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通过PCR扩增分离保存的8株禽波氏杆菌、3株兔支气管败血波氏杆菌及1株猪支气管败血波氏杆菌菌株的23S rRNA基因的片段(710bp),分别克隆到载体pMD18-T后测序。利用BLAST工具进行同源性搜索;用DNAStar分析软件进行同源核苷酸序列的多重比较分析并构建禽波氏杆菌菌株的系统生物进化树。结果显示,8株禽波氏杆菌核苷酸序列之间同源性为99.2%～99.7%,与GenBank中收录的NC_010645株禽波氏杆菌核苷酸序列同源性为92.4%～92.5%,与兔支气管败血波氏杆菌和猪支气管败血波氏杆菌的核苷酸序列同源性均为98.5%～99.2%。国内分离的禽波氏杆菌菌株和支气管败血波氏杆菌菌株均与国外分离菌株在遗传基因上有一定的差异。结果表明,23S rRNA序列分析可以作为鉴定禽波氏杆菌的一种快速简便的方法。 相似文献
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禽波氏杆菌分离株的16S rRNA基因序列分析 总被引：1，自引：0，他引：1
采用PCR方法对本实验室分离保存的10株禽波氏杆菌、3株兔支气管败血波氏杆菌及1株猪支气管败血波氏杆菌菌株,扩增其16SrRNA基因的5′端片段（783bp）,并测定所得片段的DNA序列。用DNAStar分析软件将所获得的序列与GenBank中的禽波氏杆菌序列进行比较,由此构建禽波氏杆菌菌株的系统发育树。结果显示,10株禽波氏杆菌核苷酸序列与GenBank中收录的AF177666株禽波氏杆菌核苷酸序列的同源性为82.0%～82.5%,与兔支气管败血波氏杆菌和猪支气管败血波氏杆菌核苷酸序列的同源性均为99.2%～99.9%,其中P9（山鸡波氏杆菌）、P11（兔支气管败血波氏杆菌）与P14（猪支气管败血波氏杆菌）分别发生1个核苷酸的缺失。本试验结果表明,16SrRNA序列分析是鉴定禽波氏杆菌的一种快速而准确的方法。 相似文献
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从2012—2013年多个兔场送检的鼻炎病死兔病料中分离出12株细菌,根据其染色形态、培养特性、生化特性确定为兔波氏杆菌,在此基础上进行兔波氏杆菌16S rRNA基因扩增及序列分析。结果显示:分离株16S rRNA基因序列与GenBank中已公布的波氏杆菌属相关菌株序列同源性均达到了99%以上,进一步证明分离的菌株为兔波氏杆菌。结果表明:从浙江省鼻炎病死兔分离获得的12株病原菌为兔波氏杆菌,该菌的分离及其特性鉴定为浙江省兔波氏杆菌病防控提供理论依据。 相似文献
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兔支气管败血波氏杆菌的分离鉴定及其免疫原性检测 总被引：1，自引：0，他引：1
2004年,山东省某一大型养兔场的20~30日龄幼兔突然大批发病死亡。病兔早期精神不振,多数病兔鼻腔流出脓性鼻液,随着病程的延长逐渐表现为呼吸困难,并出现鼻鼾声,以体况瘦弱,腹泻为主要症状。从中主要分离到4株细菌,根据其形态学特性、培养特性、生化特性、血清学反应特性等将分离菌鉴定为兔支气管败血波氏杆菌。然后对所分离到的兔支气管败血波氏杆菌菌株进行(G+C)mol%含量的测定以及16SrRNA的扩增,结果(G+C)mol%含量为61.7%~62.4%,与Kersters K结果相符(61.6%~62.6%);而该菌16SrRNA核苷酸序列与GenBank中收录的AF177666株禽波氏杆菌核苷酸序列同源性为82.7%,与本实验室保存的禽波氏杆菌及兔败血波氏杆菌参考菌株S80103株同源性高,分别为99.7%和99.9%。利用所分离到的兔支气管败血波氏杆菌菌株制备免疫原,通过免疫孕前母兔,使仔兔获得母源抗体,而使幼仔兔获得早期保护,效果较好。 相似文献
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动物园野生动物支气管败血波氏杆菌的分离鉴定与系统发育树的构建 总被引：1，自引：0，他引：1
采用Biolog和16SrRNA基因序列分析法对分离自北京动物园的8株支气管败血波氏杆菌进行了鉴定。菌株经纯化培养,用Biolog微生物鉴定系统进行了鉴定,结果表明,8株菌株为支气管败血波氏杆菌。菌株经纯化培养,采用菌落PCR方法进行16SrRNA基因序列扩增,扩增产物纯化后直接进行测序。序列经人工校对后用ClustalX1.83软件进行比对分析,最后用Mega3.1软件构建系统发育树,系统发育分析结果表明,8株菌株与支气管败血波氏杆菌DSM10303的同源性达到了99.9%,并在同一个分支内。 相似文献
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为深入了解兔支气管败血波氏杆菌（Bordetella bronchiseptica, Bb）,试验将病兔体内分离得到的菌株进行菌株鉴定、生长曲线测定、致病性研究、药敏试验及耐药基因检测,期望了解该菌的生长规律,为临床用药及防控奠定基础。通过Gram染色镜检、分离培养、16S rDNA序列分析对分离菌株进行鉴定,测定了该分离株的生长曲线、半数致死量、耐药性并对分离菌株进行β-内酰胺酶耐药基因的检测。结果表明：分离得到1株革兰氏阴性杆菌,命名为P201215,该分离株的16S rDNA基因序列与GenBank中支气管败血波氏杆菌（登录号为NR113628.1）的同源性为99%。分离株的对数生长期为2～9 h,9 h后进入平台期;对KM小鼠的半数致死量为1.19×107 CFU。药敏试验结果显示,分离株对部分头孢菌素类药物耐药,对大部分β-内酰胺类、喹诺酮类、四环素类及氨基糖苷类药物敏感,PCR检测未检出超广谱β-内酰胺酶耐药基因。 相似文献
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为鉴定从临床获得的病死成年兔中分离到的一株革兰氏阴性杆菌,应用VITEK 2 Compact全自动微生物分析系统仪完成细菌生化鉴定及药敏试验,并对16S rRNA基因测序鉴定,通过MegAlign（Lasergene7.1）及Phylogenetic（Lasergene7.1）绘制进化树及同源性比较以了解该株细菌的遗传进化关系。结果表明此株细菌是支气管败血波氏杆菌,并与BX640428等序列同源性高达100%。生化试验及药敏试验结果表明谷氨酰芳胺酶pNA试验、L-脯氨酸芳胺酶试验、酪氨酸芳胺酶试验、尿素酶试验、柠檬酸盐（钠）试验、L-乳酸产碱试验、琥珀酸盐产碱试验为阳性,对头孢替坦、头孢唑啉、呋喃妥因具有耐药性。 相似文献
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兔波氏杆菌病病原的分离与鉴定 总被引：5，自引：1，他引：5
从不同日龄病、死兔的肺部病变组织中分离到３株细菌，经形态特征、培养及生化特性、药敏试验以及动物接种回归试验等，结果表明，分离的３株细菌都是有鞭毛、能运动、无芽胞的革兰氏阴性小杆菌，在血平板上呈β溶血，在包－姜氏基上能产生棕色色素，且能与兔支气管败血波氏杆菌参考菌株Ｓ８０１０３抗血清发生凝集，用波氏杆菌参考菌株Ｓ８０１０３免疫过的兔不能抵抗波氏杆菌分离菌株的攻击，发病死亡，并且可从死亡兔体内分离到相应的细菌，而用波氏杆菌分离菌株Ｂｒ－Ｓ９５免疫的兔全部获得保护。 相似文献
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免疫失败兔群一株支气管败血波氏杆菌免疫原性及致病性初探 总被引：1，自引：1，他引：0
采用微量凝集试验（ＭＡＴ）〔１～３〕法,对免疫失败兔群分离的兔支气管败血波氏杆菌分离菌株（Ｂｒ－Ｓ９５）与本室保存的参考菌株（Ｓ８０１０３）制备的疫苗的免疫效果作了检测,比较结果表明,兔支气管败血波氏杆菌Ｂｒ－Ｓ９５菌株与本室保存的Ｓ８０１０３菌株制苗免疫后的抗体水平在各自高峰期差异不显著（Ｐ＞０．０５）。交叉免疫试验表明,分离菌株免疫的抗体水平在１∶２８．８７时,对Ｓ８０１０３菌株的攻毒具有保护力,而Ｓ８０１０３菌株免疫后的抗体水平达到１∶２９．６７时仍不能抵抗分离菌株的攻毒,因此分离菌株是一株毒力较强的支气管败血波氏杆菌。 相似文献
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本试验从河南省多个养猪场采集有明显呼吸道症状的猪肺脏和鼻拭子,进行支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)的分离鉴定,通过病原的分离、培养对分离菌株进行形态观察、培养特性和生化试验鉴定,以及用支气管败血波氏杆菌flaB基因的特异性引物进行PCR鉴定,结果表明,有8株分离菌株扩增出了237 bp的特异性目的条带,结合形态观察及生化试验鉴定,确认成功分离到了8株猪源性支气管败血波氏杆菌;药敏试验结果显示,分离菌株对强力霉素、氯霉素、氟苯哒唑、氧氟沙星、四环素、卡那霉素、庆大霉素、奈丁酸和阿米卡星高度敏感。 相似文献
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副猪嗜血杆菌的分离鉴定及16S rRNA序列分析 总被引：1，自引：1，他引：0
从云南某规模化养猪场病猪肺脏分离到1株革兰氏阴性小杆菌,经细菌生化鉴定、PCR鉴定和16S rRNA序列比对鉴定为副猪嗜血杆菌。抗生素药物敏感试验结果表明,分离菌株对四环素、红霉素、氯霉素、头孢噻吩高敏;对庆大霉素、氧氟沙星、诺氟沙星中敏;对磺胺甲唑耐药。16S rRNA分析结果表明,该分离株与GenBank中的Hps参考株AB078973(基因登录号)同源性为100%,将分离菌株鉴定为副猪嗜血杆菌。16S rRNA遗传进化关系表明,分离株与副猪嗜血杆菌3株血清5型参考株AB078972、AB078973、AB078974的16S rRNA序列位于一个分支上,遗传进化关系最近,它们之间的核苷酸同源性在99.0%~99.4%之间,初步鉴定为血清5型副猪嗜血杆菌,致病性试验结果表明,分离菌株对小白鼠有强致病性,命名为YN-1株。 相似文献
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鸡卡氏杆菌的分离与16S rRNA基因的分析鉴定 总被引：1，自引：1，他引：0
四川雅安某种鸡场种鸡出现消瘦,腹部膨大,肝脏肿大破裂出血,腹膜和输卵管炎为主要特征的疾病。为诊断和预防此病的发生,通过对细菌分离纯化、形态学观察、生化试验、药物敏感性试验鉴定出1株致病菌,应用通用引物对细菌的16S rRNA基因进行克隆和测序,测序结果于NCBI上进行BLAST比对,选择同源性较高的巴氏杆菌科15个属的29株细菌16S rRNA序列进行比对分析,构建遗传进化树。结果表明,分离纯化的细菌能在血平板上生长,革兰氏染色阴性短杆状,能发酵大多数糖和醇类,对头孢类抗生素敏感,16S rRNA序列与卡氏杆菌属细菌的同源性最高,在92.2%～99.5%之间,特别是与鸭卡氏杆菌同源在97.5%～99.5%之间。遗传进化树分析结果表明,该菌株与卡氏杆菌属细菌属于同一大分类群,与鸭卡氏杆菌位于同一个小分支,最终诊断该鸡场为卡氏杆菌感染。 相似文献
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为了解引起牛肺炎的主要病原,试验从患有肺炎的牛支气管中分离获得一株巴氏杆菌,并对其进行生化鉴定、16S rRNA测序、特异性PCR鉴定及药敏试验。结果表明:分离菌株与马巴氏杆菌(Pasteurella caballi)的生化特性一致;16S rRNA序列与Pasteurella caballi参考菌株ATCC49197的同源性为100%;特异性PCR鉴定为Pasteurella caballi;分离菌株对诺氟沙星、头孢噻吩、四环素等多种抗生素敏感。说明分离菌株为Pasteurella caballi,该细菌同样可以感染牛。 相似文献
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《黑龙江畜牧兽医》2020,(10)
2017年4—7月份,江西某规模化猪场的育肥猪发生呼吸道疾病,为了找出病原,遏制病情扩散,试验对患病猪内脏进行细菌分离鉴定及体外抑菌试验,用微量生化法结合PCR法鉴定病原菌的种属,用琼脂扩散法进行药敏试验和抑菌试验,用腹腔注射法对小鼠进行攻毒试验。结果表明:共分离得到6株分离菌,其中分离菌株JA1、JA2、JA4、JA5均不发酵糖类,M.R.、V-P、H_2S等试验均为阴性,尿素、硝酸盐还原等试验均为阳性;分离菌株AP1、AP2发酵果糖、葡萄糖等,不发酵乳糖、鼠李糖等;分离菌株JA1、JA2、JA4、JA5与波氏杆菌同源性最高,分别为99.2%、99.4%、99.6%、99.5%;分离菌株AP1、AP2与胸膜肺炎放线杆菌同源性最高,分别为97.3%、98.4%。分离菌株JA1、JA2、JA4、JA5对青霉素G、氨苄西林、林可霉素等表现为耐药或中介,分离菌株AP1、AP2对恩诺沙星等表现为中介,对氟苯尼考等表现为敏感。乳酸菌(J2-100-R2、ZCR1-2)对分离菌有明显的抑菌作用,抑菌圈直径为17～26 mm;注射分离菌的小白鼠36 h死亡率为66.67%,耐过小白鼠皮肤出现溃疡。说明该病是由支气管败血波氏杆菌与胸膜肺炎放线杆菌混合感染所致的呼吸道疾病;氟苯尼考与乳酸菌联合用药可以防治由支气管败血波氏杆菌与胸膜肺炎放线杆菌引起的呼吸道疾病。 相似文献
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鸡卡氏杆菌的分离与16S rRNA基因的分析鉴定 总被引：2，自引：1，他引：1
四川雅安某种鸡场种鸡出现消瘦,腹部膨大,肝脏肿大破裂出血,腹膜和输卵管炎为主要特征的疾病.为诊断和预防此病的发生,通过对细菌分离纯化、形态学观察、生化试验、药物敏感性试验鉴定出1株致病菌,应用通用引物对细菌的16S rRNA基因进行克隆和测序,测序结果于NCBI上进行BLAST比对,选择同源性较高的巴氏杆菌科15个属的29株细菌16S rRNA序列进行比对分析,构建遗传进化树.结果表明,分离纯化的细菌能在血平板上生长,革兰氏染色阴性短杆状,能发酵大多数糖和醇类,对头孢类抗生素敏感,16S rRNA序列与卡氏杆菌属细菌的同源性最高,在92.2%～99.5%之间,特别是与鸭卡氏杆菌同源在97.5%～99.5%之间.遗传进化树分析结果表明,该菌株与卡氏杆菌属细菌属于同一大分类群,与鸭卡氏杆菌位于同一个小分支,最终诊断该鸡场为卡氏杆菌感染. 相似文献