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1.
为探讨致病性猪链球菌2型（SS2）感染后对猪外周免疫系统的影响,作者选用SS2两代表性分离株（即四川分离株ZY05719和江苏分离株HA9801）建立具有典型症状和病理组织特征的小型猪感染模型,分析感染后不同时间猪血液中细菌含量和白细胞变化,以及相关免疫指标的变化。结果表明,猪链球菌2型感染会引起小型猪的急性死亡、亚急性感染和慢性迁延。急性死亡猪的血液中细菌含量高达10^4CFU／mL。感染后的12h即可见IL-1、IL-8、TNF—α、IFN-γ分泌量显著增加,其中以TNF—α增幅最显著。同时可见CD4＋T细胞的水平明显下降,CD8＋T细胞的水平上升,急性死亡猪出现CD4＋／CD8＋T细胞比值倒置,即感染猪处于免疫抑制状态。急性死亡猪血液中的淋巴细胞转化能力变化无规律,亚急性感染猪的淋转指数在下降1周后逐渐恢复。结果提示：ZY05719和HA9801菌株的致病性有差异;外周血中各相关免疫指标和SS2感染进程有-定相关性。 相似文献
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Cloning and purification of the Streptococcus suis serotype 2 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase and its involvement as an adhesin 总被引：8，自引：0，他引：8
Streptococcus suis serotype 2 is a swine pathogen responsible for diverse diseases and may be present in the tonsils of pigs which show no sign of illness. Because adhesion to host cells may be important in the carrier state, this study was undertaken to characterize a 39 kDa surface protein identified as a glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH), possibly implicated in the adhesion of the bacteria. The gene encoding for the GAPDH of S. suis was cloned and sequenced. The DNA sequence contained an open reading frame encoding for a 336 amino acid polypeptide exhibiting 95% sequence identity with the GAPDH from Streptococcus pyogenes and from other streptococci. Using the Qiaexpress expression plasmids, the gapdh gene was inducibly overexpressed in E. coli to produce GAPDH with a hexahistidyl N-terminus to permit its purification. The (His)6GAPDH protein was found to possess functional GAPDH enzymatic activity after the purification. An adherence assay with S. suis and porcine tracheal rings pre-incubated with (His)6GAPDH and non-incubated rings was showed a significant reduction in the adhesion of S. suis in the (His)6GAPDH pre-incubated rings compared to the non-incubated rings. The GAPDH protein of S. suis seems to be involved in the first steps of the bacterial adhesion to host cells. 相似文献
3.
In order to identify gene sequences unique to the virulent strains, suppression subtractive hybridization (SSH) was conducted using virulent Streptococcus suis type 2 (SS2) strain HA9801 and avirulent S. suis type 2 strain T15. Thirty genomic regions were absent in T15, and the DNA sequences of these regions in HA9801 were determined. These DNA fragments, containing putative virulence genes, encoded 28 proteins that were homologous to proteins involved in various aspects of cellular surface structure, molecular synthesis, energy metabolism, regulation, transport systems and others of unknown function. According to the published SS2 genomic sequence of the Chinese strain 98HAH33, PCR primers for 14 significant DNA fragments were designed and used for detection of the distribution of these fragments in S. suis strains from different sources, serotypes, regions, groups and times. The results showed that these 14 DNA fragments were widely distributed in 37 detected SS2 strains, yet were absent among the avirulent strain T15. Moreover, these fragments could be detected in other serotypes of S. suis, but each serotype had a different distribution of the fragments. 相似文献
4.
Huang D Zhu H Lin H Xu J Lu C 《Berliner und Münchener tier?rztliche Wochenschrift》2012,125(3-4):144-152
To explore the potential of the swinepox virus (SPV) as vector for Streptococcus suis vaccines, a vector system was developed for the construction of a recombinant SPV carrying bacterial genes. Using this system, a recombinant virus expressing truncated muramidase-released protein (MRP) of S. suis type 2 (SS2), designated rSPV-MRP, was produced and identified by PCR, western blotting and immunofluorescence assays. The rSPV-MRP was found to be only slightly attenuated in PK-15 cells, when compared with the wild-type virus. After immunization intramuscularly with rSPV-MRP, SS2 inactive vaccine (positive control), wild-type SPV (negative control) and PBS (blank control) respectively, all CD1 mice were challenged with a lethal dose or a sublethal dose of SS2 highly virulent strain ZY05719. While SS2 inactive vaccine protected all mice, immunization with rSPV-MRP resulted in 60% survival and protected mice against a lethal dose of the highly virulent SS2 strain, compared with the negative control (P < 0.05). Our data indicate that animals immunized with rSPV-MRP had a significantly reduced bacterial burden in all organs examined, compared to negative controls and blank controls (P <0.05). Antibody titers of the rSPV-MRP-vaccinated group were significantly higher (P <0.001), when compared to negative controls and blank controls. Antibody titers were also significantly higher in the vaccinated group at all time points post-vaccination (P <0.001), compared with the positive controls. These initial results demonstrated that the rSPV-MRP provided mice with protection from systemic SS2 infection. If SPV recombinants have the potential as S. suis vaccines for the use in pigs has to be evaluated in further studies. 相似文献
5.
试验旨在对分离自天津地区发病猪场的7株猪链球菌3型菌株（Streptococcus suis type 3,SS 3）进行致病性和耐药特性研究。应用剂量为1.0×107、1.0×108和1.0×109 CFU/只的细菌对小鼠进行致病力研究,用PCR方法检测7株SS 3型菌株的毒力基因mrp、ef、sly、gdh、gapdh、fbps和orf2,并对这7株SS 3型菌株进行药物敏感试验。致病力试验结果显示,接种剂量为1.0×109和1.0×108 CFU/只时分别有6和3株SS 3型菌株可使小鼠100.0%（5/5）发病死亡,接种剂量1.0×107 CFU时仍有1株SS 3型菌株可使80.0%（4/5）小鼠发病死亡,这7株SS 3型菌株对小鼠的致病力依次为R15056 > R15042=S15030 > Y12024=Y09011 > Y13125 > Y13164。毒力基因检测结果表明,共有3种毒力基因型,R12024、Y13164、R15042和S15030株为gdh、gapdh、fbps和orf2毒力基因阳性,Y13125和R15056株为sly、gdh、gapdh、fbps和orf2毒力基因阳性,Y09011株为gdh、fbps和orf2毒力基因阳性。药物敏感性试验结果显示,7株SS 3型对头孢喹肟相对最敏感,其次为阿莫西林、环丙沙星和磺胺间甲氧嘧啶钠,但对强力霉素100.0%耐药,且所有菌株均呈现3重以上的耐药性。本研究为进一步开展天津地区SS 3型流行特点及致病机理研究奠定了基础,可为天津地区SS 3型菌株的综合防控提供理论指导。 相似文献
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根据猪链球菌2型(strep tococcus su is type 2)溶血素基因(sly)设计和合成了一对可扩增其完整阅读框的引物,对HA 9801等6株猪链球菌2型江苏分离株、1株德国分离株SS2-D及猪链球菌C群参考株ATCC 35246的核酸进行PCR扩增,结果显示HA 9801等6株江苏分离株及德国株SS2呈阳性,ATCC 35246呈阴性。HA 9801株PCR产物纯化后测序,序列分析结果表明该DNA片段与猪链球菌2型1933株的sly基因同源性为99%。 相似文献
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猪链球菌2型江苏分离株溶血素基因检测及序列分析 总被引：1，自引：0，他引：1
根据猪链球菌2型（Streptococcus suis type 2）溶血素基因（sly）设计和合成了一对可扩增其完整阅读框的引物，对HA9801等6株猪链球菌2型江苏分离株，1株德国分离株SS2-D及猪链球菌C群参考株ATCC35246的核酸进行PCR扩增，结果显示HA9801等6株江苏分离株及德国株SS2呈阳性．ATCC35246呈阴性。HA9801株PCR产物纯化后测序．序列分析表明该DNA片段与猪链球菌2型1933株的sly基因同源性为99％。 相似文献
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Immunoproteomic approaches were undertaken to study the immunogenicity of the membrane-associated proteins of the Streptococcus suis type 2 (SS2) China vaccine strain HA9801. The membrane-associated proteins were enriched using the Triton X-114 extraction protocol and were analysed by two-dimensional gel electrophoresis (2-DE) and subsequent immunoblotting using the hyperimmune serum of SS2-HA9801-immunized specific pathogen free (SPF) minipigs. A total of 11 proteins were recognized, and the corresponding spots on a duplicate gel were excised and identified by MALDI-TOF MS. 相似文献
10.
为了解9型猪链球菌广东分离株毒力因子基因型、基因变异和进化情况，本试验采集发病猪脑脊液、关节液、脾脏、肝脏、淋巴结进行细菌分离培养和生化鉴定，采用PCR方法鉴定其血清型及部分毒力基因，对cps9D、gdh、gapdh与orf2基因进行序列测定和分析，并构建系统发育树。结果显示，分离菌镜检为革兰氏阳性链状球菌，在鲜血琼脂平板中呈β溶血，可发酵大多数糖类，能成功扩增cps9D基因，含重要的保守基因gdh及毒力基因gapdh和orf2，表明分离菌株为9型猪链球菌。分离菌株cps9D、gdh、gapdh、orf2基因核苷酸序列与GenBank上国内外参考菌株的同源性分别为95.9%~100.0%、98.6%~99.8%、98.7%~99.6%和95.5%~99.9%，说明分离菌株与国内外其他9型猪链球菌毒株核苷酸同源性都较高，且与国内外的流行毒株基本一致，未发生太大的变异。系统发育树表明，分离株与国内外来源不同的猪链球菌分离株同源性高，亲缘关系密切。 相似文献
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为了探讨猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2,SS2)的Ⅲ型溶血素是否具有溶血活性以及Ⅲ型溶血素在SS2致病过程中的作用,本研究利用同源重组基因敲除法成功构建了SS205ZY的Ⅲ型溶血素(slyrp)基因缺失突变菌株△slyrp及双基因缺失突变菌株△sly/△slyrp,并比较了野生菌株和基因缺失突变菌株的溶血能力以及对小鼠的致病力.结果表明,slyrp基因敲除后可导致SS2裂解红细胞的能力有所下降,而双基因缺失突变菌株△sly/△slyrp的溶血能力完全丧失;slyrp基因敲除后对小鼠的致病力没有影响.结果提示猪链球菌2型Ⅲ型溶血素具有一定的溶血能力,该Ⅲ型溶血素在SS2感染过程中,对溶血素(sly)起协同作用,不是SS2主要的毒力相关基因. 相似文献
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猪链球菌2型江苏分离株溶血素的纯化 总被引：7，自引：1，他引：6
将猪链球菌2型(Streptococcus suis type2)江苏分离株HA9801接种于THB培养基中培养，得到含溶血素的培养液，其溶血价为128，再经50％饱和硫酸铵沉淀，脱盐，得到溶血素粗提物，溶血价为2048。粗提物用阴离子交换柱层析及凝胶过滤层析，所得活性峰收集液溶血价分别为4096、1024。通过以上三步的纯化，溶血素的比活提高200倍。纯化蛋白在SDS-PAGE中呈现一条带，达电泳级纯度。 相似文献
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猪霍乱沙门氏菌的快速分离鉴定 总被引：3，自引：0，他引：3
猪霍乱沙门氏菌是引起仔猪副伤寒的主要病原菌,给养猪业造成重大危害。本文旨在建立一套细菌快速分离鉴定方法,为该病流行病学调查提供有效手段。从临床初诊为仔猪副伤寒的病猪采集粪便,接种亚硒酸盐亮绿增菌液增菌后,划线于SS琼脂培养基,挑无色透明菌落纯化。纯化菌落用美国B IOLOG自动细菌鉴定仪GN2肠杆菌鉴定板鉴定,同时用常规生化鉴定管鉴定,结果符合猪霍乱沙门氏菌的生化特征。PCR扩增invA基因,测序鉴定PCR产物,结果与猪霍乱沙门氏菌参考序列同源性达99%以上。分离菌株接种小白鼠,证明其对小白鼠有致病性。用沙门氏菌属标准血清检测证实其抗原式为6,7∶c∶1,5,符合猪霍乱沙门氏菌的抗原特征。应用以上方法从全国各地病料中分离鉴定了40多株猪霍乱沙门氏菌,为猪霍乱沙门氏菌病的流行病学调查提供了依据,同时证明该方法切实可行。 相似文献
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从江苏省某屠宰场猪的扁桃体中分离到1株细菌,通过培养特性、菌体形态、菌落形态、染色特性、生化试验以及荚膜多糖(cps)基因的PCR检测,确定为猪链球菌2型,命名为HA0609。本试验针对猪链球菌7种主要毒力因子——谷氨酸脱氢酶(gdh)、溶菌酶释放蛋白(mrp)、胞外因子(epf)、溶血素(sly)、纤连蛋白/血纤蛋白原结合蛋白(fpbs)、次黄嘌呤核苷酸脱氢酶(impdh)及毒力相关序列orf2,进行PCR检测。与已知强毒株比较,该菌株2种主要毒力因子sly和epf均为阴性。动物试验显示HA0609对猪、兔和Balb/c鼠均无致病性。 相似文献
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为分析猪链球菌4型(Streptococcus suis type 4,SS4)分离株的病原生物学特性,试验对来自中国不同地区的10株猪链球菌4型进行了多位点序列分型,通过PCR方法对猪链球菌7个保守管家基因aroA、gki、dpr、mutS、recA、thrA、cpn60进行扩增,测序后将结果上传至MLST数据库查找序列型,然后制作聚类分析图来阐明菌株之间的亲缘关系;采用PCR方法对7种主要的毒力基因gdh、mrp、epf、sly、fbps、gapdh与orf2进行鉴定,通过毒力因子谱来分析猪链球菌4型毒力因子的分布;以纯化的10株细菌对BALB/c小鼠进行动物致病性试验,根据小鼠致死数量筛选出最强毒株,并进行新西兰兔致病性试验。结果显示,10株猪链球菌4型经多位点序列分型,6株为ST850型,3株为ST1006型,1株为ST94型;结合菌株分离地区分析发现,广东和江苏地区菌株有较高的同源性,江沪地区菌株出现分化现象,表现为遗传多样性;10株菌株均检测到了gdh、gapdh和orf2毒力基因,7株检测到sly基因,4株检测到fbps基因,根据毒力因子谱发现共有3个毒力基因型,gdh+sly+gapdh+orf2+型有6株,gdh+fbps+gapdh+orf2+型有3株,gdh+sly+fbps+gapdh+orf2+型仅有1株。动物致病性试验表明,10株细菌均能使BALB/c小鼠死亡,其中SH1510的半数致死量低至1×108 CFU,对小鼠的致病性最强,将纯化的SH1510菌液接种新西兰兔,可使新西兰兔出现典型的神经症状并死亡。以上结果为猪链球菌的遗传进化、毒力研究提供了新的数据,丰富了猪链球菌病的研究。 相似文献
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根据GenBank已发表序列设计引物，通过RT-PCR成功获得了H9亚型禽流感病毒北京分离株A／Chicken／Beijing／1／96（H9N2）的HA1片段，经序列分析HA1片段与其他已发表序列同源性为95％～98％。将HA1片段克隆入pET．28a的多克隆位点构建重组质粒pET28-H9HA1并转化宿主菌BL21（DE3），用IPTG诱导表达，经SDS-PAGE电泳及Western blot分析证实，H9HA1片段得到表达，并且表达的蛋白带分为42Ku和23Ku两条。血凝实验和血凝抑制实验表明原核表达的HA1蛋白不具备血凝活性，其阳性血清不能引起血凝抑制。交叉反应实验证实原核表达的重组蛋白能与禽流感病毒H9亚型单特异性血清反应，而与禽流感病毒H5、H7亚型以及其他禽传染病病原微生物单特异性血清无交叉反应。说明表达的蛋白具有良好的反应原性和特异性，有开发成为H9亚型禽流感检测试剂的可能。 相似文献
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禽流感病毒A/Chicken/Yangzhou/N/2005(H9N2)HA基因的克隆及序列分析 总被引：1，自引：0，他引：1
根据GenBank公开发表的H9N2型禽流感病毒血凝素(HA)基因序列设计1对引物,用RT-PCR方法成功扩增出H9N2型禽流感病毒分离株A/Chicken/Yangzhou/N/2005(H9N2)HA基因,凝胶电泳结果显示,扩增产物为1.7 kb的单一条带,与预期结果相符.将PCR扩增片段连接到pCR2.1-T载体上,重组质粒酶切鉴定正确.序列测定分析结果显示,所获序列与GenBank中收录的H9N2亚型分离株核苷酸同源性最高达99%,与原型毒株A/Furkey/Wisconsin/1/1966(H9N2)氨基酸同源性为89%.对HA裂解位点附近的氨基酸序列分析表明,此毒株为低致病力毒株. 相似文献
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几株益生乳酸菌对Caco-2细胞的黏附及其对致病菌黏附的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
以Caco-2细胞作为体外模型研究几株乳酸菌的黏附性能及其对大肠杆菌K88和鼠伤寒沙门氏菌的黏附抑制性能。采用荧光标记法评价这几株乳酸菌的黏附性能,并通过竞争、排斥和置换试验检测其对上述2株病原菌黏附的抑制作用。结果表明:1)除了乳酸乳球菌外,其他乳酸菌对Caco-2细胞的黏附率均高于这2株病原菌,且黏附率为乳杆菌(Lactobacillus)>肠球菌>致病菌>乳球菌。2)来源于健康鸡肠道的乳杆菌与分离于人肠道的鼠李糖乳杆菌(Lacto-bacillus rhamnosus)和食果糖乳杆菌(Lactobacillus fructivorans)的黏附率接近。3)大部分乳酸菌菌株能通过置换作用抑制大肠杆菌K88和鼠伤寒沙门氏菌的黏附。结果提示,这几株乳酸菌对肠上皮细胞均有较高的黏附率,尤其是乳杆菌,且它们的黏附有菌属特异性。乳酸菌抑制上述2种病原菌的黏附主要通过置换方式,但没有菌属特异性,且与其自身的黏附力也没有必然的联系。 相似文献
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本研究于2011年－2014年在我国部分省区鸡群中鉴定出49株 H9N2亚型禽流感病毒,并对所有毒株的 HA 基因进行克隆、测序及序列分析。结果表明,49个毒株的 HA 基因开放阅读框全长均为1683 bp,编码560个氨基酸。所有分离株均属于以 HK/Y280/97株为代表的 H9．4．2谱系,并明显分成2个亚分支(H9．4．2．5和 H9．4．2．6)。分离株 HA 基因核苷酸同源性在87．1％~100％之间,与疫苗株 SH/F/98株、GD/SS/94株和 SD/6/96株核苷酸同源性在89．4％~92．5％之间。对 HA 基因的推导氨基酸序列分析表明,所有分离株裂解位点附近没有连续的碱性氨基酸插入,符合低致病力毒株特征,受体结合位点为PWTN?LY 形式,受体结合位点左沿为 NGLM/QGL 形式,右沿均为 GTSKA 形式。在49个分离株中共发现10个潜在糖基化位点,但只有6个糖基化位点保守。研究表明,近年来 H9N2亚型禽流感在我国多个地区流行,2013年以后流行毒株趋势以 H9．4．2．5为主,但病毒基因仍在不断发生变异,因此需要继续加强对H9N2亚型禽流感分子流行病学的监控。 相似文献