺失转移载体的构建   总被引：3，自引：0，他引：3  

郭巍  曲娟娟  相文华  李一经 《吉林农业大学学报》2008,30(5)

用PCR方法克隆了山羊痘病毒疫苗株(GTPV-TY)的TK基因,根据TK基因结构,设计了2对引物分别扩增得到与TK基因部分相邻的长度约1kb的同源重组臂序列,分别插入到pGEM-Teasy载体,通过SmaⅠ位点重新连接,并在此位点插入CMV启动子、多克隆位点、BGHpolyA信号以及LacZ基因,构建了通用山羊痘病毒TK基因缺失转移载体pdTK.此转移载体为改造GTPV-TY株以及开发二价或多价基因工程疫苗奠定了基础.  相似文献   

Asia 1型口蹄疫病毒VP1基因的表达鉴定及其多抗制备     

朱远茂  任宪刚  史鸿飞  高欲燃  于作  冯军科  相文华  薛飞 《中国预防兽医学报》2010,32(4)

本研究旨在表达口蹄疫病毒(FMDV)的VP1全基因并制备特异性的多克隆抗体。利用PCR方法扩增Asia 1 IND 49197株VP1全基因,将其克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,在大肠杆菌BL21中进行表达。SDS-PAGE结果显示表达产物分子量约为31.6ku,以包涵体的形式存在。通过Ni-NTA Purification System纯化后进行western blot和间接ELISA分析,结果显示重组蛋白能够被FMD阳性血清识别,具有良好的反应性。将纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,ELISA测定抗体效价为1∶20480,病毒中和试验测定抗体效价为1∶64。本研究所表达的VP1蛋白可用于开发检测Asia1口蹄疫抗体的诊断试剂,所制备的多克隆抗体为进一步研究VP1的结构、功能以及抗原表位的鉴定提供了条件。  相似文献   

马传染性贫血病驴白细胞弱毒株的致弱及免疫机理的研究   总被引：6，自引：0，他引：6  

沈荣显  相文华 《中国兽医学报》2003,23(5):505-512

马传染性贫血病 (EIA)是由反转录病毒科慢病毒属的马传染性贫血病毒 (EIAV)引起的一种马属动物传染病。在慢病毒属中 ,EIAV与人免疫缺陷病毒 (HIV)在传播形式 ,单核细胞为病毒贮存库 ,病毒形态结构 ,病毒持续感染 ,病毒抗原漂移 ,EIAV的 P2 6与 HIV的 P2 4之间抗原交叉反应等都更为相似。至今 ,我国马传染性贫血病驴白细胞弱毒疫苗 (DL V)是目前世界上唯一成功应用的慢病毒疫苗 ,是慢病毒免疫预防很有希望的研究模型。因此 ,揭开 DL V的致弱及免疫机制 ,这使 EIAV有可能作为研究 HIV等慢病毒的致病机理及免疫机制的模型。EI…  相似文献   

马传贫白细胞弱毒疫苗接种马攻击强毒后脾脏超微结构的观察     

相文华  王继科  尹训南  吴东来  刘洪  蔡虹  褚桂芳 《中国预防兽医学报》1991,(4)

选接种马传贫弱毒疫苗并经强毒攻击后有三种形态学类型马各二匹,对其脾脏进行了超微结构观察。其中Ⅱ、Ⅲ型马脾内以免疫活性细胞活化、增殖为主,且与单核-巨噬细胞构成“免疫岛”;而Ⅰ型马脾内免疫活性细胞和巨噬细胞以变性、坏死性病变为主.从而进一步证实是T、B 和单核-巨噬细胞三种细胞协同免疫的结果。  相似文献   

猪戊型肝炎病毒基因ORF2片段克隆及其原核表达     

李丹丹  张馨心  于婧  赵立平  相文华 《中国兽医杂志》2009,45(3)

猪戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)是一种无包膜的正义链RNA病毒,直径为27～32 nm,表面粗糙,呈不规则球型.由于HEV组织培养困难,难以研制减毒或灭活疫苗,因此,利用基因工程技术制备重组抗原,研制多肽疫苗成为戊型肝炎研究的热点[4].  相似文献   

中国马流感研究现状     

相文华 《兽医导刊》2009,(10):18-19

一、概括及病原病理 马流行性感冒（简称马流感）是由正粘病毒科流感病毒属马A型流感病毒引起马属动物的一种急性暴发式流行的高度接触性、呼吸道传染病。该病发病率高,死亡率低,临诊特征为发烧、结膜潮红、咳嗽、流浆液性鼻液一脓性鼻漏、母马流产等。病理学变化为急性支气管炎、细支气管炎、间质性肺炎与继发性支气管肺炎。世界动物卫生组织（OIE）将其列为B类疾病,是法定报告动物疾病,我国列为三类动物疾病。  相似文献   

H3N8 亚型马流感病毒内蒙古株NS 基因的克隆及序列分析     

李雪峰  戴伶俐  郭巍  相文华  曹贵方  苏布达 《黑龙江畜牧兽医》2009,(6)

马流感病毒（Equine influenza virus,EIV）是马流行性感冒的病原体。马流感病毒的基因组为单股负链RNA,含有大小不同的8个独立的RNA片段,其第8片段为非结构蛋白基因,基因长890bp,编码非结构蛋白NS1和NS2。两者的相对分子质量分别为25ku和14ku。编码NS1的读码框连续,而编码NS2的mRNA需要剪切。序列分析表明,NS1和NS2有70个氨基酸重叠,并且在氨基端有9个氨基酸是相同的。在感染早期NS1被大量合成,  相似文献   

马鼻肺炎病毒主要糖蛋白及其功能     

时成龙  侯玉杰  相文华  王强  何剑斌 《动物医学进展》2009,30(12):90-93

马鼻肺炎(ER)是由亲缘关系密切的马疱疹病毒1型和马疱疹病毒4型(EHV-1/4)引起的马属动物几种高度接触传染性疾病的总称.其基因组包含约80个开放性阅读框,至少编码78种蛋白.目前发现EHV-1至少有12种糖蛋白,其中5个糖蛋白(gB、D、H、L、K)是病毒复制所必需的,另6个糖蛋白(gC、E、G、I、M、gp300)不是病毒在细胞培养物上生长所必需的,但存在于高毒力的野毒分离株.gB、C、D是重要的免疫原性抗原具有病毒中和表位,gM的功能是使病毒穿入和细胞间传播.论文就其中9种糖蛋白及其功能进行介绍,并对其应用前景进行了展望.  相似文献   

EIAV减毒疫苗克隆株诱导体液免疫反应的时相研究     

阳凯  孟庆来  陈新江  马燕  相文华  张耀洲  邵一鸣  张晓燕 《中国预防兽医学报》2009,31(2)

为研究马传染性贫血病毒病(EIAV)减毒疫苗免疫动物后体液免疫反应的成熟时相,选用健康马4匹.2匹接种EIAV感染性克隆减毒疫苗pLGFD3毒后,另2匹接种生理盐水做对照,接种后定期采集血样,采用ELISA方法检测各个时相点血清中gp90,p26的结合抗体滴度,并采用细胞蚀斑染色检测病毒中和抗体滴度,分析抗体反应的规律.结果显示,感染性克隆pLGFD3毒免疫后,针对env gp90和gag p26蛋白均产生了特异性的体液免疫反应,gp90结合抗体在2个半月左右达峰值,随后尽管有轻微的波动,一直维持在较高的水平直至免疫后5～6个月,随后开始轻微回落,在免疫后32个月时仍能检测到抗体的稳定存在,而p26结合抗体在1～2个月左右达峰值后则呈明显回落,在4个月时降至检测水平以下.gp90诱导的特异性中和抗体的水平同样在2个月左右达峰值,在整个观测期内持续稳定存在.结果表明,EIAV感染性克隆减毒疫苗免疫后,能诱导产生特异性的gp90,p26结合抗体以及中和抗体,而且gp90特异性抗体和中和抗体可持续稳定存在,这些抗体可能参与减毒疫苗诱导的免疫保护作用.  相似文献   

马传染性贫血病毒疫苗株S2基因不同变异位点逆向突变感染性克隆的体外复制特性分析     

高旭  姜成刚  高华  林跃智  赵立平  相文华  周建华 《中国预防兽医学报》2009,31(12)

为研究EIAV弱毒疫苗株(EIAV_(FCCV15))S2基因发生的稳定性突变对疫苗株特性的作用以及S2基因的功能,以EIAVFDDVl5感染性克隆质粒pFDDV3-8为模板,根据疫苗研制过程中S2基因发生的4个主要稳定性变异位点,构建及拯救出S2基因不同差异位点逆向突变为强毒株相应氨基酸的6株感染性克隆衍生毒株.经实时定量PCR、逆转录酶活性和western blot等检测表明,疫苗株S2基因4个稳定性变异位点全部逆向突变的感染性克隆衍生毒、,pFDDVS2rl-3-4-5在体外培养靶细胞中的复制水平低于亲本疫苗株感染性克隆衍生病毒和其他组合的逆向突变的感染性克隆衍生病毒,提示ELAV疫苗株S2蛋白4个稳定突变位点的综合作用可能是决定疫苗株和强毒株特性差异的因素之一.以上结果为体内感染S2基因逆向突变感染性克隆衍生病毒,进一步揭示S2基因在ELAV弱毒疫苗致弱过程中的作用提供了依据.  相似文献