IBDV地方变异株VP2基因的克隆与特性鉴定     

张春杰  吴庭才  李银聚  程相朝 《中国兽医学报》2004,24(5):433-435

应用 RT- PCR技术对 1株分离于地方免疫鸡群中暴发的传染性法氏囊病病例的传染性法氏囊病病毒 ( infec-tious bursal disease virus,IBDV) HN0 2 6株的 VP2基因进行了克隆与序列分析 ,并与相应毒株的 VP2高变区核苷酸及氨基酸序列进行了比较研究。结果表明 ,HN0 2 6株的核苷酸和氨基酸序列与变异株 Var- A的同源性最高 ,分别达97.3%和 97.6 % ;其次为超强毒株 UK6 6 1 ,分别为 95 .7%和 95 .2 % ;而和弱毒株 PBG98的同源率仅有 92 .8%和90 .3%。其中 ,在第一、二亲水区 ,HN0 2 6株均有 1个氨基酸发生了变化 ,即第 2 2 2位转变为 E、第 31 8位转变为 D。更重要的是 ,其 2 4 9位和 2 5 4位上的氨基酸分别为 K和 S,这些均为变异株的特性。另外 ,HN0 2 6株的七肽区保持SWSASGS不变 ,且第 2 79位和 2 84位氨基酸分别为 D和 A,又完全具备强毒株的特性。因此 ,初步确定所分离的HN0 2 6为有较强致病力的变异株 IBDV。  相似文献   

猪瘟病毒E2(gp55)基因在昆虫细胞中的表达     

季新成  陈杰  张彦明  吴发兴  黄宝续  李晓成  张燕霞  许信刚 《中国预防兽医学报》2004,26(4):256-258

将除去3'端跨膜区的猪瘟病毒E2基因亚克隆到杆状病毒转移载体pFastBacHTb,获得重组质粒pFBHT-E2,转化进含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac,发生转座作用,经抗性及蓝白斑筛选得到含E2基因的重组载体质粒rBacmid-E2,以脂质体介导的方法将此重组载体质粒转染sf9昆虫细胞,获得重组病毒,命名为rvBac-E2.经SDS-PAGE和Western-blot及ELISA等方法检测,结果表明,此E2基因在昆虫细胞中正确表达,表达的蛋白能与猪瘟阳性血清发生特异性反应.  相似文献   

仙居鸡染色体G带和Ag-NORs的研究   总被引：7，自引：0，他引：7  

陈国宏  李碧春  徐琪  张学余  吴信生  刘莉  嵇宝华 《畜牧兽医学报》2004,35(2):141-145

运用改进的鸡外周血淋巴细胞培养——空气干燥法，分析了仙居鸡染色体G带和Ag—NORs。G带研究结果表明：前10对大型染色体可分为30个区，144条带，同时对G带带型特征进行了具体描述，并绘制了G带模式图。Ag—NORs处理发现：仙居鸡的Ag—NORs常分布于1p、3p、4p、Zp、2q上，均数为3．26，众数为3。不同个体间以及同一个体的不同细胞间。Ag—NORs数目存在多态性；此外研究还发现Ag—NORs联合现象。  相似文献   

禽副粘病毒-2型标准毒株与不同分离株HN基因的序列测定及分析     

杨爱梅  赵继勋  赵西星  张国中  卜春亚 《畜牧兽医学报》2004,35(4):424-427

提取实验室保存禽副粘病毒-2标准毒株Yucaipa株和3株分离毒株F4、F6、F8株的RNA，经RT—PCR，获得4株毒株的HN基因，同时测得F基因与HN基因之间的序列。序列分析结果表明，HN基因的ORF全长为1743 nt，编码一个由580个氨基酸组成的蛋白。运用DNAMAN软件分析，4株毒株与GenBank上已发表毒株的HN基因的核苷酸和氨基酸之间的同源性相比，同源率分别为99．89％和99．69％。分析F基因与HN基因间序列发现两基因间序列与副粘病毒科其他病毒的基因间序列相似，含有基因起始信号和终止信号，但不含3个碱基的连接序列。通过序列分析，在分子水平上进一步证实分离于同一批进口七彩文鸟的F4、F6株是抗原性存在差异的两个毒株。毒株间的血清学关系与分子水平的核苷酸序列、氨基酸序列的比较关系一致。  相似文献   

Expression of the tobacco β-1,3-glucanase gene, PR-2d, following induction of SAR with Peronospora tabacina     

Deanna L. Funnell  Christopher B. Lawrence  Jeffrey F. Pedersen  Christopher L. Schardl 《Physiological and Molecular Plant Pathology》2004,65(6):285-296

Systemic acquired resistance (SAR) is induced following inoculation of Peronospora tabacina sporangia into the stems of Nicotiana tabacum plants highly susceptible to the pathogen. Previous results have shown that accumulation of acidic β-1,3-glucanases (PR-2's) following induction of SAR by P. tabacina may contribute to resistance to P. tabacina. We showed that up-regulation of the PR-2 gene, PR-2d, following stem inoculation with P. tabacina, is associated with SAR. Studies using plants transformed with GUS constructs containing the full length promoter from PR-2d or promoter deletions, provided evidence that a previously characterized regulatory element that is involved in response to salicylic acid (SA), may be involved in regulation of PR-2d following induction of SAR with P. tabacina. This work provides evidence that regulation of PR-2 genes during P. tabacina-induced SAR may be similar to regulation of these genes during infection of N-gene tobacco by TMV or following exogenous application of SA, and provides further support for the role of SA in regulation of genes during P. tabacina-induced SAR.  相似文献   

鸭流感病毒4/2004-H6N2亚型毒株的血凝素基因全序列克隆与分析     

顾节清 陈杰李晓成  杨增岐吴发兴张燕霞  黄保续 《中国动物检疫》2005,22(5):31-33

2004初从正常鸭群中分离到一株鸭源禽流感病毒，命名为A／Duck／HN／4／2004(H6N2)。经对血凝素基因(HA)序列分析发现HA基因全长为1744bp，共编码566个氨基酸，在裂解位点仅含一个碱性氨基酸-精氨酸(R)，符合LPAIV的标准。将所得基因序列与已发表的同一亚型参考序列分析表明，与H6亚型流感HA基因同源性为89．2％-97．1％，经分子遗传演化分析表明本次分离株与香港分离株A／Duck／Hong Kong／3600／99(H6N2)、A／Duck／Hong Kong／3600／99(H6N2)最近。  相似文献   

鸡白细胞介素2原核表达载体的构建及表达产物的鉴定   总被引：5，自引：1，他引：5  

提金凤  张艳梅  郝贵杰  邵卫星  刘秀梵 《中国家禽》2005,27(14):15-17

将鸡白细胞介素2(IL-2)的cDNA克隆到原核表达载体pET-30a( )上，构建原核重组表达质粒pET-IL-2，并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达，37℃用IPTG诱导3.5h后，SDS-PAGE检测表明，表达蛋白以包涵体的形式存在。将诱导后的工程菌超声波裂解，离心后的沉淀用PBS洗涤5～6次，得到高纯度的目的蛋白。  相似文献   

毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)广东株微线蛋白-2基因在大肠杆菌的表达     

覃宗华  谢明权  蔡建平  艾哈迈德  彭新宇  魏文康  吴惠贤 《中国兽医学报》2005,25(1):22-25

根据克隆的毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)广东株微线蛋白-2基因(EnMIC-2(Gd))的cDNA序列设计特异性引物，用PCR方法扩增其阅读框架(ORF)后，克隆至质粒表达载体pET-32a( )，成功构建了重组表达质粒pET-32a( )-EnMIC-2。用CaCl2法将其转化至宿主细菌E.cliBL21(DE3)，并用IPTG成功诱导了EnMIC-2重组抗原在大肠杆菌表达。表达的重组蛋白约占菌体总蛋白的10．8％，其相对分子质量约为55000。重组蛋白经SDS-AGE分析后，用E．necatrix(广东株)感染鸡的高免血清进行Western Blotting分析，结果为阳性。  相似文献   

猪2型圆环病毒核酸疫苗免疫效应研究   总被引：9，自引：0，他引：9  

宋云峰  肖少波  金梅林  张松林  陈焕春 《畜牧兽医学报》2005,36(10):1049-1054

PCR扩增PCV2 ORF2和BVP22基因。将ORF2基因克隆入真核表达载体pCDNA3．1（＋），构建了pCORF2作为核酸疫苗免疫小白鼠。同时将具有蛋白转导功能的BVP22基因分别克隆到ORF2基因的上游和下游，使二者融合表达，命名为pCORF2BVP22和pCBVP220RF2。分4组肌肉免疫BALB/c小白鼠，分别注射pCDNA3．1（＋）、pCORF2、pCORF2BVP22和pCBVP220RF2，共免疫2次，间隔2周，分别于首免后2周和二免后4周采血，ELISA法检测体液抗体。同时为在体外验证ORF2和BVP22基因的真核表达，将ORF2和BVP22基因分别克隆入pEGFP-N1载体，构建了pNORF2和pNBVP22，转染Hela细胞后在荧光显微镜下观察到了ORF2和BVP22在体外的瞬时高效表达。结果显示，通过两次免疫后，各疫苗组均产生了针对ORF2的体液抗体，同时证明BVP22可增强核酸疫苗的免疫效果，其中以BVP22在ORF2上游效果更好。本研究为防制猪2型圆环病毒感染提供了较为理想的侯选疫苗。  相似文献   

Validation of masks for determination of V̇O2max in horses exercising at high intensity          下载免费PDF全文

R. H. Sides  R. Kirkpatrick  E. Renner  K. Gough  L. M. Katz  D. L. Evans  W. M. Bayly 《Equine veterinary journal》2018,50(1):91-97

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