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马传贫驴白细胞弱毒疫苗株跨膜蛋白主要免疫决定区基因的克隆与表达 总被引:3,自引:0,他引:3
从感染驴白细胞的马传贫驴白细胞弱毒疫苗株前病毒DNA中克隆了编码跨膜蛋白主要免疫决定区(TMIR)的基因,并在大肠杆菌中进行了表达。所表达的融合蛋白有一部分是可溶的,其氨基端带有6个组氨酸的标签,因此可以用固定化金属离子亲和层析法在非变性条件下进行纯化。在间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫印迹试验中,重组的TMIR蛋白可与马传贫阳性血清样品发生反应,而与健康马血清无任何反应。这表明该重组蛋白具有良好的抗原性和特异性,可用于马传贫弱毒疫苗株在体内外复制、接种马体内免疫应答及马传贫诊断的研究。 相似文献
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猪群HEV血清抗体调查及一株新的猪HEV ORF2部分基因序列分析 总被引:5,自引:2,他引:5
戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)主要引起人的戊型肝炎,新近研究发现猪在病毒传播中可能发挥重要作用.本研究对我国部分省区HEV感染血清学调查,在被检的1 138份血清中,有666份(57.5%)为HEV抗体阳性,猪群抗体阳性率随着月龄增长而升高.通过RT-PCR方法从一份猪粪中扩增并克隆了HEVORF2 N端主要抗原决定区339bp基因片段,序列分析显示,该段基因与我国人群HEV基因4型毒株核苷酸序列同源性为85.9%,但氨基酸序列完全一致.这一结果提示我国猪群存在广泛的HEV感染,并在一定程度上与人群HEV毒株密切相关. 相似文献
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猪瘟是一种毁灭性传染病,遍及全世界,死亡率为80~90%。巴黎国际兽医局(OIE)的国际卫生法规,将猪瘟列入A类16种法定传染病之一. 50年代我国和世界其他国家均用猪瘟结晶紫 疫苗预防猪瘟,生产这种疫苗的原材料需用猪,利用率仅50~60%、每头猪(50kg)生产的疫苗仅能预防300头猪,生产周期要2.5个月,效力只有70%左 相似文献
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应用间接酶联免疫吸附试验(ELISA),检测了山羊关节炎-脑炎病毒(CAEV)试验感染山羊和自然感染山羊的血清抗体,确定了最适宜的反应条件。CAEV感染山羊血清终点滴度结果表明:ELISA比琼脂扩散试验(ID)敏感性高,对自然感染山羊检出率比ID高3%左右。CAE标准阳性血清和自然感染阳性血清预先被特异性抗原中和后的ELISA反应均呈阴性,从而证实了本方法的特异性。因此,本方法适于CAE的流行病学调查和监测工作。 相似文献
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本研究应用PCR方法检测了中国3种旧大陆猴(恒河猴、食蟹猴及藏酋猴)的TRIMCyp嵌合基因型个体的存在状况,并首次发现携带TRIMCyp嵌合基因中国品系恒河猴。同时本实验应用建立RT-PCR方法在mRNA水平上进一步检测了恒河猴和食蟹猴的TRIMCyp嵌合基因序列和特性。其编码的融合蛋白TRIMCyp丧失了对HIV-1复制的限制功能,推测具有该基因型旧大陆猴对HIV-1更易感,可用于建立新型的艾滋病非人灵长类动物模型。本研究结果将促进逆转录病毒跨种间传播的研究和建立HIV-1易感非人灵长类动物模型。 相似文献
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EIAV驴白细胞弱毒疫苗株减毒过程第61代毒前病毒全基因组DNA的克隆与分析 总被引:1,自引:1,他引:0
马传染性贫血病毒(EIAV)的毒株DLV是EIAV驴强毒株DV在驴白细胞中传代125代减毒而成.为阐明EIAV 疫苗致弱及作用机理,本研究克隆和分析了减毒过程中第61代毒前病毒基因组DNA.以该代次毒基因组DNA为模板,设计了特异性引物,进行3次LA-PCR(Long accurate PCR)扩增,均获得了7941 bp的DNA片段,并将PCR产物克隆至pMD18-T载体.经PCR鉴定、酶切鉴定及核酸序列测定,得到了16株DLV第61代的全基因组克隆及其基因组核苷酸序列.根据所测序列,对该基因组中各主要基因序列的多样性以及与已发表的我国EIAV强毒辽宁株LV和疫苗株DLV等的相应序列进行了比较分析.本研究结果为进一步探讨马传贫疫苗的致弱机理及免疫保护机制提供了有益的参考数据. 相似文献
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【目的】克隆柔嫩艾美耳球虫巨噬细胞迁移抑制因子(macrophage migration inhibitory factor, MIF)基因CDS区,探究其生物信息学特征,为后续抗原表位筛选提供理论依据。【方法】采集晋中地区疑似柔嫩艾美耳球虫感染的阳性样本进行PCR鉴定,根据GenBank中公布的柔嫩艾美耳球虫MIF基因序列,利用RT-PCR技术扩增MIF基因CDS区,构建pET28a-EtMIF重组质粒,经PCR和双酶切鉴定后测序并进行序列分析;利用生物信息学软件对其编码蛋白的理化性质、结构和功能等进行预测。【结果】成功克隆了柔嫩艾美耳球虫MIF基因CDS区序列,全长348 bp,共编码115个氨基酸,相对分子质量为1.203×104。系统进化树结果表明,柔嫩艾美耳球虫MIF基因氨基酸序列与毒害艾美耳球虫的亲缘关系最近,相似性为98.3%。MIF蛋白为非跨膜、可溶性、非分泌型蛋白,亚细胞定位主要在细胞质中,共有10个磷酸化位点;含有1个保守结构域,二级结构由无规则卷曲(35.65%)、延伸链(30.43%)、α-螺旋(27.83%)和β-转角(6.09%)组成,... 相似文献
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在幔病毒复制过程中cyclinT1(CycT1)是重要的辅助因子.为了揭示慢病毒的复制机理,试验使用RT-PCR方法扩增马和驴的cyclinT1基因,并进行克隆和序列分析,然后用DNASTAR(MegAlign)软件将测得的序列和国外发表的马属动物CycT1序列(GenBank中登录号为AF137509和AF190905)进行同源性比较.结果表明:马属动物CycT1大小为2 184 bp,编码727个氨基酸;4种CycT1基因氨基酸同源性在98%以上;将扩增出的马CycT1基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,经酶切及测序鉴定证实成功构建了pcDNA3.1(+)/eCycT1重组质粒. 相似文献