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禽波氏杆菌分离株的16S rRNA基因序列分析 总被引：1，自引：0，他引：1
采用PCR方法对本实验室分离保存的10株禽波氏杆菌、3株兔支气管败血波氏杆菌及1株猪支气管败血波氏杆菌菌株,扩增其16SrRNA基因的5′端片段（783bp）,并测定所得片段的DNA序列。用DNAStar分析软件将所获得的序列与GenBank中的禽波氏杆菌序列进行比较,由此构建禽波氏杆菌菌株的系统发育树。结果显示,10株禽波氏杆菌核苷酸序列与GenBank中收录的AF177666株禽波氏杆菌核苷酸序列的同源性为82.0%～82.5%,与兔支气管败血波氏杆菌和猪支气管败血波氏杆菌核苷酸序列的同源性均为99.2%～99.9%,其中P9（山鸡波氏杆菌）、P11（兔支气管败血波氏杆菌）与P14（猪支气管败血波氏杆菌）分别发生1个核苷酸的缺失。本试验结果表明,16SrRNA序列分析是鉴定禽波氏杆菌的一种快速而准确的方法。 相似文献
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禽源大肠埃希菌Biolog鉴定和系统发育分析 总被引：1，自引：0，他引：1
采用Biolog和16S rRNA基因序列分析法对中国兽医药品监察所菌种室收集保藏的18株大肠埃希菌(Escherichia coli)进行了鉴定.菌株经纯化培养,用Biolog微生物鉴定系统进行了鉴定,结果表明18株菌株为大肠埃希菌.提取基因组DNA,采用16S rRNA通用引物,用PCR进行16S rRNA基因序列扩增,扩增产物纯化后进行测序.序列经人工校对后用Clustal X 1.83软件进行比对分析,采用Mega 3.1软件构建系统发育树,结果表明18株菌株为大肠埃希菌. 相似文献
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通过PCR扩增分离保存的8株禽波氏杆菌、3株兔支气管败血波氏杆菌及1株猪支气管败血波氏杆菌菌株的23S rRNA基因的片段(710bp),分别克隆到载体pMD18-T后测序。利用BLAST工具进行同源性搜索;用DNAStar分析软件进行同源核苷酸序列的多重比较分析并构建禽波氏杆菌菌株的系统生物进化树。结果显示,8株禽波氏杆菌核苷酸序列之间同源性为99.2%～99.7%,与GenBank中收录的NC_010645株禽波氏杆菌核苷酸序列同源性为92.4%～92.5%,与兔支气管败血波氏杆菌和猪支气管败血波氏杆菌的核苷酸序列同源性均为98.5%～99.2%。国内分离的禽波氏杆菌菌株和支气管败血波氏杆菌菌株均与国外分离菌株在遗传基因上有一定的差异。结果表明,23S rRNA序列分析可以作为鉴定禽波氏杆菌的一种快速简便的方法。 相似文献
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本试验从河南省多个养猪场采集有明显呼吸道症状的猪肺脏和鼻拭子,进行支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)的分离鉴定,通过病原的分离、培养对分离菌株进行形态观察、培养特性和生化试验鉴定,以及用支气管败血波氏杆菌flaB基因的特异性引物进行PCR鉴定,结果表明,有8株分离菌株扩增出了237 bp的特异性目的条带,结合形态观察及生化试验鉴定,确认成功分离到了8株猪源性支气管败血波氏杆菌;药敏试验结果显示,分离菌株对强力霉素、氯霉素、氟苯哒唑、氧氟沙星、四环素、卡那霉素、庆大霉素、奈丁酸和阿米卡星高度敏感。 相似文献
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兔支气管败血波氏杆菌的分离鉴定及其免疫原性检测 总被引：1，自引：0，他引：1
2004年,山东省某一大型养兔场的20~30日龄幼兔突然大批发病死亡。病兔早期精神不振,多数病兔鼻腔流出脓性鼻液,随着病程的延长逐渐表现为呼吸困难,并出现鼻鼾声,以体况瘦弱,腹泻为主要症状。从中主要分离到4株细菌,根据其形态学特性、培养特性、生化特性、血清学反应特性等将分离菌鉴定为兔支气管败血波氏杆菌。然后对所分离到的兔支气管败血波氏杆菌菌株进行(G+C)mol%含量的测定以及16SrRNA的扩增,结果(G+C)mol%含量为61.7%~62.4%,与Kersters K结果相符(61.6%~62.6%);而该菌16SrRNA核苷酸序列与GenBank中收录的AF177666株禽波氏杆菌核苷酸序列同源性为82.7%,与本实验室保存的禽波氏杆菌及兔败血波氏杆菌参考菌株S80103株同源性高,分别为99.7%和99.9%。利用所分离到的兔支气管败血波氏杆菌菌株制备免疫原,通过免疫孕前母兔,使仔兔获得母源抗体,而使幼仔兔获得早期保护,效果较好。 相似文献
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袋鼠源铜绿假单胞菌分离鉴定 总被引：1，自引：0，他引：1
为确定袋鼠死亡原因,本研究采用Biolog快速鉴定系统、16SrRNA序列分析以及传统细菌鉴定方法对2株分离自北京动物园袋鼠肺脏的菌株进行形态学、培养特性、生化特性、小鼠致病性、系统发育分析等生物特性的鉴定和分析,结果表明2菌株均为铜绿假单胞菌,对昆明小鼠有强致病性。系统发育分析结果表明2株袋鼠源铜绿假单胞菌16SrRNA序列与ATCC10145模式株差异很小,同源性分别为99.9%和100%,并且位于系统发育树的同一分支。 相似文献
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为研究猪源性支气管败血波氏杆菌外膜蛋白OmpQ的功能及免疫原性,本研究参照GenBank中支气管败血波氏杆菌S798株的外膜蛋白OmpQ基因序列设计引物,通过PCR扩增技术获得OmpQ基因,测序后进行同源性分析,并将其克隆至pET-28a(+)载体,构建重组质粒pET-OmpQ,转化大肠杆菌Transetta(DE3),经IPTG诱导表达纯化目的蛋白免疫昆明小鼠制备多克隆抗体,Western blot分析其免疫原性。结果显示,表达蛋白相对分子质量大小约为36 000,且以包涵体的形式存在。间接ELISA和Western blot结果表明,表达产物具有较好的免疫原性。研究结果为支气管败血波氏杆菌外膜蛋白OmpQ的后续生物学功能研究奠定基础,并为支气管败血波氏杆菌的快速诊断提供数据支持。 相似文献
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副猪嗜血杆菌16S rRNA基因的克隆及序列分析 总被引：2，自引：1，他引：1
本研究旨在从分子水平对副猪嗜血杆菌湖南分离株进行鉴定,并用16S rRNA序列分析不同血型副猪嗜血杆菌之间的遗传关系。利用PCR扩增副猪嗜血杆菌的16S rRNA,应用ClustalX 1.81程序对序列进行比对,再用Phylip 3.67程序MP法和Mage 4.0程序NJ法绘制种系发育树,并用Puzzle 5.2程序构建最大似然树,同时利用DNAStar 5.0中的Megalign程序进行同源性分析。结果显示,所获得的16S rRNA序列长度均为783 bp,湖南分离株与已知5型副猪嗜血杆菌位于同一分枝。结果表明,湖南分离株属于5型副猪嗜血杆菌,为副猪嗜血杆菌的分子流行病学和其相关疾病的诊断奠定基础。 相似文献
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为了探讨鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer, RA)云南流行株的外膜蛋白A (OmpA)的基因序列差异及其与16S rRNA序列的相关性,PCR扩增18株云南流行株鸭疫里默氏杆菌OmpA基因及16S rRNA核苷酸序列,分别构建其系统进化树,分析其系统进化关系。结果表明,18株鸭疫里默氏杆菌OmpA基因分为2个群,其同源性分别为86%~99.2%和92.6%~100%。18株鸭疫里默氏杆菌16S rRNA基因同属1个群,同源性高达96.1%~100%。 RA-1、RA-2、RA-11和RA-39 4株分离株的OmpA基因位于进化树的同一个亚群,其16S rRNA基因也位于进化树的同一亚群,两者呈现出明显的相关关系,其他14株分离株的OmpA基因系统进化树与16S rRNA基因系统进化树无明显的相关关系。 相似文献
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Suzuki J Sasaoka F Fujihara M Watanabe Y Tasaki T Oda S Kobayashi S Sato R Nagai K Harasawa R 《The Journal of veterinary medical science / the Japanese Society of Veterinary Science》2011,73(8):1113-1115
We examined the presence of hemoplasmas, hemotropic mycoplasmas, among 11 sheep (Ovis aries) with regenerative and hemolytic anemia and found six of them were positive by real-time PCR. The positive samples were then subjected to conventional PCR for direct sequencing of the 16S rRNA gene. Nucleotide sequences of all the positive samples were identified as the 16S rRNA gene of `Candidatus Mycoplasma haemovis' by phylogenetic analysis, demonstrating the infections with this particular hemoplasma species in Japan. 相似文献
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Although hemoplasma infection in domestic animals has been well documented, little is known about the prevalence and genetic diversity of these bacteria in wild rodents. The present work aimed to investigate the occurrence of hemotrophic mycoplasmas in wild rodents from five Brazilian biomes, assessing the 16S rRNA phylogenetic position of hemoplasma species by molecular approach. Spleen tissues were obtained from 500 rodents, comprising 52 different rodent species trapped between 2000 and 2011. DNA samples were submitted to previously described PCR protocols for amplifying Mycoplasma spp. based on 16S rRNA, followed by sequencing and phylogenetic inferences. Among 457 rodent spleen samples showing absence of inhibitors, 100 (21.9%) were PCR positive to Mycoplasma spp. The occurrence of hemotropic mycoplasmas among all sampled rodents was demonstrated in all five biomes and ranged from 9.3% (7/75) to 26.2% (38/145). The Blastn analysis showed that amplified sequences had a percentage of identity ranging from 86 to 99% with other murine hemoplasmas. The ML phylogenetic analysis of 16S rRNA gene of 24 positive randomly selected samples showed the presence of ten distinct groups, all clustering within the Mycoplasma haemofelis. The phylogenetic assessment suggests the circulation of novel hemoplasma species in rodents from different biomes in Brazil. 相似文献
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猪附红细胞体16S rRNA基因的序列测定和系统进化分析 总被引：11，自引：3，他引：11
从确诊为猪附红细胞体感染的猪场，无菌采集血样，抽提猪附红细胞体基因组DNA，采用真细菌的通用引物进行16S rRNA基因扩增，对扩增产物进行克隆和测序。从3个地理位置不同的猪场均成功地扩增出长度为1469bp的核苷酸序列。系统进化分析表明，3个猪场样品所测序列一致性达99．52％以上，具有相同的基因型，但与国外报道的猪附红细胞体Illinois株同源性为95％，属于同一基因群，但基因型不同；所有种类的附红细胞体和血巴尔通氏体组成同一进化分支，这类血营养菌与支原体科，支原体属的病原最靠近(75％)，而与立克次氏体目的病原较远(70％)。上述研究证实，广东所流行的猪附红细胞体是一种新基因型的猪附红细胞体，建议命名为猪附红细胞体广东株型；为反映进化关系，猪附红细胞体和其它血营养菌应划归于支原体科的支原体属。 相似文献
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2010年8月一批进口入境的裸鼠在隔离期间发生了疑似国外文献报道的过度角化性皮炎,为了确诊该病及鉴定该病的病原,本研究从患病裸鼠皮肤组织分离到一株革兰氏阳性杆菌。细菌纯化后经Biolog自动生物鉴定仪系统初步鉴定为牛棒状杆菌(C.bovis);提取细菌基因组,PCR扩增16S rRNA基因,测序结果经比对与GenBank中的C.bovis同源性在99%以上;培养物感染裸鼠没有出现临床症状,但组织学检查显示,感染裸鼠表皮棘皮层增厚,表现出轻微的C.bovis感染特有的棘皮症。由此可以确认这次入境裸鼠暴发的疫病为过度角化症,病原为C.bovis。本研究首次报道了在我国实验动物设施暴发的裸鼠过度角化症,提示裸鼠感染C.bovis导致的过度角化症是实验动物质量监测中不可忽视的传染病。 相似文献
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根据现有细菌分类鉴定方法,采用血清学、Biolog、16S rRNA序列分析和全基因组序列分析等方法对羊败血性链球菌病疫苗生产检验用菌种CVCC 553、55001和55002进行系统鉴定。结果显示,菌种CVCC 553、55001和55002血清群为兰氏C群;Biolog鉴定为马链球菌反刍亚种;16S rRNA序列分析与马链球菌反刍亚种模式菌株CECT 5772的同源性最高(均为99.72%),且在系统发育树中位于同一分支;与马链球菌反刍亚种模式菌株CCUG 47520的DNA-DNA的杂交值大于70%,分别为80.5%、80.2%、80.5%,与马链球菌反刍亚种模式菌株CECT 5772的平均核苷酸同源性分别为97.73%、97.64%、97.77%。因此本研究认为羊败血性链球菌病疫苗生产用菌种CVCC 553、55001和55002应为马链球菌反刍亚种。 相似文献