The study of introgressive lines of Triticum aestivum × Aegilops speltoides by in situ and SSR analyses     

I. G. Adonina    E. A. Salina    T. T. Efremova  T. A. Pshenichnikova 《Plant Breeding》2004,123(3):220-224

Fluorescence in situ hybridization (FISH) with a genome‐specific repeat, Spelt1, and wheat simple sequence repeat (SSR) markers were used to analyse the chromosome constitution of two Triticum aestivum×Aegilops speltoides introgressive lines. The lines 170/98i and 178/98i carried one and two subtelomeric regions of Ae. speltoides (per haploid genome), respectively, marked by Spelt1 repeats according to FISH data. SSR analysis detected homoeologous substitution of wheat chromosome 7D with Ae. speltoides chromosome 7S in the lines 178/98i and 170/98i as well as the assumed terminal translocation in the short arm of chromosome 3A in the line 178/98i. Anthocyanin pigmentation of the coleoptiles was found in the lines 170/98i and 178/98i and resulted from the 7S (7D) substitution. It was demonstrated that Spelt1 could be effectively used for the rapid identification (without DNA isolation) of terminal translocations of T. aestivum×Ae. speltoides introgressive lines as well as for further analysis of the stability of the hybrid plants.  相似文献   

基因组原位杂交技术在植物研究中的应用   总被引：2，自引：0，他引：2  

关鹤赵泓  云兴福刘凡 《分子植物育种》2006,4(Z1):99-105

基因组原位杂交是以亲本之一的总基因组DNA做探针,另一亲本的基因组DNA做封阻,在荧光原位杂交技术的基础上发展起来的一种染色体/染色质检测技术。在其发展的十几年里,已在植物的基因组研究中发挥了重要的作用。应用这一技术可对多倍体中基因组之间的亲缘关系、基因组组成及起源进行研究;对杂交种中染色体组的组成进行分析;对代换系、附加系和易位系进行有效的鉴定,并对其中的外源染色体或染色体片段的来源、大小、数目及发生位点进行检测和定位。此外,利用基因组原位杂交技术还有助于确定物种间的同源性;研究杂交种中来源不同的染色质在核中的分布;探索B染色体的起源、染色体间的配对、重组、交换等现象。随着基因组荧光原位杂交技术体系的不断发展、完善和改进,其应用范围不断拓展,在植物基因组研究领域中发挥了越来越重要的作用。  相似文献   

内蒙古绒山羊Hoxa7基因在毛囊中的表达   总被引：1，自引：0，他引：1  

张燕军  李金泉  尹俊  高爱琴  张文广  赵艳红 《湖北农业科学》2010,49(3)

利用原位杂交技术检测Hoxa7基因在毛囊不同生长时期的表达模式,结果表明,Hoxa7基因分别在胚胎期的95 d初级毛囊的内根鞘表达、在115 d次级毛囊的内根鞘和绒干表达、在125 d初级毛囊内根鞘和毛干皮质表达、在兴盛期10月的初级毛囊毛干皮质和次级毛囊的绒干中表达。揭示在毛囊发育中,Hoxa7基因对于毛囊细胞的增殖可能起一定的作用。  相似文献   

葱的CPD染色和45S rDNA FISH核型分析     

刘良科  赵丽娟李 彬 《中国农学通报》2011,27(13):208-211

为给葱的染色体的识别提供新标记,建立葱的分子细胞遗传学核型,本研究采用去壁火焰干燥法制备了分散且形态良好的葱中期染色体,并进行了CPD（PI和DAPI组合）染色和45S rDNA荧光原位杂交（FISH）,根据葱染色体的形态特征,结合CPD染色和FISH结果,对葱进行了核型分析。CPD染色结果:葱所有染色体臂末端都显示CPD带。FISH结果：有一对45S rDNA位点（在第5对染色体上）。葱的核型公式：2n=2x=16=2sm+12m+2st(SAT)。研究表明：利用CPD染色和45S rDNA FISH,不仅能为染色体识别提供新标记,还能了解染色体GC丰富区的分布,为葱属植物的物种鉴定、系统分类与进化等研究提供DNA分子方面的证据。  相似文献   

适用于棉花荧光原位杂交的DNA纤维高效制备技术   总被引：4，自引：0，他引：4  

彭仁海  宋国立  刘方  黎绍惠  王春英  张香娣  王玉红  王坤波 《作物学报》2009,35(3):412-417

棉花富含酚类和多糖等高分子次生化合物,细胞质浓厚,且染色体形态小、数目多、制片困难,至今还未见棉花DNA纤维制备方面的报道。本研究用“刀切引流法”,在含有Triton X-100和PVP40的冰冷细胞核提取缓冲液中,用锋利的刀片切割发育一周的棉花黄化子叶以释放棉花细胞核,所得细胞核干净完整杂质少,不需要研磨和巯基乙醇等处理,方便快捷无毒害,成功率达到100%。细胞核在室温下经温和碱裂解去除染色质上的蛋白质后,以前端导引裂解液铺展载玻片,即“引流法”拉伸制备DNA纤维,避免了液体表面张力的影响,消除了因载玻片推抹用力不均而导致的DNA纤维堆积和断裂,所制备的DNA纤维平直完整、伸展程度均匀、背景清晰。用基因组和45S rDNA 分别标记探针进行杂交,结果表明所制备的棉花DNA纤维适用于荧光原位杂交。本研究探索出一套简单、高效、快捷、无毒害的适宜于棉花荧光原位杂交的DNA纤维制备技术,必将为棉花基因组研究和全基因组序列的最终完成提供强有力的技术支持。  相似文献   

黄瓜倍性材料创制及染色体组成的FISH鉴定     

管苇  张云霞  杨树琼  陈劲枫  娄群峰 《中国农业科学》2014,47(17):3513-3522

【目的】黄瓜（Cucumis sativus L.）遗传基础狭窄,种质资源多样性较为有限,遗传育种研究相对落后。本试验旨在创制整倍体和非整倍体黄瓜种质材料,建立其准确的染色体组成鉴定方法,为进一步选育黄瓜各种染色体系、目标性状的染色体定位及遗传育种研究奠定基础。【方法】以华北生态型黄瓜‘长春密刺’的高代自交系为材料,0.4％秋水仙素溶液处理萌动种子,诱导染色体数目加倍。为获得同源三倍体材料,以诱导获得的同源四倍体为母本,二倍体为父本进行杂交,授粉35-45 d后采收成熟果实进行胚拯救。采用染色体计数,结合形态学、叶片气孔电镜观察,对诱导株及杂交后代的倍性进行鉴定。利用染色体特异的探针进行荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization,FISH）,通过观察特异探针在染色体上杂交信号的数目、强弱及位置,结合黄瓜的染色体形态参数,对诱导株的染色体组成进行鉴定。【结果】对经秋水仙素处理的‘长春密刺’材料进行有丝分裂中期染色体计数观察,结果显示诱导获得8株四倍体（2n=28）,3株非整倍体（2n=16,19,27）材料。将四倍体与二倍体杂交获得了三倍体材料（2n=21）。经荧光原位杂交分析,根据黄瓜着丝粒探针Type III和核糖体45S rDNA两类信号在染色体上的信号特征可以看出,与二倍体相比,三倍体与四倍体上杂交信号为倍性变化关系,进一步验证创制出的整倍性材料为三倍体与四倍体。不同倍性‘长春密刺’植株的形态学特征存在一定差异,四倍体植株的形态指标与二倍体差异显著;三倍体植株与二倍体在形态学上差异不显著;非整倍体植株与二倍体在形态学上差异也不显著,但其长势较二倍体弱,且花期推迟,雌雄花花期不遇,坐果率明显低于二倍体。经叶片气孔电镜观察,‘长春密刺’二倍体、三倍体与四倍体植株叶片气孔的大小与密度均存在差异,随着倍性提高,气孔的长度和宽度增加,而气孔密度则下降,说明形态学筛选和叶片气孔电镜观察可以作为鉴定黄瓜倍性的辅助方法。以上述两类黄瓜重复序列（Type III和45S rDNA）和染色体特异的单拷贝基因Csa006700为探针,对染色体数目为16的一株非整倍体诱导株进行染色体组成鉴定。重复序列的荧光原位杂交结果显示,额外的两条染色体为1号或2号染色体。进一步利用黄瓜2号染色体端部的基因Csa006700探针检测,发现该基因只在其中一对染色体上有信号,由此明确该材料为附加两条1号染色体的四体材料（2n=14+2）。研究表明秋水仙素不仅可直接诱导出同源多倍体,同时可诱导各种非整倍体植株。【结论】利用秋水仙素处理黄瓜萌动种子,诱导染色体倍性的变化,结合染色体特异探针的荧光原位杂交鉴定,可快速创制并筛选出各种染色体组成的特异新种质。  相似文献   

黄花苜蓿和紫花苜蓿分子核型比较     

窦全文  雷云霆  王海庆 《草地学报》2012,20(4):718-723

黄花苜蓿(Medicago falcata L. 2n=32)是一种重要的野生豆科牧草,由于其突出的抗逆特性,被认为是用来进行苜蓿改良的优异遗传资源。本研究利用染色体荧光原位杂交技术(FISH),以不同荧光物标记的3种重复序列(5S rDNA,45S rDNA和C₀t-1 DNA),对黄花苜蓿和和紫花苜蓿(Medicago sativa L. 2n=32)染色体进行了FISH分析和分子核型比较,以期在染色体水平上揭示二者之间的亲缘关系。结果表明:利用上述重复序列可以较好的将苜蓿32条染色体区分为16对特征不同的染色体。黄花苜蓿和紫花苜蓿绝大多数染色体FISH杂交特征表现一致或高度相似性,分子核型无显著区别,因此二者间在遗传上具有高度的相似性。  相似文献   

偃麦草基因组特异重复序列的分离与应用     

姚涵  汤才国  赵静  郑琪  李滨  郝晨阳  李振声  张学勇 《中国农业科学》2016,49(19):3683-3693

【目的】偃麦草(Thinopyrum)是小麦(Triticum aestivum L.)的多年生野生近缘植物,具有许多可用于小麦品种改良的优异基因。利用基因组特异重复序列可以研究物种的进化关系、绘制染色体指纹图谱及检测外源染色质。克隆十倍体长穗偃麦草(Th.ponticum(Host)Liu and Wang)基因组特异重复序列,可用于鉴定和追踪导入到小麦背景中的偃麦草遗传物质。【方法】通过构建十倍体长穗偃麦草小片段质粒文库,并对文库进行高密度点杂交(Dot-blot hybridization)筛选,结合荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术,获得偃麦草基因组特异的重复序列,分析其在不同基因组及染色体上的分布特点。利用Repeat Masker在小麦族重复序列数据库(Triticeae repeat sequence database,TREP)及NCBI Gen Bank对特异重复序列进行比对分析,并设计偃麦草基因组特异重复序列的PCR引物。通过FISH分析和特异PCR引物扩增,对小麦-偃麦草衍生后代进行鉴定和选择。【结果】获得7条偃麦草基因组特异的重复序列。FISH分析表明,其在十倍体长穗偃麦草和六倍体中间偃麦草所有染色体两臂上均呈弥散型分布,且在不加小麦封阻DNA的情况下,能明确区分八倍体小偃麦中的偃麦草和小麦染色体。将其应用到小麦-偃麦草代换系和易位系的分子细胞学检测中,特异重复序列同样可以在不加封阻的情况下分辨出偃麦草染色体及染色体片段,而且信号相比基因组原位杂交(genomic in situ hybridization,GISH)更加特异和清晰。基于偃麦草基因组特异重复序列开发了90对引物,通过在中国春、十倍体长穗偃麦草和八倍体小偃麦中的扩增产物比较分析,筛选出36对(40%)偃麦草基因组特异PCR标记;利用这些特异引物对109份小麦-偃麦草衍生材料进行扫描,发现10对扩增效果较好的特异引物,其检测效率为73.3%—95%。【结论】获得偃麦草基因组特异的重复序列,开发了特异PCR扩增引物,可应用于小麦背景下偃麦草遗传物质的高效检测和跟踪。  相似文献   

Isolation of a new repetitive DNA sequence from Secale africanum enables targeting of Secale chromatin in wheat background   总被引：1，自引：0，他引：1  

Cheng Liu  Zu-Jun Yang  Guang-Rong Li  Zi-Xian Zeng  Yong Zhang  Jian-Ping Zhou  Zhao-Hui Liu  Zheng-Long Ren 《Euphytica》2008,159(1-2):249-258

A genome specific DNA sequence that detects Secale africanum chromatin incorporated into wheat was developed in this study. Random amplified polymorphic DNA (RAPD) analysis was used to search for genome specific DNA sequences of S. africanum in lines, R111, “mianyang11” (MY11) and wheat-rye 1RS/1BL translocations R25 and R57. A high copy rye-specific DNA segment pSaD15₉₄₀ of the S. africanum genome was obtained. The sequence of pSaD15 did not show any significant homology to other reported sequences in databases and it is therefore a new repetitive sequence of Secale. PCR primers were designed for pSaD15₉₄₀, which amplify a clear 887 bp fragment in S. africanum but not in any wheat. The primers also amplified an 887 bp fragment in other accessions of rye, Chinese Spring-Imperial rye chromosome additions and a diverse range of material carrying different rye chromosomes or chromosomal segments. In situ hybridization showed that probe pSaD15₉₄₀ was specifically hybridized throughout all rye chromosomes arms except for the terminal regions. The advantage of the rye-specific probe developed herein compared to those of previous reports is that it has been shown to be widely applicable to other Secale species. The probe will be useful as a molecular marker for the introgression of S. africanum and other rye chromosome segments into the wheat genome.  相似文献   

小麦贵农775抗条锈病新基因YrGA的研究   总被引：2，自引：0，他引：2  

葛昌斌  廖平安  郭春强  秦素研  徐如宏  张庆勤 《河南农业科学》2008,(7)

小麦抗病种质贵农775具有抗条锈性,研究其抗条锈遗传,对揭示其抗病机制和培育持久抗病品种具有重要意义。以西农97148×贵农775的杂交群体为材料,利用RAPD,SCAR分子标记和荧光原位杂交技术研究其抗性基因来源及在染色体上的位置。贵农775中的YrGA基因来自于簇毛麦,特异标记与抗条锈病基因YrGA(暂时命名)遗传距离为(0.355+0.001)cM,荧光原位杂交结果显示,贵农775为小麦-簇毛麦新的易位系。由于抗条锈病基因Yr26来源于簇毛麦,位于6VS,而与YrGA连锁的特异片段位于染色体长臂,综合分子生物学试验结果,可以推断YrGA很可能是一个来自簇毛麦并与已知抗条锈病基因不同的新基因。  相似文献