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猪传染性胸膜肺炎PCR诊断方法的建立 总被引：12，自引：2，他引：10
根据已发表的猪胸膜肺炎放线杆菌APXIV毒素的基因序列，自行设计和合成了二对可扩增448bp和365bp目的片段的引物，成功的建立了检测APP的套式PCR方法。通过对猪肺疫巴氏杆菌、猪链球菌、大肠杆菌、猪嗜血杆菌、猪肺炎支原体和猪丹毒杆菌的DNA进行了PCR检测，结果均为阴性；对猪胸膜肺炎放线杆菌的1、2、5、6、7、9国际标准血清型均扩增出448bp和365bp的特异性条带；检测的敏感度一步PCR可达到5OO个细菌，最低检出DNA浓度可达到0．585ng／mL；套式PCR可达到50个细菌，最低检出DNA浓度可达到58．5pg／mL。另外，对5株从病猪体内分离的猪胸膜肺炎放线杆菌进行了检测，5株均成阳性反应；对10只屠宰猪的肺脏分离物进行了检测，结果1份为阳性。结果表明此法特异性和敏感性均很高，可做为猪传染性胸膜肺炎的快速诊断和流行病学调查的手段。 相似文献
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猪胸膜肺炎放线杆菌的分离及PCR诊断方法的建立 总被引：14，自引：3，他引：14
APXⅣA基因是新发现的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)的RTX毒素基因,本文通过PCR方法从APP标准血清1型及临床分离到的3株野毒株中扩增出长为442 bp的部分APXⅣA基因,而从其它引起猪呼吸道疾病的细菌中无法扩增出此片段.通过玻板凝集试验鉴定这三株野毒株为血清1型APP.所建立的PCR方法能检测的DNA量最高敏感度为28pg.表明本文所建立的对猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的PCR诊断方法具有较高的特异性和敏感性. 相似文献
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猪胸膜肺炎放线杆菌PCR诊断方法的建立与应用 总被引：5，自引：3，他引：5
根据胸膜肺炎放线杆菌ApxⅣ基因设计1对引物，扩增特异的650bp棱酸片段，建立了应用PCR检测猪胸膜肺炎放线杆菌的方法。特异性试验结果表明，12个血清型的放线杆菌参考菌株均能扩增出650bp特异性的核酸片段，而大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌、猪肺炎支原体、伤寒沙门氏菌和支气管败血性波氏杆菌的扩增结果均为阴性。敏感性试验结果表明，PCR的最低检出限量为500个放线杆菌。利用建立的PCR检测方法对22株从山东省不同地区分离的疑似胸膜肺炎放线杆菌菌株进行检测．结果14株为阳性。对感染猪病变组织的检测结果表明，病变部位不同，胸膜肺炎放线杆菌的检出率不同，其中以扁桃体的检出率最高。 相似文献
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猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌复合PCR检测方法的建立 总被引：2，自引：0，他引：2
目的建立可以同时检测猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的快速而可靠的PCR检测方法。方法和结果根据胸膜肺炎放线杆菌的Apx-VIA基因序列、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的16SrRNA基因序列设计5条引物。猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌模板的PCR扩增产物大小分别为342bp,485bp和1258bp。复合PCR对1～12型猪胸膜肺炎放线杆菌标准株,6株多杀性巴氏杆菌标准株,1～15型副猪嗜血杆菌以及25株经生化鉴定确认为上述三种细菌的分离株的基因组DNA作为模板进行检测,均获得预期大小的扩增产物。以猪放线杆菌、吲哚放线杆菌等14种常见细菌作为阴性对照进行PCR检测,结果仅有支气管败血波氏杆菌产生了可以和上述三个特异性条带明显区分的PCR产物。复合PCR针对胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的敏感性分别为14pg、34pg和37pg。结论本研究建立的复合PCR特异性好,敏感性高,可以用于猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的快速检测。 相似文献
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猪传染性胸膜肺炎放线杆菌PCR检测方法的建立及应用 总被引：1，自引：0，他引：1
猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌引起猪的一种高度接触性呼吸道传染病,该病可给养猪业造成巨大的经济损失。为有效控制和确诊该病,根据报道的猪胸膜肺炎放线杆菌APXIV毒株的基因序列,合成了2对可扩增长度分别为442 bp和378 bp的特异引物,建立检测胸膜肺炎放线杆菌的巢式PCR方法。利用合成的引物在扩增猪肺疫巴氏杆菌、猪链球菌、副猪嗜血杆菌和大肠杆菌等细菌DNA时,结果均为阴性。用引物检测猪胸膜肺炎放线杆菌的标准菌株可扩增出442 bp和378 bp的特异性条带。表明运用PCR法检测猪胸膜肺炎放线杆菌的特异性和灵敏性均较高,可作为猪传染性胸膜肺炎的快速诊断和流行病学调查的手段。 相似文献
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猪传染性胸膜肺炎放线杆菌PCR检测试剂盒的研制 总被引：1，自引：1，他引：0
根据GenBank中猪传染性胸膜肺炎放线杆菌apxⅣA基因序列,设计了1对引物,通过对PCR反应条件进行优化,研制了检测猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的PCR试剂盒。该试剂盒扩增的阳性条带为600 bp,特异性与敏感性结果显示,该PCR检测试剂盒的最低核酸检测量为50 CFU/mL,而对金黄色葡萄球菌、链球菌、多杀性巴氏杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、副猪嗜血杆菌、大肠杆菌的扩增结果均为阴性。-20℃至少可保存12个月,且重复性良好。应用该PCR试剂盒对41份临床样本进行了检测,其PCR检测结果与细菌学检测结果相一致。结果表明,猪传染性胸膜肺炎放线杆菌PCR检测试剂盒能够对APP临床样品进行快捷、灵敏、准确的检测。 相似文献
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根据GenBank登录的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)血清1~14型的表面抗原蛋白D15和16S rRNA基因序列,设计2对特异性引物,分别扩增出637、431 bp两条核苷酸片段,建立了APP的多重PCR检测方法。特异性结果表明,血清1、3、5a、8、10型能扩增出两条与预期大小的片段,而扩增的大肠杆菌、巴氏杆菌、沙门氏菌、链球菌、葡萄球菌均成阴性。敏感性试验结果表明,最低检出浓度为50/μL。对临床分离的5株疑似APP菌株进行PCR,结果表明,其中4株为阳性,1株为阴性。提示,该方法的特异性和敏感性均良好。 相似文献
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猪的胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌复合PCR检测方法的建立 总被引：9，自引：0，他引：9
在已经建立猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)、猪多杀性巴氏杆菌(PM)、副猪嗜血杆菌(HPS)的单项PCR诊断方法的基础上,通过对扩增条件的优化,成功地建立了APP、PM、HPS的复合PCR实验室诊断方法,利用一次PCR反应,即可同时扩增出APP的342bp、PM的457bp和HPS的821bp的特异性片段。该复合PCR能同时检测到100个每种细菌或50pg的APP或HPS的DNA和500pg的PM的DNA。该三重复合PCR的敏感性同已报道的单PCR一致。该方法的建立对临床上进行这3种疾病的鉴别诊断和混合感染的检测都具有重要意义。 相似文献
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本研究建立了鉴定猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)血清型的多重PCR方法,并对鲁西地区流行的APP血清型进行了鉴定.根据猪胸膜肺炎放线杆菌的外膜脂蛋白(OmlA)基因设计1对种特异性引物;并且根据血清1型、5型、7型荚膜多(cps)基因设计型特异性引物,建立检测血清1型、5型、7型的PCR方法.运用多重PCR对临床分离鉴定的89株APP进行血清型鉴定,结果表明建立的多重PCR检测方法特异性和敏感性良好,可作为猪传染性胸膜肺炎快速诊断和流行病学调查的重要手段. 相似文献
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以HPS的16SrRNA中的基因序列设计合成引物，进行PCR扩增，标准菌株NR4、SW124、SW114、SW140和分离株XX、FS在预计的821bp位置上扩增出特异性条带，NJING株、胸膜肺炎（APP）等没有特异性条带产生。这证明PCR检测副猪嗜血杆菌具有较高的特异性和敏感性。 相似文献
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猪肺炎支原体PCR诊断方法的建立 总被引：2，自引：0，他引：2
建立了一个PCR检测猪肺炎支原体(Mhp)的方法。根据国外发表Mhp 16sr RNA基因设计了一对特异性引物，扩增出一个大小为653bp的特异性片段。将PCR产物克隆并测序表明，与GenBank的Mhp的序列的同源性为89．2％。而对于常见的猪呼吸道疾病有关的病原胸膜肺炎放线杆菌、支气管败血波氏杆菌、多杀性巴氏杆菌以及牛支原体、羊支原体不能扩增出特异性片段；PCR的敏感性实验显示这对引物能够检测到1ng的DNA，结果表明此方法特异、敏感。 相似文献
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猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的套式PCR检测 总被引：4，自引：0，他引：4
根据猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)apxⅣA毒素基因的序列,设计了两对特异性引物P1/P4和P6/P8,建立了检测APP全部15个血清型的套式PCR方法.对APP的15个国际标准血清型和国内的APP菌株进行了PCR检测,都能得到223 bp的特异性扩增产物;检测的灵敏度可达1.3 CFU,最低检出DNA浓度为9 fg. 相似文献
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猪胸膜肺炎放线杆菌快速PCR检测方法的建立 总被引：11，自引：0，他引：11
根据猪胸膜肺炎放线杆菌 (Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)的 apx A基因序列设计了 1对可扩增 1个4 2 2 bp片段的特异性引物 ,成功地建立了一种检测 APP的快速 PCR方法 ,并确定了其特异性和灵敏性。对血清 1～ 13型等 13个 APP标准株均能扩增出预期 4 2 2 bp的特异性条带 ;对猪副嗜血杆菌、多杀性巴氏杆菌、支气管败血波氏杆菌、大肠杆菌、葡萄球菌、链球菌的扩增结果为阴性。对 APP菌液最低检出浓度为 6 8CFU/ m L(D6 0 0 为 0 .0 0 3)。 12株临床分离菌的 PCR扩增结果与生化鉴定结果是一致的。该方法能从病料中分离培养 8h的混合菌群中快速检测APP,可用于 APP的快速诊断和流行病学的调查。 相似文献
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猪附红细胞体PCR检测方法的建立和初步应用 总被引：22，自引：1，他引：22
基于猪附红细胞体广东株16S rRNA基因的序列特点，设计合成种特异性引物，建立了猪附红细胞体PCR检测方法。该方法能特异性扩增523bp的猪附红细胞体16SrRNA基因片段，而对猪丹毒杆菌G4T10株、猪链球菌STl71株、多杀性巴氏杆菌E0630株、猪胸膜肺炎放线杆菌、猪肺炎支原体、鸡毒支原体和猫血巴尔通氏体CA株的基因组DNA没有扩增带出现。对猪附红细胞体基因组DNA的最小检测量为160pg。通过对38份临床样品的检测，8份为猪附红细胞体感染阳性，其余为阴性。结果表明，建立的PCR检测方法具有极高的敏感性和特异性，可用于急性猪附红细胞体病和临床健康带菌猪的诊断。 相似文献
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为建立一种快速诊断猪肺炎支原体病原的方法,根据GenBank上登录的Mhp基因组序列,在保守区基因内部设计合成2对引物,经过PCR反应条件的优化,建立了检测猪肺炎支原体的巢式PCR方法。结果表明,该方法对鸡毒支原体、猪鼻支原体、猪传染性胸膜肺炎放线杆菌、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病毒的扩增结果均为阴性;第1次扩增的敏感性是10pg,第2次扩增的敏感性是0.1pg,第2次比第1次扩增的敏感性高100倍。巢式PCR检测方法具有特异性强、敏感性高、重复性好等优点,可以在短时间内准确快速的检测出低含量的Mhp病原,为猪肺炎支原体的快速诊断与净化奠定基础。 相似文献
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猪链球菌2型(SS-2)、猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)、多杀性巴氏杆菌(PM)是引起"猪无名高热症"的部分病原菌,为建立可以同时检测SS-2、APP和PM的多重PCR快速诊断方法,根据GenBank中公布的有关基因序列,设计了3对引物分别用于扩增CPS2J(SS-2),ApxIVA(APP),KMT1(PM)基因的片段。敏感性和特异性结果表明,本方法对3种病原菌的最低DNA检测量分别为48.3pg(SS-2),581pg(APP),5pg(PM),而对大肠杆菌、沙门菌、猪附红细胞体、刚地弓形虫的扩增结果均为阴性。35份临床样品的多重PCR检测结果表明,有7例SS-2,5例APP,7例PM,与生化试验的鉴定结果一致。表明所建立的多重PCR方法能够对SS-2、APP和PM单个或混合感染的临床样品进行快速鉴别诊断。 相似文献