规模化猪场伪狂犬病的免疫控制策略     

王荣祥  范红结  张小飞  王强  陈田梅 《动物医学进展》2008,29(12)

我国规模化猪场伪狂犬病病毒感染率几乎达100％，市场上疫苗毒价差别过大，表示方法也不一致，有的用TCID50，有的用CCID50表示，且免疫程序混乱、生物安全意识不强、管理不到位，导致许多猪场的生产水平下降和猪群健康状况恶化。文章提出了猪伪狂犬病的免疫与控制策略，旨在为该病的控制提供科学依据。  相似文献   

1株无致病力的鸭疫里氏杆菌的分离及鉴定   总被引：4，自引：1，他引：4  

吴芳  周红  蔡建平  陆承平  范红结 《畜牧与兽医》2007,39(9):13-15

从安徽和县无病鸭场的健康鸭咽部分离到1株革兰氏阴性短杆菌,定名为LY-58株。经分离培养、形态学检查、生理生化试验、血清学鉴定及PCR鉴定,分离菌株被鉴定为2型鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)。毒力实验显示,2型RA参照菌株RAF2对10日龄北京鸭的LD50为5.57×107CFU,而分离菌株LY-58的LD50大于1.0×1010CFU,可确定为无致病性。  相似文献   

猪断奶后多系统衰竭综合征研究进展   总被引：3，自引：0，他引：3  

来景辉  范红结 《中国畜牧兽医》2006,33(4):61-63

断奶后多系统衰竭综合征(PMW S)是在北美和欧洲首先发现的一种新的猪传染病,并从PMW S患猪体内分离到猪圆环病毒2型(PCV-2)。作者就猪断奶后多系统衰竭综合征的病原学、流行病学、临床症状、病理变化及诊断方法等研究进展进行了综述。  相似文献   

番鸭“花肝病”的研究简报   总被引：8，自引：1，他引：7  

吕殿红  张毓金  黄忠  廖丽春  范红结 《畜牧与兽医》2000,32(3):27-28

1999年初至今 ,在广东省的三水、番禺、南海、中山 ,福建莆田等地多处番鸭场均发生一种临床上以缩头、厌食、拉白(绿 )痢为特征的流行病 ,其病变为肝、脾出现坏死点 ,肾肿大出血等。该病潜伏期较长、病程不一 :发病率为 5 0 %～90 %,死亡率 60 %～ 90 %,给广大养殖户造成较大经济损失。据其病变特征 ,群众形象地称之为番鸭“花肝病” ,因其病原尚待确定 ,我们也暂如此称之。目前国内外尚未见报道类似鸭病。我们对该病的发病情况作了调查 ,并进行了治疗试验、病例复制试验和病原的分离等工作 ,现简报如下。1　发病情况调查在广东省的三水、番…  相似文献   

猪伪狂犬病病毒基因缺失灭活疫苗（LA-A株）的最小免疫剂量和制品保存期的研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

乔永峰  郭容利  宋增财  刘娅梅  许梦微  郑亚婷  陈赛赛  王志胜  张传健  侯继波  范红结  王继春 《中国动物传染病学报》2020,(1):56-62

本研究将伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)变异株(PRV AH02LA株)的gE基因缺失株(LA-A株)接种BHK-21细胞,经纯悬浮培养制备抗原,甲醛灭活后制备油乳剂灭活疫苗,并确定该灭活疫苗的最小免疫剂量和效力检验方法,以及在2~8℃保存期。结果显示:猪伪狂犬病病毒基因缺失灭活疫苗(LA-A株)的效力检验方法为以2.0 mL(抗原含量108.20TCID50)接种4~5周龄PRV阴性健康仔猪,颈部肌肉注射,间隔28 d以相同剂量和方法加强免疫,加强免疫后第21 d,免疫猪血清PRV抗体中和指数应不低于10000,攻毒保护率应不低于80%;最小免疫剂量为1.0 mL(抗原含量107.90 TCID50);制品保存期:在2~8℃保存期为18个月。该研究结果为新型疫苗的研制提供了重要的试验依据。  相似文献   

基于SodC单克隆抗体的胞内劳森菌IPMA抗原检测方法的建立及应用     

李敏雪  李剑男  周红  肖宁  蔺辉星  马喆  范红结 《中国农业科学》2021,54(20):4478-4486

【目的】胞内劳森菌（Lawsonia intracellularis,LI）是引起猪增生性肠炎（porcine proliferative enteritis, PPE）的肠道病原菌,主要表现为动物福利下降,给世界养猪业造成严重的经济损失。研究通过制备鼠抗LI SodC的单克隆抗体,建立一种针对LI的免疫过氧化物酶细胞单层试验（IPMA）抗原检测方法,检验其在临床上的应用性,从而为LI的病原诊断提供一种科学有效的手段。【方法】选取胞内劳森菌弱毒疫苗为研究对象,通过PCR扩增其sodc片段,将其克隆至原核表达载体pGex-6p-1上,成功构建出pGex-6p-1-sodc重组质粒,诱导表达重组蛋白SodC。Western Blot分析重组蛋白的反应原性,一抗使用鼠抗GST标签的抗体。以该重组蛋白为免疫原,免疫4—6周龄BALB/c小鼠,利用常规细胞融合技术、有限稀释法和间接ELISA技术筛选阳性杂交瘤细胞,并制备腹水。通过间接免疫荧光（IFA）鉴定该单抗的特异性。以该单抗为一抗,摸索并建立了LI IPMA抗原检测方法,并评价该方法的特异性、敏感性和重复性。用优化后的IPMA方法对来自江苏周边地区猪场回肠组织样品进行检测,评价该方法的临床价值。【结果】纯化后SodC蛋白浓度较高,与鼠抗GST标签的抗体发生特异性结合,表明该蛋白反应原性较好。经3次亚克隆后最终共筛选获得2株阳性杂交瘤细胞,分别命名为1D6和1F7。单抗亚型鉴定结果显示：1D6亚型为IgA,1F7亚型为IgG3;ELISA检测1D6单抗效价为1﹕1 024 000;1F7单抗效价为1﹕1 024 000;间接免疫荧光（IFA）结果表明2株单抗均与LI菌株发生特异性反应,与猪霍乱沙门氏菌（Salmonella Cholerasuis,S. Cholerasuis）、猪流行性腹泻病毒（PEDV）和猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）等猪常见病原无交叉反应。优化后IPMA反应条件为：一抗稀释倍数为1﹕800,作用45min;二抗稀释倍数为1﹕2 500,作用1h,此时IPMA检测效果最佳。用该方法检测S. Cholerasuis、PEDV、TGEV、伪狂犬病毒（PRV）、猪圆环病毒2（PCV2）均为阴性;最低检测限为10³个/mL,说明该方法特异性强、敏感性高。临床样品检测结果显示146份病料中共检测出92份阳性样品,3个不同猪场的阳性样品检出率分别为65.6%、68.2%和53.7%,总体阳性率为63.0%。普通PCR方法检测出82份阳性样品,两种方法的阳性符合率为94.6%。【结论】成功制备了鼠抗LI SodC蛋白的单克隆抗体,建立了针对LI抗原的IPMA检测方法,并对临床样品进行了检测。该方法具有良好的特异性和敏感性,并具有一定的临床价值,为实验室LI的分离鉴定、在感染细胞中的定位以及流行病学调查和相关检疫提供一种有效的技术手段。  相似文献   

表达猪源链球菌类M-MRP融合蛋白基因工程菌的构建及免疫保护试验     

范红结  陆承平 《农业生物技术学报》2006,14(1):22-26

利用PCR技术,分别扩增马链球菌兽疫亚种(Streptococcusequisubsp.zooepidemicus)ATCC35246株类Mszp基因583￣1063位碱基和猪链球菌(S.suis)2型HA9801株mrp基因298￣827位碱基的片段。通过在类M基因片段的3!端和mrp基因片段的5!端引物添加共同的SacⅠ酶切位点,利用T4连接酶连接,克隆至pET-32a( )载体。将重组质粒转化大肠杆菌(Escherichiacoli)BL21,经IPTG诱导,可获得分子量约为60kD的融合蛋白。通过MRP和类M蛋白的多克隆抗体进行ELISA反应和免疫印迹分析表明:表达的融合蛋白同时具有类M蛋白和MRP的抗原性。用组氨酸亲和层析柱纯化的重组融合蛋白,和链球菌的全菌二联灭活疫苗分别免疫两组仔猪,重组蛋白的免疫保护率达60"。  相似文献   

类M蛋白对HEp-2细胞的黏附作用     

苏良科  范红结  陆承平 《南京农业大学学报》2004,27(3):74-77

采用通用的模式细胞HEp 2作黏附及黏附抑制试验 ,研究马链球菌兽疫亚种ATCC35 2 4 6株类M蛋白的黏附作用。结果表明 ,ATCC35 2 4 6株可以黏附HEp 2细胞。用重组表达的类M蛋白鼠抗血清处理ATCC35 2 4 6 ,可抑制其对HEp 2细胞的黏附 ,最大抑制率达 81 4 % ;而ATCC35 2 4 6的全菌鼠抗血清在 1∶80 0时能完全抑制它对HEp 2细胞的黏附。此外 ,热酸提取的ATCC35 2 4 6株的类M蛋白和重组表达的类M蛋白可不同程度地抑制该菌株的黏附 ,前者在 16 0μg·mL-1有最大的黏附抑制率 ( 4 0 % ) ,而后者在 6 0 μg·mL-1的黏附抑制率可达最高值 ( 2 3% )。结果显示 ,类M蛋白是ATCC35 2 4 6株的黏附素之一 ,在对细胞的黏附过程中发挥作用  相似文献   

2007～2012年浙江省及周边地区猪圆环病毒2型(PCV2)分子流行病学调查   总被引：2，自引：0，他引：2  

吴瑗  章红兵  王鑫炎  鲍伟华  范红结 《农业生物技术学报》2013,21(4):456-463

为了进一步探索浙江省及周边地区猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)的分子进化特征。本研究运用实验室已建立的PCR方法,采集2007~2012年期间浙江省及周边地区疑似PCV2感染的180份病例的肺脏、脾脏及淋巴结,并制成混合的组织样本,进行猪PCV2感染情况检测,并抽提组织细胞DNA作为模板,进行PCV2目的片段的全基因组扩增及测序,研究结果表明:浙江省及周边地区PCV2在2007~2012年阳性率分别为41.7%、52.0%、44.1%、37.0%、40.5%和33.3%,总阳性率41.4%。与以往相比,PCV2感染率基本保持一致。随机选取的45份阳性病料PCV2全基因组测序结果显示,45个毒株均属于Group1(PCV2b),很显然,浙江省及周边地区PCV2的主导基因型依然是Group1。45个毒株中属于1A分支的有11个毒株,属于1B分支的有10个毒株,属于1C分支的有22个毒株,所占比例分别是23.9%、21.7%和47.8%,同时发现随着PCV2在本地区的流行,1C分支从无到有,且在其中的比例也越来赿高,并逐步占据主导地位。对PCV2毒株Cap变异的分析能更好掌握检测区域毒株同源性情况。  相似文献   

猪圆环病毒2型Cap蛋白的可溶性表达、纯化及鉴定     

孙伟  范红结  徐正军  高升 《畜牧与兽医》2013,45(3)

为获得可用于猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)抗体检测的重组抗原Cap蛋白,根据GenBank中发表的PCV2 ORF2序列设计物,以PCV2 JS株基因组为模板,PCR扩增出无核定位信号(nuclear localization signal,NLS)的ORF2基因片段,插入质粒pET-30a(+)构建重组表达质粒pET-ORF2ΔNLS,IPTG可诱导该重组菌表达约27 ku大小的重组蛋白。进一步分析发现该蛋白在大肠杆菌中主要以可溶性形式存在;镍柱亲和层析法纯化该蛋白,用PCV2阳性血清进行免疫印迹试验,结果发现纯化的重组蛋白能与PCV2抗体发生特异性反应,表明该纯化的蛋白具有很好的免疫反应原性,可用于临床样本中PCV2抗体的检测。  相似文献