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用鸭病毒性肝炎弱毒疫苗和因病毒性肝炎死亡鸭肝脏组织液制备油剂灭活疫苗,对高产蛋鸡进行多次强化免疫,收集所产的高免鸡蛋,试制抗鸭病毒性肝炎卵黄抗体液,用于防治雏鸭病毒性肝炎,效果良好,卵黄抗体液,用于防治雏鸭病毒性肝炎,效果良好,也能避免应用同源卵黄抗体液可能带来的疾病传播。 相似文献
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精制禽流感高免卵黄抗体的研究 总被引：3，自引：0，他引：3
用禽流感油乳剂灭活苗按一定的免疫程序免疫SPF蛋鸡,制备高免卵黄抗体,用改良的水稀释法对IgY进行纯化,经过抗体效价检测、无菌检验、安全试验、动物试验,该卵黄抗体可以用于田间试验。保存期试验证明:精制禽流感高免卵黄抗体室温条件下可保存10个月,4℃条件下保存15个月,-20℃条件下保存18个月。 相似文献
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抗软骨藻酸单克隆抗体杂交瘤细胞株的构建 总被引：3，自引：0，他引：3
为了获得稳定、高效分泌抗软骨藻酸(DA)单克隆抗体的杂交瘤细胞株,采用活泼酯法制备软骨藻酸免疫抗原(DA-KLH)和包被抗原(DA-BSA),以DA-KLH免疫BALB/c小鼠,用细胞融合技术筛选抗软骨藻酸单克隆抗体杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备大量单抗,捕获EL ISA法测定小鼠免疫球蛋白亚型,间接ELISA法测定腹水效价;用G蛋白亲和层析法来纯化腹水。结果显示,成功构建2株能稳定分泌DA单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株2B1和4C2,抗体亚类分别为IgG1和IgG2a,间接EL ISA检测小鼠腹水的抗体效价达1∶64 000,腹水纯化后蛋白浓度为1.27和0.675 mg/mL。研究结果表明,成功制备的抗DA单克隆抗体杂交瘤细胞株稳定、高效,为利用该单抗研制快速检测软骨藻酸的胶体金免疫层析试纸条打下基础。 相似文献
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本研究从爆发性死亡的大口黑鲈(Micropterus salmoides)鱼苗病样中分离培养1株大口黑鲈弹状病毒(M.salmoides rhabdovirus,MSRV)毒株,采用甲醛灭活大口黑鲈弹状病毒,制备佐剂灭活疫苗,免疫产蛋鸡,收集高免蛋,制备MSRV卵黄抗体,测定其效价、中和效果及对病毒复制和宿主细胞内凝集素基因(intelectin)表达的影响。结果显示,成功利用草鱼(Ctenopharyngodon idellus)卵巢细胞株CO细胞分离培养大口黑鲈鱼弹状病毒,并用于佐剂灭活疫苗的制备;MSRV佐剂灭活疫苗免疫蛋鸡,成功获得MRSV的卵黄抗体,效价为1∶256,稀释度为1∶64时的中和病毒的作用最为明显,中和作用率达38.29%以上,病毒核酸拷贝数明显降低。同时,还可上调细胞内凝集素的表达。研究表明,特异性卵黄抗体对大口黑鲈弹状病毒具有明显的中和效果,为后续卵黄抗体作为免疫制剂的应用奠定了基础。 相似文献
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为了建立鳜传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)疫苗抗原含量的ELISA检测方法,制备了3株抗ISKNV主衣壳蛋白(MCP)的单克隆抗体,鉴定了其生物学特性。将大肠杆菌表达的重组MCP纯化复性后,连续3次免疫BALB/c小鼠,然后将免疫小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合,经过克隆、筛选,获得3株能稳定分泌抗ISKNV MCP蛋白的单克隆抗体阳性细胞株,分别命名为5F1、3D9和5B4,均为Ig G1亚型。间接ELISA实验表明,3株单抗可特异性识别ISKNV,与鳜弹状病毒、大鲵虹彩病毒等无交叉反应。将5F1株免疫小鼠后制备腹水,以重组MCP和ISKNV细胞培养物上清液为检测抗原,ELISA检测腹水效价分别为1∶51 200和1∶400。间接免疫荧光(IFA)和Western Blotting鉴定结果显示,5F1能够与ISKNV病毒发生特异性反应,并初步确定5F1单抗株制备的腹水用于IFA的使用浓度为1∶200、Western Blotting的使用浓度为1∶1000。结果证实,成功制备了抗ISKNV MCP的单克隆抗体,可特异性识别ISKNV病毒粒子和MCP蛋白,为建立ISKNV疫苗抗原含量检测方法奠定了基础。 相似文献
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间接红细胞凝集反应检测中华鳖血清抗体的方法 总被引：7，自引：2，他引：5
建立了间接红细胞凝集反应检测中华鳖血清抗体的方法。试验证明,致敏抗原菌体浓度为３×１０８ｃｆｕ／ｍＬ、ＢＳＡ浓度为２．０ｍｇ／ｍＬ,致敏红细胞浓度２．５％时（无论是人还是绵羊红细胞）,本方法能获得最敏感的结果。加入稳定剂后的致敏红细胞,在８０ｄ内检测结果没有显著的差异。本试验测得该方法的灵敏度为１３．４±４．２,而且证明本方法具有较高的特异性、灵敏度、准确性和重复性。 相似文献
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将75只1日龄非免疫健康罗曼蛋鸡随机均分为地塞米松高剂量组(12.5mg/mL)、低剂量组(6.25mg/mL)和阴性对照组,同时进行了鸡新城疫免疫接种;分别于免疫后7、14、21、28、35d随机取5只心脏采血后分离血清,检测鸡新城疫HI抗体效价,同时摘取脾脏、胸腺和法氏囊并称重,计算免疫器官指数。结果表明,试验组的ND抗体效价与免疫器官指数显著低于对照组(P<0.05),而且高剂量组低于低剂量组。 相似文献
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本研究将传染性造血器官坏死病病毒(infectious hematopoietic necrosis virus,IHNV)分离株SD-12糖蛋白(glycoprotein,G)基因克隆进商业化载体pc DNA3.1(+),构建了IHNV G的表达载体,即传染性造血器官坏死病(infectious hematopoietic necrosis,IHN)核酸疫苗,命名为p IHNsd-G。采用背鳍基部肌肉注射的方式,以2μg/尾的剂量免疫虹鳟(Oncorhynchus mykiss)鱼苗(5.0±0.5)g。于免疫后第4天及第7天,利用real-time PCR技术检测免疫虹鳟头肾及接种部位肌肉组织Mx-1基因表达情况;于免疫后第21天,以100倍半数组织培养感染剂量(tissue culture infective dose,TCID50)采取腹腔注射的方式进行攻毒实验,计算核酸疫苗相对保护率(relative percent survival,RPS);于免疫后第60天及150天检测免疫虹鳟血清IHNV中和抗体效价;最后,以p IHNsd-G的启动子序列和氨苄青霉素抗性基因序列为目标基因,利用PCR方法监测p IHNsd-G在免疫虹鳟接种部位的动态分布情况。结果显示:Mx-1基因在头肾和接种部位肌肉中均显著上调表达,并且在接种部位肌肉组织中明显高于同一时间点的头肾组织;攻毒实验中p IHNsd-G对虹鳟的相对保护率高达94.4%;而在免疫后第60天,所有免疫虹鳟血清中均存在中和抗体,其最高效价高达320,在免疫后第150天,最高抗体效价为80,自此,说明已成功获得有效的IHN核酸疫苗。p IHNsd-G在虹鳟接种部位的PCR监测结果显示:在免疫后的第1天即可在注射部位的肌肉中检测到全部p IHNsd-G目标片段,在第84天时已经无法从注射部位肌肉中扩增出全长氨苄青霉素抗性基因,而所有目标基因在第150天时均消失不见。本研究在成功构建IHN核酸疫苗并系统地验证了其有效性的基础上,开展了该疫苗在接种部位的动态分析研究,为IHN核酸疫苗的研发和安全性评价研究提供了基础数据。 相似文献
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蜂胶佐剂对异育银鲫嗜水气单胞菌灭活疫苗的免疫增强试验 总被引：2，自引：0，他引：2
本文就蜂胶佐剂对鱼类细菌性疫苗的免疫增强作用进行了首次评价。试验以异育银鲫嗜水气单胞菌灭活疫苗为对象,比较了蜂胶佐剂、铝胶佐剂和无佐剂三种疫苗对银鲫的免疫效果。经抗体监测表明,免疫接种后第2周,蜂胶佐剂组银鲫已检测到血清抗体,随后抗体效价迅速上升,第4周达到峰值2^5：铝胶佐剂组和无佐剂组第3周检测到抗体．铝胶佐剂组第5周达到峰值2^5,无佐剂组第4周达到峰值2^4。银鲫免疫后第5周进行攻毒保护试验,发现蜂胶佐剂组、铝胶佐剂组和无佐剂组的免疫保护率分别为77．3％．65．0％和56．3％。试验结果表明,蜂胶佐剂能有效增强异育银鲫细菌性灭活疫苗的免疫保护力。 相似文献
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采用活化酯法将大田软海绵酸(OA)与匙孔血蓝蛋白(KLH)偶联制备免疫抗原(OA-KLH),用还原聚丙烯酰胺凝胶电泳法和红外光谱法对人工抗原的偶联效果进行分析,通过免疫兔子制备抗体,所得抗血清经Protein A凝胶层析柱纯化处理后,用紫外全波长扫描和间接竞争ELISA法验证纯化效果。结果表明,免疫抗原偶联成功并获得了高亲和力的多克隆抗血清,抗血清纯化后浓度为2.16 mg/mL,间接竞争ELISA测定其滴度为12 800、IC15为3.41 ng/mL,为建立快速、经济的检测方法打下了基础。 相似文献
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Abstract. An indirect fluorescent antibody (IFA) test was developed to detect viral antigen in tissue sections prepared from rainbow trout experimentally inoculated with infectious pancreatic necrosis virus (IPNV). Specific fluorescence was present in the pancreatic acinar tissue and occurred as brilliant fluorescence throughout the mesentery surrounding the pyloric caeca and intestines. In addition, multiple foci of fluorescent cells were seen occasionally in the kidneys and liver of infected fry. Fluorescence was not observed in tissues other than the pancreas, kidneys, and liver. The IFA test was found to be quite specific and offers a rapid means of diagnosing IPN during acute outbreaks. 相似文献
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Abstract. The sensitivity of the immunoperoxidase (IP) and fluorescent antibody (FA) techniques applied to frozen sections of organs of carp infected with spring viraemia virus (SVCV) was similar, both in respect of the intensity of the reaction and in the detection rate of the antigen. Seven days after a waterborne infection both methods detected the antigen in the kidneys and to a lesser extent in the liver and spleen. Quantification of virus gave a titre of 102.8 to 105.5 TCID50 /g of kidney, whereas the agent could not be isolated from liver and spleen tissue. In contrast, at 241 /2 days post–infection the viral antigen could be readily detected in liver and spleen but only occasionally in the kidneys using the IP and FA techniques. At this time, liver and spleen showed infectivity titres of 103.8 to 107.2 TCID50 /g tissue, whereas the kidneys were found to be free of infective virus. It is concluded that using the IP and FA techniques SVCV can be detected most frequently in the kidneys from 7 to 14 days post–infection and in the liver and spleen from 14 to 24 days post-infection. 相似文献
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牙鲆的淋巴细胞表面抗原 总被引：2，自引：0，他引：2
关于鱼类淋巴细胞的异质性的研究开始于20世纪70年代,80年代以后才利用抗IgM单克隆抗体证明硬骨鱼具有T/B样淋巴细胞[1-5]。鱼类的T淋巴细胞具有和哺乳动物T细胞相似的功能,如:对同种移植产生的排斥反应和细胞增殖反应。虽然鱼类的T样淋巴细胞还没有象哺乳动物那样建立起以表面多肽的单克隆抗体进行分离鉴定的CD系统,但在硬骨鱼中已发现了编码TCR分子和MHC分子的基因,随着DNA测序技术的迅速发展,美国、法国和日本等国家的几个实验室[6-10]在20世纪90年代开展了鱼类TCR基因多样性和组织相容性抗原(MHC)在脊椎动物系统发育中进化关… 相似文献
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Abstract. A monoclonal antibody cross-reactive with strain H-83 Oncorhynchus masou virus (OMV) and Herpesvirus salmonis has been prepared. Western blot analysis revealed that the monoclonal antibody, designated clo. 7, recognized the 16 000 (16K)-polypeptide of these herpesviruses but not the polypeptides of infectious pancreatic necrosis virus or infectious haematopoietic necrosis virus. Clo. 7 showed neither neutralizing activity against strain H-83 nor cytotoxicity to strain H-83-infected RTG-2 cells in the presence of complement. The purified antigen, recognized by clo. 7, from strain H-83 was a polypeptide with a molecular weight of 16K, and sensitive to proteolytic enzymes and sodium periodate, but not to neuraminidase and ethylether. The antigen was heat stable and stable at pH 5·0 – 9·0. 相似文献