马链球菌兽疫亚种烯醇化酶对小鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能的影响   总被引：1，自引：1，他引：0  

陈楷文  华承薇  袁宸  潘飞  蔺辉星  范红结  马喆 《畜牧兽医学报》2020,51(10):2576-2583

旨在研究马链球菌兽疫亚种（Streptococcus equi ssp.zooepidemicus，SEZ）烯醇化酶（enolase，Eno）对小鼠肺泡巨噬细胞（RAW264.7）吞噬能力的影响。通过构建原核表达质粒获得重组烯醇化酶（rEno），采用台盼蓝活细胞计数法，判定在不同处理浓度和时间下rEno蛋白对RAW264.7细胞的细胞毒性。将rEno蛋白与RAW264.7细胞共孵育后，用SEZ作用于细胞并检测细胞吞菌数量，判断RAW264.7细胞对SEZ的吞噬活性。进一步通过活细胞稳定同位素标记技术（SILAC）和蛋白质谱分析技术（LC-MS/MS），筛选到RAW264.7细胞中可能与SEZ Eno存在相互作用的候选蛋白。结果发现，10 μg·mL^-1 rEno蛋白处理对RAW264.7细胞有明显的细胞毒性，且10 μg·mL^-1 rEno蛋白处理RAW264.7细胞2和4 h可显著抑制其对SEZ的吞噬作用（P<0.01、P<0.05）。初步筛选到RAW264.7细胞中动力蛋白激活蛋白亚单位蛋白（dynactin subunit protein 2，Dctn）、整合素α-M蛋白（integrin alpha-M）等17种可能与Eno发生互作的蛋白。本研究获得了rEno重组表达蛋白，发现rEno可减少RAW264.7细胞对SEZ的吞噬，互作蛋白的初步筛选也为进一步揭示Eno在SEZ抗吞噬中的作用机制奠定了基础。  相似文献   

嗜水气单胞菌疫苗的检验及免疫效力试验   总被引：4，自引：1，他引：3  

范红结  黄国庆 《畜牧与兽医》1998,30(6):252-253

选用嗜水气单胞菌（Ａｅｒｏｍｏｎａｓｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ,Ａｈ）疫苗生产用菌Ｊ－１株,以气升式发酵罐２８℃通气培养２８ｈ,制备嗜水气单胞菌疫苗用菌液。半成品检验表明,该疫苗用菌液内无杂菌生长,细菌数量达２．７×１０１０ｃｆｕ／ｍｌ。以０．４％福尔马林溶液３７℃灭活２４ｈ,制成灭活疫苗。经成品检验,该疫苗为棕黄色液体,涂布平板无活菌生长,以１×１０７ｃｆｕ攻击６尾健康鲫鱼,１周内鲫鱼无异常反应。取该疫苗分别以腹腔注射和浸泡两种方式各免疫１２尾鲫鱼,１月后以同源强毒菌株攻击,疫苗的相对存活率分别为８３．３％和５８．３％。  相似文献   

用发酵罐制备嗜水气单胞菌疫苗用菌液培养条件的优化   总被引：5，自引：0，他引：5  

范红结  陈怀青  陆承平 《中国兽药杂志》1998,32(2):11-13

本试验探讨了用发酵罐培养嗜水气单胞菌灭活疫苗生产菌株Ｊ－１株菌液的最佳条件。分别以发酵罐和摇床在不同的培养条件下培养Ｊ－１株制备菌液,前者１２个批次,后者６个批次。比较不同的培养条件对细菌菌体数量及ＨＥＣ毒素产量的影响。结果表明：发酵罐培养优于摇床培养,以产毒素培养基于２８℃发酵罐通气培养Ｊ－１株,培养２８小时效果最佳,培养菌液含菌量达２．９×１０１０ｃｆｕ／ｍｌ,培养液上清的溶血价达２７,发酵液中残糖为０．１２ｇ／Ｌ,符合发酵工艺要求。  相似文献   

猪IL-1β与IL-18SYBRGreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立     

何孔旺  俞正玉  倪艳秀  吕立新  周俊明  张雪寒  李彬  汪伟  温立斌  王小敏  范红结  茅爱华  郭容利 《江苏农业学报》2011,(6):1289-1294

IL-1β和IL-18是重要的促炎症细胞因子,在介导机体炎症反应中起重要作用.为了建立在体外定量检测猪细胞因子IL-1β和IL-18mRNA表达水平的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法,依据GenBank中登录的猪细胞因子基因IL-1β、IL-18及管家基因β-actin核苷酸序列,设计特异性引物,经RT-PC...  相似文献   

1株抗猪流行性腹泻病毒N蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定     

殷一凡  季霖  马千惠  范红结  蔺辉星 《畜牧与兽医》2022,(5):98-104

为鉴定猪流行性腹泻病毒(PEDV)核衣壳(N)蛋白的抗原表位,本研究通过原核表达N蛋白,纯化后免疫BALB/c小鼠,利用细胞融合和亚克隆技术,筛选出1株稳定分泌抗PEDV N蛋白抗体的杂交瘤细胞9B4。经鉴定单克隆抗体9B4的亚型为IgG1型,轻链为Kappa链。腹水抗体ELISA效价为10~6以上。ELISA、Western blot和免疫荧光鉴定结果显示该单克隆抗体反应原性和特异性良好。利用噬菌体展示技术对单克隆抗体9B4进行抗原表位鉴定,获得4个N蛋白的模拟抗原表位(C11、C12、C14和C26)。随后分别以噬菌体阳性克隆为模拟抗原,对临床PEDV血清样品进行检测,发现其均能与猪PEDV阳性血清发生特异性结合,而与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)阳性血清、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)阳性血清不反应,说明本研究获得的N蛋白模拟表位可用于PEDV抗体的检测,有助于PED流行病学调查和PEDV疫苗免疫效果的评价。  相似文献   

青岛地区空肠弯曲菌的分离鉴定及Jej基因序列分析     

张维  盖文燕  王娟  王君玮  范红结  曲志娜  黄秀梅  翟海华 《河南农业科学》2014,43(7)

为调查青岛地区空肠弯曲菌(C.jejuni)的流行状况,采集青岛地区不同分离地点的鸡盲肠棉拭子及内容物98份,经分离鉴定得到23株C.jejuni,分离率达到23.47％.应用C.jejuni的马尿酸酶(Jej)基因作为分子标记,对分离到的23株C.jejuni分离株和4株C.jejuni上海分离株进行分析,并与8株已知的C.jejuni序列进行相似性比较,构建系统进化树,对其系统进化关系进行分析.结果表明,分离菌株及已知菌株均能扩增出774 bp的Jej基因片段,得到11个不同的序列,有11个核苷酸变异位点,变异率为0.13％～1.42％;基于Jej基因构建的进化树表明,分离株分为2个分支,其中4株分离株与C.J-NCTC11168和C.J-IA3902亲缘关系近,1株与C.J-RM1221、C.J-S3亲缘关系近,2株与上海分离株亲缘关系比较近;2株与C.J-81116、C.J-M1组成另外一个分支.  相似文献   

板蓝根多糖对雏鸡红细胞免疫黏附功能的研究     

王量  范红结  姚毅  马红艳 《黑龙江畜牧兽医》2014,(6):89-90

<正>板蓝根具有清热解毒、凉血利咽的功效,含有多糖、氨基酸、谷甾醇等成分。板蓝根多糖(BPS)能增强机体免疫系统的功能。目前,BPS对青脚麻雏鸡红细胞免疫功能的研究尚未见报道,本试验通过研究板蓝根多糖对青脚麻雏鸡红细胞免疫黏附功能的影响,探讨板蓝根多糖的作用机制,确定板蓝根多糖在兽医实践中的应用价值。  相似文献   

鸭疫里默氏杆菌GroEL蛋白的原核表达和单克隆抗体制备     

侯湾湾  韩先干  王少辉  王小兰  岳嘉蘋  曹守林  范红结  于圣青 《中国动物传染病学报》2014,(2):58-64

本试验旨在研制鸭疫里默氏杆菌GroEL蛋白的单克隆抗体。将鸭疫里默氏杆菌WJ4菌株的groEL基因进行原核表达,重组蛋白经过纯化后作为免疫原免疫BALB/c小鼠。经过3次免疫后,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,用间接ELISA筛选阳性细胞株并进行3次亚克隆后制备小鼠腹水单克隆抗体。共获得2株稳定分泌鸭疫里默氏杆菌GroEL单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1G2B6和1G2F10。2株单克隆抗体均为IgG1亚类。腹水单克隆抗体ELISA效价达到1:102 400。Western blot检测结果表明2株单克隆抗体均能与鸭疫里默氏杆菌血清1、2和10型菌株发生特异性结合,而与禽致病性大肠杆菌、沙门氏菌和禽巴氏杆菌菌株无反应性。本研究成功制备了稳定性好、特异性强的鸭疫里默氏杆菌GroEL单克隆抗体,为进一步研制基于抗体检测鸭疫里默氏杆菌抗原的试剂盒奠定了基础。  相似文献   

马链球菌兽疫亚种类M基因和猪链球菌2型mrp基因片段的融合表达及仔猪免疫试验   总被引：7，自引：0，他引：7  

范红结  陆承平  唐家琪 《南京农业大学学报》2003,26(4):78-81

将含猪链球菌 2型mrp及马链球菌兽疫亚种类M基因融合片段的重组质粒转化大肠杆菌BL 2 1,经异丙基硫代 β D 半乳糖苷 (IPTG)诱导 ,表达了相对分子质量为 6 0 0 0 0左右的融合蛋白。利用组氨酸亲和层析柱 ,获得了纯化的融合蛋白 ,质量浓度为 4 2 μg·mL-1。以纯化的融合蛋白、宿主菌BL 2 1经IPTG诱导表达后的超声波破碎上清、马链球菌兽疫亚种ATCC 35 2 4 6株和猪链球菌 2型HA 980 1株制备的二联灭活苗为免疫原 ,分别免疫 30头仔猪。初次免疫 1月后 ,以同样的剂量再次免疫 ,3周后以 5×LD50 的ATCC 35 2 4 6和HA 980 1强毒株进行攻击。结果 ,纯化融合蛋白免疫组的免疫保护率达 6 0 % ,BL 2 1上清免疫组的免疫保护率为 5 0 % ,全菌二联灭活菌苗的免疫保护率达 90 %。  相似文献   

非典型犬瘟热病毒核衣壳蛋白基因序列分析及其在大肠杆菌中的表达     

毕振威  王永山  范红结  王智群  吴晓悠  马金荣  欧阳伟  张海彬 《中国预防兽医学报》2011,33(8)

为分析当地非典型犬瘟热病毒(CDV)核衣壳蛋白(N)基因的序列特征及其表达产物的抗原性,根据已发表CDV的N基因序列设计引物,用RT-PCR方法从引起非典型症状的CDV细胞培养物中扩增N基因,进行克隆和序列分析,结果表明:该非典型CDV的N基因与已发表的12个CDV强毒株的核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别在96.6%～99.2%和97.9%～99.4%之间,与已发表的4个CDV疫苗弱毒株的同源性分别在93.2%～93.6%和96.4%～97.5%之间;在N基因系统发育进化树上,非典型CDV与12个强毒株处在同一亚群,而且与9个中国分离毒株的亲缘关系近于3个国外毒株。N基因在大肠杆菌中表达的重组N蛋白的分子量为62 ku,主要以包涵体的形式存在;用western blot分析,重组N蛋白可与CDV阳性血清发生特异性反应;以纯化的重组N蛋白为抗原建立的CDV抗体间接ELISA检测方法具有良好的特异性。  相似文献