C57BL/6和A/J两品系小鼠脾脏消减cDNA文库的构建及差异基因分析     

谢正露  沈学怀  刘琳  殷复建  马海田  范红结 《中国农业科学》2012,45(7):1406-1417

【目的】检测健康C57BL/6和A/J小鼠常规免疫指标,构建脾脏消减cDNA文库并筛选差异表达基因,以探讨两品系小鼠对猪链球菌抗病性差异的分子机制。【方法】利用ELISA法检测血清常规免疫指标,抑制性消减杂交（suppression subtraction hybridization,SSH）技术构建8周龄小鼠脾脏差异表达基因的cDNA文库。【结果】试验结果表明,A/J品系小鼠血清中IgA水平明显高于C57BL/6品系小鼠（P＜0.05）,而血清IgG和IFN水平在两品系小鼠间均无显著差异。对筛选的149个阳性克隆进行测序,去除冗余的cDNA序列载体并聚类拼接后获得56条差异表达序列标签（ESTs）。利用Genebank的BLAST分析核酸和蛋白质同源性比较,26个不同的基因或ESTs具有高度的同源性,2条ESTs未找到同源序列。【结论】筛选到很多EST与信号转导、细胞凋亡及免疫等重要功能基因高度同源,为研究猪链球菌的致病机理和防治提供了实验依据。  相似文献   

鼠伤寒沙门菌PagC蛋白单克隆抗体的制备及其特性分析     

郭晓  汪远  范红结  马喆 《南京农业大学学报》2018,(5)

[目的]本试验旨在制备抗鼠伤寒沙门菌Pag C蛋白的单克隆抗体并初步分析其特异性和识别的抗原表位,为沙门菌抗体阻断ELISA检测方法的建立奠定基础。[方法]原核表达并纯化Pag C蛋白,免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备单克隆抗体;用生物信息学分析法获得Pag C蛋白在沙门菌属内保守的区段,合成相应多肽P1及P2用于单克隆抗体筛选和结合表位鉴定;最后采用免疫印迹方法对单克隆抗体与肠杆菌科其他细菌的交叉反应进行检测,评价其特异性。[结果]纯化后的Pag C蛋白相对分子质量约23×103;免疫小鼠后经2次亚克隆最终得到稳定分泌抗体的细胞株6株,标记为A、B、C、D、I、J;单克隆抗体的反应性试验结果显示6株单克隆抗体均能够识别Pag C蛋白;单克隆抗体的结合表位分析显示,J细胞株分泌的单克隆抗体可特异性识别P1序列;采用免疫印迹方法对J细胞株上清液进行特异性检测,证实该株单克隆抗体与变形杆菌、大肠杆菌O1和宋内志贺菌Pag C蛋白均无结合反应。[结论]成功获得1株与Pag C蛋白有良好结合活性且具有高度特异性的单克隆抗体,该株单克隆抗体的识别表位位于Pag C中沙门菌属内保守区段,可作为建立沙门菌抗体阻断ELISA检测方法的候选单克隆抗体。  相似文献   

獭兔氟中毒模型的建立及各器官氟含量测定     

王量  范红结 《中国畜牧兽医》2017,44(7):2160-2164

为研究不同剂量氟化钠对獭兔的影响,试验建立獭兔氟中毒模型并对獭兔血液、骨骼、肝脏、肾脏等器官氟含量进行测定。试验獭兔日龄（30±5） d,体重（1.1±0.2） kg,数量24只,分为3组：对照组、试验Ⅰ组（10 mg/（kg·d）氟化钠组）和试验Ⅱ组（20 mg/（kg·d）氟化钠组）,试验共100 d。结果表明,试验第100天测定的骨骼和牙齿氟含量在各组之间均差异显著（P<0.05）,且骨骼和牙齿的含氟量随时间和摄入氟剂量的增加而递增;肾脏和肝脏氟含量在各组之间均差异不显著（P>0.05）;试验Ⅰ、Ⅱ组间血液氟含量差异不显著（P>0.05）,但都与对照组差异显著（P<0.05）。氟化钠作为氟化物来源可用来建立獭兔自然状态氟中毒症,骨骼和牙齿累积氟能力强,血液、肝脏和肾脏累积氟能力弱。本试验为进一步研究獭兔氟中毒及其防制提供了理论参考。  相似文献   

一起信鸽大肠杆菌病的流行     

张汇东  曹锦和  范红结  李守政 《畜牧与兽医》1999,31(1)

１９９８年５月１４日,南京市某信鸽养殖场种鸽群突然发生以成年鸽头颈歪斜,口角流粘液,稀便为主要症状的疾病。发病急,死亡快。７ｄ内发病１３１羽,死亡１３１羽。占总鸽群１４５０羽的９％。根据临床症状、病理变化和病原检测结果,确诊为大肠杆菌病。通过药敏试验...  相似文献   

板蓝根多糖对雏鸡红细胞免疫黏附功能的研究     

王量  范红结  姚毅  马红艳 《黑龙江畜牧兽医》2014,(3):89-90

板蓝根具有清热解毒、凉血利咽的功效，含有多糖、氨基酸、谷甾醇等成分。板蓝根多糖（BPS）能增强机体免疫系统的功能。目前，BPS对青脚麻雏鸡红细胞免疫功能的研究尚未见报道，本试验通过研究板蓝根多糖对青脚麻雏鸡红细胞免疫黏附功能的影响，探讨板蓝根多糖的作用机制，确定板蓝根多糖在兽医实践中的应用价值。  相似文献   

猪链球菌2型在家兔体内的分布及致病性     

胡东波  何孔旺  倪艳秀  俞正玉  吕立新  周俊明  茅爱华  范红结 《中国兽医学报》2011,31(6)

用猪链球菌2型SS2-1株按109 CFU/只分别以静脉、肌肉、皮下、滴鼻、口服5种途径人工感染健康家兔,结果前4种感染途径均可引起发病并死亡,口服不发病,且以静脉感染发病最急。当分别静脉注射109,108,107,106,105 CFU/只SS2-1株,肌肉注射108,106 CFU/只SS2-1株,结果证实感染剂量与发病程度有正相关性,家兔临床症状和病理变化明显。用荧光定量PCR方法检测所有感染家兔组织的含菌量,结果提示发病程度与含菌量呈正相关,且各组织含菌量有差异。另外,人工感染家兔后在不同时间点取动物组织做菌体含量动态监测,结果提示体内含菌量随时间推移递增,发病高峰或死亡时达最高值。试验结果证明SS2-1株对家兔易感,致病性稳定,且细菌在动物体内增殖稳定并具有规律性。  相似文献   

仔猪水肿病的防治   总被引：4，自引：0，他引：4  

来景辉  范红结 《安徽农业科学》2006,34(8):1541-1542

仔猪水肿病是目前广泛流行的一种急性传染病,病死率在90%以上,临床治疗上多采取大量抗生素、对症治疗,效果不理想。从水肿病的发病机理入手,加强饲养管理,通过营养调控来预防和治疗水肿病,辅助预防继发感染,取得理想效果。  相似文献   

C57BL/6小鼠感染猪链球菌2型后脾脏消减cDNA文库的构建及差异基因分析     

谢正露  沈学怀  殷复建  刘琳  马海田  范红结 《江苏农业科学》2012,40(4):19-26

探讨C57BL/6品系小鼠体内猪链球菌2型感染后的差异表达基因,以期为进一步研究猪链球菌的致病机制和抗病性研究提供重要的参考依据.利用抑制性消减杂交技术构建了8周龄C57BL/6小鼠感染猪链球菌2型后的脾脏消减cDNA文库.对获得的237个阳性克隆进行测序,利用GenBank BLAST分析核酸和蛋白质同源性,共获得159条差异表达序列标签(ESTs).试验结果证实,正向文库有34个、反向文库有30个不同的基因与ESTs具有高度的同源性,它们分别是免疫性能、细胞组分、细胞信号分子、转录因子等的重要功能基因产物.经抑制消减杂交筛选出的差异表达基因主要有免疫球蛋白IgM重链-6、胸腺素4- beta、磷酸酶张力结合蛋白、转磷酸胆碱酶、肽酰-脯氨酰-顺反式异构酶、磷脂酰丝氨酸脱羧酶、胰岛素样生长因子结合蛋白-3等基因.筛选到较多EST与抗病性相关的重要基因具有很高的同源性,且这些基因在猪链球菌2型感染后的表达具有显著差异,提示这些基因在猪链球菌2型感染过程中发挥着重要功能.  相似文献   

犬瘟热病毒核衣壳蛋白基因在昆虫细胞中的表达及其抗原性分析     

毕振威  王永山  范红结 《中国兽医寄生虫病》2011,19(5):21-26

将非典型犬瘟热病毒（Canine distemper virus,CDV）的核衣壳蛋白（nucleocapsid protein,N）基因克隆到杆状病毒表达系统供体质粒pFastBacHTA中,构建含N基因的重组供体质粒pFastBac-N,转化E.coli DH10Bac感受态细胞,经筛选获得含N基因的重组Bacmid DNA（rBacmid-N）,脂质体法转染昆虫细胞Sf9,获得重组杆状病毒vBacmid-N。用vBacmid-N感染昆虫细胞Sf9,免疫印迹（Western blot）分析,在62kDa处出现一条特异蛋白条带,与重组N蛋白的理论值相符合;间接免疫荧光试验（indirect immunofluorescent assay,IFA）检测,vBacmid-N感染的昆虫细胞sf9出现特异绿色荧光。以纯化的重组N蛋白为抗原建立CDV抗体间接ELISA检测方法,犬CDV阳性血清A450大于0.40,而犬CDV阴性血清A450小于0.05,显示了良好的抗原特异性与稳定性。  相似文献   

猴痘研究进展     

张睿  陈国强  张敬友  朱娜  薛峰  范红结 《中国动物检疫》2011,28(9):71-73

猴痘是一种以皮肤出疹为特征的病毒性人畜共患传染病,通过直接密切接触,由动物传染给人,并可在人与人之间传染。其主要发生于中非和西非的热带雨林,在美国也曾暴发过。虽然在我国至今尚无猴痘的报道,但未雨绸缪,做好技术储备,很有必要。  相似文献