传染性法氏囊病病毒VP2与C3d串联基因重组表达质粒的构建及其免疫功能研究     

马金荣  欧阳伟  王永山  吴晓悠  朱向东  张海彬  范红结  王忠灿  唐雨德 《中国预防兽医学报》2012,34(6):471-475

为提高传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因核酸疫苗的免疫效力,本研究根据已发表的鸡源补体C3d序列,设计并合成在5’端添加编码连接肽(Gly4Ser)2序列的C3d基因。用同尾酶BglⅡ和BamHⅠ构建含有3拷贝C3d与VP2基因融合的重组表达质粒pcDNA-VP2-3C3d。用脂质体法转染BHK21细胞,48 h后,westernblot分析表明,表达的重组蛋白为162 ku;间接免疫荧光试验检测转染细胞中具有特异性荧光。用pcDNA-VP2-3C3d与前期构建的pcDNA-VP2分别免疫2周龄SPF鸡,二免14 d后,间接ELISA法检测IBDV抗体效价,pcDNA-VP2-3C3d组抗体水平显著高于pcDNA-VP2组;MTT法检测鸡脾淋巴细胞增殖活性,pcDNA-VP2-3C3d组免疫诱导的特异性淋巴细胞增殖活性显著高于pcDNA-VP2组(p<0.05)。本研究表明C3d可以增强VP2基因免疫诱导的IBDV特异性体液和细胞免疫应答。  相似文献   

快速、特异检测李斯特菌单抗-夹心ELISA方法的建立及应用   总被引：1，自引：0，他引：1  

范红结  焦新安  刘秀梵  张如宽 《中国预防兽医学报》1998,(2)

本研究以高度特异的、针对单核细胞增生李斯特氏菌、无害李斯特氏菌、格氏李斯特氏菌共同表位的单抗ＬＪ１０Ａ为捕捉抗原抗体和酶标抗体，建立了快速检测该菌的单抗夹心ＥＬＩＳＡ方法。该方法对单核细胞增生李斯特菌的最小检出量为５×１０５个菌／ｍｌ。人工模拟样品至少可检出５个菌／１０ｇ样品，并在４８小时内报告结果。在实际应用中，我们以该法检测了２４０份肉样和８５０份奶样，并平行以改良ＭｃＢｒｉｄｅ琼脂分离细菌相比较，证实该方法的敏感性和特异性分别达到１００％和９６．９％。  相似文献   

地方本科高校动物传染病检测技术课程案例教学法探析     

张留君贺绍君刘德义范红结李磊 《河南农业》2023,(9):22-24

动物传染病检测技术是面向地方高校动植物检疫及相关专业本科生开设的一门具有较强专业性的课程,传统的偏重理论知识而轻视实践操作的本科生人才培养模式已无法适应该课程的教学目标。案例教学法打破了传统的课堂教学形式,促使理论与实践有效融合,增强了学生的学习兴趣,激发了学生的发散思维和创新意识,提高了学生理论联系实际、解决动物传染病防控中实际问题的综合能力,对新形势下我国地方高校本科生应用型人才培养目标的快速实现具有积极的推动作用。  相似文献   

犊牛腹泻大肠杆菌LEE和HPI毒力岛相关基因的检测     

方光远  范红结  张玉红  张姝  陈钟鸣  顾亚凤  何小明 《金陵科技学院学报》2008,24(2)

采用多重PCR方法检测南京部分地区分离的110株犊牛腹泻大肠杆菌中肠细胞脱落位点毒力岛(LEE)和强毒力岛(HPI).对LEE毒力岛检测其核心区的ler和eaeA基因,对HPI毒力岛检测其irp2和fyuA基因.同时对LEE和/或HPI阳性大肠杆菌进行了O血清型的鉴定.在分离的110株犊牛腹泻大肠杆菌中,具有LEE和/或HPI毒力岛的菌株33株,占30%(33/110).LEE毒力岛基因检测结果为9.1%(10/110)的菌株ler和eaeA基因的扩增阳性.HPI毒力岛基因检测结果为25.5%(28/110)的菌株irp2和fyuA基因扩增阳性.0.9%(1/110)的菌株irp2阳性.5.5%(6/110)的菌株irp2、fyuA、ler和eaeA基因扩增都为阳性.在33个LEE和/或HPI毒力岛阳性分离株中,O78和O36血清型菌株分别占定型菌株的34.6%(9/26)和27%(7/26).9.1%的犊牛腹泻大肠杆菌携带LEE,25.5%的菌株携带耶尔森菌HPI,O78和O36为牛源携带LEE和/或HPI毒力岛大肠杆菌常见血清型.  相似文献   

安徽省黄淮白山羊衣原体病的血清学调查   总被引：1，自引：1，他引：0  

来景辉  范红结 《中国农学通报》2014,30(11):26-28

为了掌握安徽省黄淮白山羊衣原体病的流行情况,本次调查采用间接血凝(IHA)试验对主要养殖区的11个县（市）621份山羊血清进行了衣原体抗体检测。结果显示：11个县（市）均有不同程度的感染,血清抗体平均阳性率为16.7%(104/621);对不同送检地区、不同年龄的山羊和不同状况母山羊的衣原体抗体阳性率进行了统计分析。结果表明：安徽省主要养殖区的黄淮白山羊普遍存在衣原体感染。  相似文献   

多重RT-PCR区分PRRSV变异株和经典株方法的建立     

张志成  范红结  陈钟鸣  戴鼎震  何小明 《金陵科技学院学报》2010,26(2):85-88

根据GenBank发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒经典株和变异株基因序列,设计合成了2对引物,分别扩增NSP2和NSP9部分基因片段,建立了一种一次反转录后多重PCR鉴定区分PRRSV变异株和经典株的方法。该方法扩增PRRSV变异株时可获得380bp的特异性片段,扩增PRRSV经典株时则获得380bp和680bp两条特异性片段,根据RT—PCR产物可将两者区分开来。试验证明该方法具有敏感性高、特异性好的特点,是一种快速准确检测PRRSV的方法。  相似文献   

高度特异的李斯特菌单抗试剂的研制及鉴定   总被引：4，自引：0，他引：4  

范红结  焦新安 《中国兽医科技》1996,26(10):20-21

以单核细胞增生李斯特菌制备免疫原，应用淋巴细胞杂交瘤技术，建立了３株能稳定分泌抗单核细胞２增生李斯特菌，无害李斯特菌和格氏李斯特菌的单克隆抗体的细胞系，分别是ＬＪ１０Ａ，ＬＭ１１和ＬＢ５，而与其余种的李斯特菌和属外细菌不发生交叉反应。  相似文献   

传染性法氏囊病病毒抗原表位分析--单克隆抗体的制备与鉴定   总被引：3，自引：1，他引：3  

王军  李银  范红结  周宗安  施正良  王永山 《中国预防兽医学报》2005,27(3):171-174

将传染性法氏囊病病毒(IBDV)分离毒株ZB和TA3的细胞培养物采用不连续蔗糖密度梯度离心的方法浓缩纯化病毒,免疫BALB/c小鼠,运用淋巴细胞杂交瘤技术将免疫鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,建立了6株分泌抗IBDV单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞系1C1、1E6、2B2、2G8、3A2、3E2。间接ELISA测定,杂交瘤细胞培养上清液的抗体效价为102,诱生腹水的抗体效价为106～107。相加ELISA分析,这6株单克隆抗体对应不同的病毒抗原表位。中和试验结果表明,2G8对病毒有较强的中和能力,腹水的中和效价为105。用2B1和3E2配对建立的夹心ELISA可特异地检测IB DV。  相似文献   

传染性法氏囊病病毒自然重配株全基因组序列分析     

朱向东  王永山  欧阳伟  潘群兴  毕振威  李月华  范红结  王笑梅 《兽医大学学报》2014,(2):219-226

从具有新的流行病学特征的传染性法氏囊病（IBD）发病鸡群中分离到2株传染性法氏囊病病毒（IBDV）,分别命名为QL和ZZ—ll,对4周龄SPF鸡的致死率分别为94％和86％。为分析该毒株的分子生物学特征,对其全基因组序列进行了测定,2个病毒株基因组A节段长度为3260bp、B节段长度2827bp。病毒演化分析结果显示2个病毒基因组A节段的核苷酸序列与已发表的强毒株序列的同源性分别为96．8％～98．1％和96．9％～98．4％,处在IB—DV超强毒株分支上;而B节段与已发表的弱毒株序列的同源性分别为89．7％～90．4％和90．0％～90．7％,位于弱毒株分支上。IBDV超强毒株和弱毒株序列特征氨基酸残基与基序分析表明,QL和ZZ—11两个病毒株的A节段VP2基因的氨基酸残基为222A、249Q、253Q、254G、256I、294I和299S,七肽基序为SWSASGS,均符合超强毒株的分子特征;而B节段777～782位核苷酸序列为GGTGCC,没有KpnI酶切位点,具有弱毒株的序列特点。以上分析结果表明,QL和ZZ—11为IBDV自然重配株,A节段源于超强毒株,而B节段源于弱毒株。  相似文献   

弓形虫感染对大鼠T细胞免疫功能的影响   总被引：1，自引：0，他引：1  

周永华  范红结  王春莉  高琪 《江苏农业学报》2007,23(4):322-325

应用流式细胞术检测大鼠腹腔感染经CF-11纤维素纯化的活弓形虫速殖子悬液后60 d内大鼠外周血CD3 、CD4 、CD8 T淋巴细胞的百分率,并应用酶联免疫吸附试验测定其外周血IFN-γ、TNF-α、IL-4等细胞因子的水平.结果显示:CD8 T细胞亚群水平在感染弓形虫后3 d、7 d、14 d和21 d时均显著低于正常水平(P＜0.05),至感染后28 d恢复至正常;而CD4 T细胞亚群水平在整个感染过程中并无显著变化;CD4 / CD8 比值升高,以感染后14 d最为明显;大鼠外周血中IFN-γ和IL-4 水平在感染后7 d开始升高(P＜0.05),至感染后60 d时仍高于正常水平,TNF-α至感染后28 d时高于正常水平(P＜0.05),至感染后60 d时仍高于正常水平.表明大鼠感染弓形虫对其免疫功能有一定程度的影响.  相似文献